用牛免疫缺陷病毒Gag蛋白的重组病毒样颗粒制造技术

本申请提供了包含一种或多种不同类型的目标病原体蛋白质的牛免疫缺陷病毒gag蛋白质(“Bgag”)重组病毒样颗粒(“VLPs”)，还提供了包含新型Bgag VLPs的组成成分以及制造和使用新型Bgag VLPs的方法，从而为致命流感提供显著保护。保护。保护。

【技术实现步骤摘要】
用牛免疫缺陷病毒Gag蛋白的重组病毒样颗粒
本申请是申请日为2016年7月1日、申请号为201680050161.9、专利技术名称为“用牛免疫缺陷病毒Gag蛋白的重组病毒样颗粒”的分案申请。交叉引用在先申请
[0001]本申请要求2015年7月2日递交的美国临时申请No.62/188,084的优先权，该临时申请在此全部引用作为参考并转让至本申请的受让人。政府利益
[0002]本专利技术部分得到了美国政府的支持，国家卫生研究院国家过敏和传染病研究所授予的拨款号为AI111532
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02，美国农业部国家食品和农业研究所授予的拨款号为2011
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33610
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30433。美国政府在本专利技术上可能具有一定的权利。


[0003]一种病毒样颗粒(“VLP”)的疫苗系统或平台用于诱发对一种或多种不同病原体的免疫应答以及用于制作并使用所述新系统或平台的方法。

技术介绍

[0004]已提出各种各样的免疫系统或平台。由于这些免疫系统或平台不是最理想的，所以在本领域中存有改进系统或平台的需求，包括能够对多种病原体有效的系统或平台。

技术实现思路

[0005]在此描述的是一种包含表达或共表达一种或多种不同目标病原体蛋白质的牛免疫缺陷病毒gag蛋白(“Bgag”)的新型VLP。在某些实施例中，目标病原体蛋白质是一种被定位到VLP膜的跨膜蛋白质。在某些实施例中，目标病原体蛋白质是从包括正黏液病毒，线状病毒，冠状病毒和逆转录酶病毒的一种或多种不同病毒病原体中选中。
[0006]在某些实施例中目标流感病毒是甲型流感病毒，跨膜蛋白质由一种或多种不同的HA亚型1
‑
18(“H1
”‑“
H18”)和/或NA亚型1
‑
11(“N1
”‑“
N11”)组成。例如，在某些实施例中，跨膜蛋白质包含四种不同亚型的HA和一种亚型的NA。在另一个例子中，在某些其他的实施例中，跨膜蛋白质包含三种不同亚型的HA和一种亚型的NA，等等。作为另一例子，在某些实施例中，在新型Bagag VLPs中共表达的四种HAs是H5，H7，H9和H10。
[0007]在某些实施例中，在新型Bgag VLPs中表达的一种或多种不同的甲型流感跨膜蛋白质仅能够结合到鸟类或人类宿主细胞，然而在某些其他实施例中，一种或多种不同的跨膜蛋白质与鸟类和人类宿主细胞都结合到。
[0008]在某些实施例中，在新型Bgag VLPs共表达的甲型流感跨膜蛋白质能够形成同源三聚体，然而在某些其他实施例中，跨膜蛋白质形成异源三聚体或同源三聚体和异源三聚体的混合物。
[0009]任何在此描述的VLPs中，可以基因修饰目标病原体蛋白质。例如，在某些实施例中，目标病原体蛋白质的可变区能够从基因学角度被去除。作为另一例子，在某些实施例
中，目标病原体蛋白质的C
‑
末端能够被修饰以增加与Bgag的结合效率。作为另一例子，在某些实施例中，目标病原体蛋白质可以是嵌合体。这种嵌合体的一个例子是通过基因修饰目标埃博拉病毒糖蛋白的C
‑
末端以包含流感HA的跨膜和/或C
‑
末端区而制备的嵌合体。也能够基因修饰Bgag。例如，在某些实施例中，Bgag被修饰以增加与目标病原体蛋白质的结合效率。
[0010]在某些实施例中，新型Bgag VLPs能够保护或诱发受试者对一种或多种不同病原体的免疫应答。在某些实施例中，新型Bgag VLPs能够保护或诱发受试者对包括不同流感类型和亚型的一种或多种不同类型和/或亚型的病毒的免疫应答。在某些实施例中，新型Bgag VLPs能够保护或诱发受试者对包含H5，H7，H9和/或H10的流感亚型的免疫应答。
[0011]在某些实施例中，新型Bgag VLPs具有大于约100nm的直径，且优选地从约150nm至约200nm，例如，约155nm，约160nm，约170nm，约175nm，约180nm，约185nm，约190nm，约195nm，它们的组合等。
[0012]在某些实施例中，在VLP膜上每一个Bgag VLP包含平均超过375个蛋白突刺，优选地约375个到约800个突刺，且更优选地约800个突刺。在其他实施例中，突刺的数量可以为约400个，约450个，约500个,约550个,约600个,约650个,约700个,约750个,它们的组合等。
[0013]在某些实施例中，每一个Bgag VLP包含大的表面积，优选地表面积大于目标病原体蛋白质之一源自的病原体。
[0014]还描述了包含能够保护或诱发受试者对一种或多种不同病原体的疫苗应答的Bgag VLP的新型疫苗。在某些实施例中，包含Bgag VLP的新型疫苗能够保护或诱发受试者对包括不同流感亚型的一种或多种不同类型和/或亚型的病毒的免疫应答。在某些实施例中，包含Bgag VLPs的新型疫苗能够保护或诱发受试者对包含H5,H7,H9和/或H10的流感亚型的免疫应答。
[0015]还描述了用于制造新型Bgag VLPs的新型DNA载体。在某些实施例中，DNA载体在载体病毒中表达以制备新型Bgag VLPs，并且优选地载体病毒是重组杆状病毒(“rBV”)。在某些实施例中，包含DNA载体的rBV在真核细胞，优选草地贪夜蛾(“Sf9”)细胞中表达。在某些实施例中，每一个目标病原体蛋白质基因受单个启动子控制，并优选单个多角体蛋白启动子。
[0016]还描述了使用包含一个Bgag基因和来自一种或多种不同目标病原体的至少一个基因的DNA载体制备新型Bgag VLPs或疫苗的方法，所述基因全部组成串联且每一个基因受启动子控制，优选多角体蛋白启动子；一种载体病毒，优选rBV；以及一种真核细胞，优选Sf9。
[0017]还描述了一种区分Bgag VLP接种疫苗的受试者与未接种疫苗的受试者的方法。
附图说明
[0018]图1显示了表达流感基因的Bgag VLP构建体和M1
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VLP构建体示意图。
[0019]图2显示了使用火鸡红细胞从图1的构建体产生的Bgag VLP或M1 VLP的血凝反应试验。
[0020]图3显示了由图1的构建体经H1特异性单克隆抗体染色产生的流感VLPs的蛋白质免疫印迹。
[0021]图4显示了使用考马斯蓝染色的SDS
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PAGE凝胶从图1的构建体产生的流感VLPs的蛋白质表达谱。
[0022]图5显示了以PFU测量的由图1的构建体产生的流感病毒VLPs中NA的酶活性。
[0023]图6显示了呈现流感NA和H1蛋白质的Bgag VLP的电子显微照片。
[0024]图7显示了呈现流感NA和H1蛋白质的M1 VLPs的电子显微照片。
[0025]图8显示了表达流感NA和H10基因的Bgag VLP示意图。
[0026]图9显示了由图8的构建体产生的流感H10 Bgag VLPs本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.牛免疫缺陷病毒gag蛋白(Bgag)病毒样颗粒(VLP)，其包含Bgag，并且还包含一种或多种不同的目标病原体蛋白质。2.如权利要求1所述的Bgag VLP，其中，所述一个或多种不同的目标病原体蛋白质定位于VLP膜上。3.如权利要求1所述的Bgag VLP，其中，所述一种或多种不同的目标病原体蛋白质是病毒蛋白质。4.如权利要求1所述的Bgag VLP，其中，所述一种或多种不同的目标病原体蛋白质来源于选自正粘病毒、线状病毒、冠状病毒和逆转录酶病毒的一种或多种病毒病原体。5.如权利要求1所述的Bgag VLP，其中，所述一种或多种不同目标病原体蛋白质源自流感病毒。6.如权利要求1所述的Bgag VLP，其特征在于，所述一种或多种不同目标病原体蛋白质是基因修饰的。7.如权利要求1所述的Bgag VLP，其中，所述Bgag VLP能够保护或诱发受试者内对一种或多种不同病原体的免疫应答。8.包含权利要求1
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7中任一项所述的Bgag VLP的疫苗。9.用于制备权利要求1
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7中任一项所述的Bgag VLP的转移载体质粒，所述转移载体质粒包含Bgag基因，一种或多种来自不同目标病原体蛋白质的基因，以及一种或多种启动子。10.制备权利要求1
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7中任一项所述的Bgag VLP的方法，所述方法包括步骤：将Bgag基因和来自一种或多种不同目标病原体蛋白质的一种或多种基因各自在...

【专利技术属性】
技术研发人员：彼得，
申请(专利权)人：梅迪根股份有限公司，
类型：发明
国别省市：