一种T制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种T

【技术实现步骤摘要】
一种T
N
抗原的制备方法


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种T
N
抗原的制备方法。

技术介绍

[0002]蛋白质糖基化通常可分为两大类：N连接和O连接。在N型连接糖蛋白中，N
‑
乙酰葡萄糖胺单元(GlcNAc)与天冬酰胺氨基酸侧链的N以β
‑
糖苷键相连。在O型连接糖蛋白中，N
‑
乙酰半乳糖胺(GalNAc)单元与丝氨酸或苏氨酸的羟基以α
‑
糖苷键相连，生成核心结构通常称为T
N
抗原：
[0003][0004]此核心结构的C(3)
‑
OH或C(6)
‑
OH可被取代形成多种结构基序。这些抗原广泛分布于细胞表面粘蛋白糖蛋白中，参与细胞与癌症转移相关的粘附事件，尤其是T
N
抗原，它在大多数上皮癌如肺癌、结肠癌、胃癌和乳腺癌中被高度表达。因此，这种T
N
抗原作为生物标志物和肿瘤疫苗治疗的治疗靶点。
[0005]在研制癌症疫苗时，需要结构明确、纯度高的T
N
抗原作为单个肿瘤抗原或疫苗的组成部分。然而，从天然来源获得足够数量的同质形式的T
N
抗原具有挑战性。在许多情况下，高纯度T
N
抗原只能通过化学或酶法合成获得。
[0006]化学合成T
N
抗原往往涉及糖苷键的连接，而区域和立体选择性问题是糖苷键生成的主要挑战。在过去几十年里，在合成复杂寡糖方面已经取得了巨大进展。然而，1,2
‑
顺式糖苷键的立体选择性构建仍然是化学合成中最困难的问题之一。
[0007]因此，寻找一种高立体选择性的合成方法就成为了本领域技术亟需解决的技术问题。

技术实现思路

[0008]有鉴于此，本专利技术的目的是针对现有技术中存在的立体选择性低、原料价格高且反应条件苛刻的技术问题，提供一种实验操作简单、反应体系温和、无其它副反应发生、反应高效且立体选择性高、原料价格低廉的制备方法。
[0009]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0010]一种T
N
抗原的制备方法，以2
‑
脱氧
‑2‑
叠氮半乳糖基PTFAI为供体，以醇为受体，在氩气保护下，与三苯基氧化磷共同溶解于干燥二氯甲烷中，并在室温下加入新鲜干燥的分子筛搅拌15分钟，随后滴加碘代三甲硅烷TMSI于室温下反应，完成糖苷化反应。
[0011]考虑到T
N
抗原结构中N
‑
乙酰半乳糖胺(GalNAc)单元与丝氨酸或苏氨酸的羟基正
是以1,2
‑
顺式糖苷键相连，本专利技术以2
‑
脱氧
‑2‑
叠氮半乳糖基PTFAI为供体，以醇为受体，采用TMSI和Ph3PO融合试剂调控及酰基远程参与效应高立体选择性合成T
N
抗原，避免了使用贵金属活化剂(AgClO4或Ni(4
‑
F
‑
PhCN)4(OTf)2等)和强碱(P4‑
t
‑
Bu、KH等)，实验操作简单，反应体系温和，无其它副反应发生，反应高效且立体选择性高、原料价格低廉。
[0012]进一步的，所述糖苷化产物的制备方法为：
[0013][0014]在氩气保护条件下，将2
‑
脱氧
‑2‑
叠氮半乳糖基PTFAI供体溶于干燥的二氯甲烷中，依次加入新干燥的3A分子筛、三苯基氧化磷，室温搅拌15min后，加入碘代三甲硅烷，室温搅拌1h，加入HOR，移入30℃油浴反应，薄层色谱监测反应完后，加入饱和硫代硫酸钠淬灭反应，用二氯甲烷萃取三次，所得有机相用饱和氯化钠洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化得到糖苷化产物；其中，
[0015]R3为B
Z
、Lev、Ac等酰基官能团；
[0016]R4为B
Z
、Lev、Ac等酰基官能团；
[0017]R6为Bn、Lev、TBDPS、Ac、Bz等醚类或酯类基团。
[0018]更进一步的，所述糖苷化产物的制备方法为：
[0019][0020]在氩气保护条件下，将2
‑
脱氧
‑2‑
叠氮半乳糖基PTFAI供体2溶于干燥的二氯甲烷中，依次加入新干燥的3A分子筛、三苯基氧化磷，室温搅拌15min后，加入碘代三甲硅烷，室温搅拌1h，加入N
‑
苄氧羰基
‑
L
‑
丝氨酸苄酯，移入30℃油浴反应5.5天，加入饱和硫代硫酸钠淬灭反应，用二氯甲烷萃取三次，所得有机相用饱和氯化钠洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化得到白色固体3。
[0021]更进一步的，所述T
N
抗原的制备方法还包括基团处理，所述基团处理的方法为：
[0022][0023]在氩气保护条件下，将白色固体3用吡啶溶解，再滴加硫代乙酸，室温反应过夜，薄层色谱监测反应完全，将反应液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化得到中间体3
‑
a；
[0024]将上述中间体3
‑
a用甲醇溶解，再依次加入0.6mL水、0.06mL冰乙酸、10％钯碳，在反应体系中通入氢气，室温反应6h，薄层色谱监测反应完全，将反应液用直径25mm聚醚砜微孔滤膜过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，得到白色固体3
‑
b；
[0025]在氩气保护条件下，将上述白色固体3
‑
b用甲醇溶解，再依次加入1,4
‑
二氧六环、
氢氧化钠水溶液，室温反应过夜，薄层色谱监测反应完全；用冰乙酸调节反应溶液至pH＝7,反应溶液用旋转蒸发仪浓缩，凝胶柱层析纯化得到白色固体4即为T
N
抗原。
[0026]本专利技术中，所述T
N
抗原的制备方法还包括半乳糖基PTFAI供体的制备方法：
[0027][0028]在氩气保护条件下，将2
‑
脱氧
‑2‑
叠氮
‑
3,4,6
‑
三
‑
O
‑
苯甲酰基
‑
α/β
‑
D
‑
吡喃半乳糖半缩醛1、2,2,2
‑
三氟
‑
N
‑
苯基亚氨代乙酰氯溶于丙酮中，再加入K2CO3，室温反应过夜，薄层色谱监测反应完全。用硅藻土过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化得到的白色固体供体2即为供体2
‑
脱氧
‑2‑
叠氮半乳糖基PTFAI。
[0029]在一些实施例中，本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种T
N
抗原的制备方法，其特征在于，以2
‑
脱氧
‑2‑
叠氮半乳糖基N
‑
苯基乙酰亚胺酯PTFAI为供体，以醇为受体，在氩气保护下，与三苯基氧化磷共同溶解于干燥二氯甲烷中，并在室温下加入新鲜干燥的分子筛搅拌15分钟，随后滴加碘代三甲硅烷TMSI于室温下反应，完成糖苷化反应。2.根据权利要求1所述的T
N
抗原的制备方法，其特征在于，糖苷化产物的制备方法为：在氩气保护条件下，将2
‑
脱氧
‑2‑
叠氮半乳糖基N
‑
苯基乙酰亚胺酯PTFAI供体溶于干燥的二氯甲烷中，依次加入新干燥的3A分子筛、三苯基氧化磷，室温搅拌15min后，加入碘代三甲基硅烷，室温搅拌1h，加入HOR醇类受体，移入30℃油浴反应，薄层色谱监测反应完后，加入饱和硫代硫酸钠淬灭反应，用二氯甲烷萃取三次，所得有机相依次经饱和氯化钠洗涤、无水硫酸钠干燥、过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化得到糖苷化产物；其中，R3为B
Z
、Lev、Ac等酰基官能团；R4为B
Z
、Lev、Ac等酰基官能团；R6为Bn、Lev、TBDPS、Ac、Bz等醚类或酯类基团。3.根据权利要求2所述的一种T
N
抗原的制备方法，其特征在于，所述糖苷化产物的制备方法为：在氩气保护条件下，将2
‑
脱氧
‑2‑
叠氮半乳糖基N
‑
苯基乙酰亚胺酯PTFAI供体2溶于干燥的二氯甲烷中，依次加入新干燥的3A分子筛、三苯基氧化磷，室温搅拌15min后，加入碘代三甲硅烷，室温搅拌1h，加入N
‑
苄氧羰基
‑
L
‑
丝氨酸苄酯，移入30℃油浴反应5.5天，加入饱和硫代硫酸钠淬灭反应，用二氯甲烷萃取三次，所得有机相经饱和氯化钠洗涤、无水硫酸钠干燥、过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，硅胶柱层析纯化得到白色固体3。4.根据权利要求3所述的一种T
...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖国志，首坤秀，张云琴，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：