表达鸡新城疫病毒F基因的重组火鸡疱疹病毒及其构建方法和应用技术

本发明专利技术本发明专利技术属于基因工程疫苗技术领域，具体涉及表达鸡新城疫病毒F基因的重组火鸡疱疹病毒及其构建方法和应用。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，将含优化的新城疫基因VII型株的F基因与SV40融合表达盒插入HVT US2病毒非复制区。本发明专利技术获得的重组病毒rHVT

【技术实现步骤摘要】
表达鸡新城疫病毒F基因的重组火鸡疱疹病毒及其构建方法和应用


[0001]本专利技术属于基因工程疫苗
，具体涉及表达鸡新城疫病毒F基因的重组火鸡疱疹病毒及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]新城疫病毒(Newcastle disease virus)，主要危害鸡、珠鸡和火鸡，在被侵袭的鸡群中迅速传播，强毒株感染后致死率可达100％。鸡新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)引起的一种急性且高度传染性的疾病，给世界养禽业造成巨大的经济损失。目前普遍认为NDV只有一个血清型，但有多个基因型，我国流行株为NDV基因
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型。随着养禽业的迅猛发展，我国对ND的防控愈加重视，接种疫苗是NDV防控最有效的手段之一。活疫苗和灭活疫苗作为多年来防控NDV的传统疫苗，有效地控制了ND的传播和发病，但是传统疫苗在免疫原性、安全性和稳定性等方面都存在着一定的不足，因此开发更加安全有效的新型疫苗是我们目前的研究重点。
[0003]火鸡疱疹病毒(Turke本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.表达鸡新城疫病毒F基因的重组火鸡疱疹病毒，其特征在于，将NDV Fopt基因表达盒插入HVT病毒复制非必需US2区，位置为140,065nt
‑
140,913nt之间。2.根据权利要求1所述的表达鸡新城疫病毒F基因的重组火鸡疱疹病毒，其特征在于，所述鸡新城疫病毒F基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:1。3.根据权利要求1所述的表达鸡新城疫病毒F基因的重组火鸡疱疹病毒，其特征在于，所述NDV Fopt基因表达盒的序列如SEQ ID NO:5所示。4.根据权利要求1所述的表达鸡新城疫病毒F基因的重组火鸡疱疹病毒，其特征在于，所述NDV Fopt基因表达盒由SV40启动子、优化的F基因和BGH poly A及终止子依次连接而成；所述SV40启动子核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述BGH poly A核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。5.一种转移载体质粒，其特征在于，所述转移载体质粒携带eGFP筛选基因和由SV40序列控制下的NDV Fopt基因表达盒。6.根据权利要求1～4任一项所述的表达鸡新城疫病毒F基因的重组火鸡疱疹病毒的构建方法，其特征在于，针对HVT US2靶位点设计和合成sgRNA序列，构建CRISPR/Cas9质粒pX459
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HVT US2
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sgRNA；构建带有eGFP筛选基因及由SV40序列控制下的NDV Fopt基因表达盒的转移载体pT
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【专利技术属性】
技术研发人员：钱琨，申可，石彬，秦爱建，邵红霞，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：