一种重组大肠杆菌菌种冻干保藏方法技术

本发明专利技术涉及一种重组大肠杆菌菌种冻干保藏方法，涉及生物技术领域。本发明专利技术的一种重组大肠杆菌菌种冻干保藏方法，是以配方为脱脂奶粉100.00

【技术实现步骤摘要】
一种重组大肠杆菌菌种冻干保藏方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种重组大肠杆菌菌种冻干保藏方法。

技术介绍

[0002]菌种资源是人类的宝贵资源，国内外研究机构对菌种保藏都给予极大的关注，菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有形状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。菌种保藏的原理是根据生理生化特性，人为创造条件尽量降低生物体内的代谢活动，以达到延长生命、减少变异的目的。在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，因此菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的，其中低温可减缓机体细胞的酶活，降低新陈代谢，达到保藏菌种的目的，同时会导致菌体诱发菌丝自溶机制。无论采用何种保藏方法，首先应该挑选典型菌种的优良种来进行保藏，最好保藏它们的休眠体，如分生孢子、芽孢等；其次，应根据微生物生理、生化特点，人为的创造环境条件，使微生物长期处于代谢不活泼、生长繁殖受本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组大肠杆菌菌种冻干保藏方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、材料准备冻干保护剂配制：冻干保护剂配方：脱脂奶粉100.00
±
0.50g/L、海藻糖20.00
±
0.50g/L、蔗糖30.00
±
0.50g/L、谷氨酸钠15.00
±
0.50g/L；按照上述配方配制冻干保护剂，密封，于2
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8℃保藏；50％甘油配制：按照甘油与水体积比为1:1量取，配制得到50％甘油，高温灭菌，备用；步骤2、菌种复苏、传代使用抗生素浓度为100μg/mL的LB培养基进行重组大肠杆菌菌种复苏和传代，将重组大肠杆菌菌种进行复苏，按比例接种，培养时间为10
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18h，采用革兰氏染色法进行镜检，若发生污染则立即停止；传二代种，按照比例接种，培养时间为4
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9h，镜检同复苏过程；传三代种，按照比例接种，培养时间为10
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18h，镜检同复苏过程；传四代种，按照比例接种，培养时间为2
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4h，镜检同复苏过程，采用吸光度法对菌种活力进行检测，达到所要求的OD600值在0.6～1.0；步骤3、甘油菌分装按体积比1:1依次抽取50％甘油和步骤2的菌液加入到冻存管中，盖紧冻存管瓶盖，上下翻转，使其充分混匀；步骤4、冻干菌分装先将步骤3的菌液置于离心机中离心，抽取步骤1配制的冻干保护剂于离心管中，使其与菌体充分混匀，目测没有沉淀，按比例倒入冻干保护剂1:1定容，上下摇晃使其充分混匀，用移液枪抽取菌液分装于已灭菌西林瓶中，分装后半加塞方式加上已灭菌胶塞，转入铝盒并...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玉娜，郭文英，白冰，鞠蒙蒙，杜研，许乐，宗贵宾，李士伟，
申请(专利权)人：长春圣金诺生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：