用于非小细胞肺癌CYFRA21-1检测的电致化学发光免疫传感器及检测方法技术

本发明专利技术提供了一种用于非小细胞肺癌CYFRA21

【技术实现步骤摘要】
用于非小细胞肺癌CYFRA21
‑
1检测的电致化学发光免疫传感器及检测方法


[0001]本专利技术涉及电化学检测
，具体涉及一种用于非小细胞肺癌CYFRA21
‑
1检测的电致化学发光免疫传感器及检测方法。

技术介绍

[0002]肺癌是世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，也是世界范围内对人类健康最严重的威胁之一。非小细胞肺癌(NSCLC)是最常见的肺癌类型，占所有肺癌病例的80％以上。其中，大约有75％的NSCLC患者在被诊断时已经处于晚期，生存率较低。因此，需要开发一种经济、灵敏、快速的非小细胞肺癌检测方法，在癌症发展的早期给予正确、及时的治疗，从而抑制癌症的进一步发展。在众多NSCLC生物标志物中，细胞角蛋白片段抗原21
‑
1(CYFRA21
‑
1)受到了更多关注。CYFRA21
‑
1是细胞角蛋白19的36kDa片段，位于上皮细胞的细胞骨架中，在NSCLC患者的血清中高表达，被认为是诊断NSCLC最重要的候选者之一。目前，常用的CYFRA21
‑
1检测方法包括组织学和血清学检测方法，其中组织学检测方法包括免疫组化(IHC)、荧光原位杂交(FISH)等，但上述方法都属于形态学检测，受主观影响很大，同时组织学检测需要取得病理标本，对未取得癌组织病理的患者无法判断其CYFRA21
‑
1状态，并且也难以多次检测。

技术实现思路

[0003]为了解决现有技术中的问题，本专利技术提供一种用于非小细胞肺癌CYFRA21
‑
1检测的电致化学发光免疫传感器。
[0004]除特殊说明外，本专利技术所述份数均为重量份，所述百分比均为质量百分比。
[0005]为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
[0006]一种用于非小细胞肺癌CYFRA21
‑
1检测的电致化学发光免疫传感器，其特征在于，用于非小细胞肺癌CYFRA21
‑
1检测的电致化学发光免疫传感器的构建方法为：
[0007]将用食人鱼洗液浸泡后经Al2O3粉末抛光呈镜面的玻碳电极在0.5M H2SO4中进行电化学活化，然后用超纯水冲洗，干燥得到干燥的玻碳电极；将干燥的玻碳电极浸入1％HAuCl4溶液沉积30
‑
35S，室温干燥后用滴加Ab1溶液，4
‑
5℃孵育10
‑
12h，然后滴加1％牛血清蛋白(BSA)溶液，4
‑
5℃孵育0.5
‑
1h，再滴加目标物细胞角蛋白片段抗原21
‑
1(CYFRA21
‑
1)溶液，4
‑
5℃孵育1
‑
1.5h，最后滴加信号探针CS@La
‑
TCPP/Au/Ab2，溶液，4
‑
5℃孵育1.5
‑
2h，即得到用于非小细胞肺癌CYFRA21
‑
1检测的电致化学发光免疫传感器。
[0008]所述信号探针CS@La
‑
TCPP/Au/Ab2，溶液的制备步骤为：向CS@LaTCPP/Au分散液中加入Ab2溶液，冰浴搅拌10
‑
12h，离心，沉淀物水洗，将沉淀物重新分散于超纯水中，即得到CS@La
‑
TCPP/Au/Ab2的信号探针溶液。
[0009]所述CS@LaTCPP/Au分散液的制备步骤为：将AuNPs加入到CS@La
‑
TCPP分散液中，在常温下搅拌7
‑
8h，离心、沉淀物洗涤，再将沉淀物分散在超纯水中，即得到CS@La
‑
TCPP/Au分
散液。
[0010]所述CS@La
‑
TCPP分散液的制备步骤为：壳聚糖溶于冰醋酸溶液(0.1wt％)中，分散均匀，取La
‑
TCPP分散在超纯水中，加入CS溶液，磁力搅拌10
‑
12h得到分散均匀的CS@La
‑
TCPP溶液；离心、沉淀物用超纯水洗涤后，再将沉淀物分散于超纯水中，得到CS@La
‑
TCPP分散液。
[0011]所述La
‑
TCPP的制备步骤为：将六水合硝酸镧(La(NO3)3·
6H2O)、TCPP分别溶于N,N
‑
二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，分别室温超声10
‑
12min，然后，在硅油浴中将TCPP溶液加热到100
‑
130℃，再加入La(NO3)3·
6H2O溶液，在连续磁力搅拌下，将混合物在100
‑
130℃条件下反应5
‑
6h，冷却至室温后离心、沉淀用纯水洗涤三次，烘箱50
‑
60℃干燥，得到黑色的La
‑
TCPP。
[0012]所述Au纳米粒子的制备步骤为：将1％HAuCl4溶液加入至超纯水中煮沸，然后加入1％柠檬酸三钠溶液继续煮沸15min，冷却后用超纯水恢复至原体积得透明的酒红色溶液即为金纳米粒子(AuNPs)。
[0013]一种用于非小细胞肺癌CYFRA21
‑
1检测的电致化学发光免疫传感器，其特征在于，采用如下步骤：
[0014](1)信号探针的制备；
[0015]1)La
‑
TCPP：将16.42mg六水合硝酸镧(La(NO3)3·
6H2O)、30mg TCPP分别溶于4mL和1ml N,N
‑
二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，室温超声10min，然后，在硅油浴中将TCPP溶液加热到120℃，再缓慢加入La(NO3)3·
6H2O溶液。在连续磁力搅拌下，将混合物在该温度下保持反应6h。冷却至室温后、离心、纯水洗涤三次后，烘箱60℃干燥，得到黑色的La
‑
TCPP材料；
[0016]2)CS@La
‑
TCPP分散液：称取10mg的壳聚糖(CS)溶于10mL的冰醋酸溶液(0.1wt％)中，分散均匀,称取1mg步骤1)制得的La
‑
TCPP分散在1ml超纯水中，加入1ml的CS溶液中，磁力搅拌12h得到分散均匀的CS@La
‑
TCPP溶液；离心、用超纯水洗涤后，再将沉淀物沉淀分散于1mL超纯水中，得到CS@La
‑
TCPP分散液；
[0017]3)Au纳米粒子：将1mL 1％HAuCl4溶液加入至100mL超纯水中煮沸，然后迅速加入2.5mL 1％柠檬酸三钠溶液继续煮沸15min，冷却后用超纯水恢复至原体积得透明的酒红色溶液即为金纳米粒子(AuNPs)，于4℃保存。
[0018]4)CS@La
‑
TCPP/Au：取450μL步骤3)制得的AuNPs加入步本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电致化学发光免疫传感器，其特征在于，用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电致化学发光免疫传感器的构建方法为：将用食人鱼洗液浸泡后经Al2O3粉末抛光呈镜面的玻碳电极在0.5M H2SO4中进行电化学活化，然后用超纯水冲洗，干燥得到干燥的玻碳电极；将干燥的玻碳电极浸入1％HAuCl4溶液沉积30
‑
35S，室温干燥后用滴加Ab1溶液，4
‑
5℃孵育10
‑
12h，然后滴加1％牛血清蛋白(BSA)溶液，4
‑
5℃孵育0.5
‑
1h，再滴加目标物细胞角蛋白片段抗原21
‑
1(CYFRA21
‑
1)溶液，4
‑
5℃孵育1
‑
1.5h，最后滴加信号探针CS@La
‑
TCPP/Au/Ab2，溶液，4
‑
5℃孵育1.5
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2h，即得到用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电致化学发光免疫传感器；所述信号探针CS@La
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TCPP/Au/Ab2，溶液的制备步骤为：向CS@LaTCPP/Au分散液中加入Ab2溶液，冰浴搅拌10
‑
12h，离心，沉淀物水洗，将沉淀物重新分散于超纯水中，即得到CS@La
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TCPP/Au/Ab2的信号探针溶液；所述CS@LaTCPP/Au分散液的制备步骤为：将AuNPs加入到CS@La
‑
TCPP分散液中，在常温下搅拌7
‑
8h，离心、沉淀物洗涤，再将沉淀物分散在超纯水中，即得到CS@La
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TCPP/Au分散液；所述CS@La
‑
TCPP分散液的制备步骤为：壳聚糖溶于冰醋酸溶液(0.1wt％)中，分散均匀，取La
‑
TCPP分散在超纯水中，加入CS溶液，磁力搅拌10
‑
12h得到分散均匀的CS@La
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TCPP溶液；离心、沉淀物用超纯水洗涤后，再将沉淀物分散于超纯水中，得到CS@La
‑
TCPP分散液；所述La
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TCPP的制备步骤为：将六水合硝酸镧(La(NO3)3·
6H2O)、TCPP分别溶于N,N
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二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，分别室温超声10
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12min，然后，在硅油浴中将TCPP溶液加热到100
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130℃，再加入La(NO3)3·
6H2O溶液，在连续磁力搅拌下，将混合物在100
‑
130℃条件下反应5
‑
6h，冷却至室温后离心、沉淀用纯水洗涤三次，烘箱50
‑
60℃干燥，得到黑色的La
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TCPP。2.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述Au纳米粒子的制备步骤为：将1％HAuCl4溶液加入至超纯水中煮沸，然后加入1％柠檬酸三钠溶液继续煮沸15min，冷却后用超纯水恢复至原体积得透明的酒红色溶液即为金纳米粒子(AuNPs)。3.一种用于非小细胞肺癌CYFRA21
‑
1检测的电致化学发光免疫传感器，其特征在于，采用如下步骤：(1)信号探针的制备；1)La
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TCPP：将16.42mg六水合硝酸镧(La(NO3)3·
6H2O)、30mg TCPP分别溶于4mL和1ml N,N
‑
二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，室温超声10min，然后，在硅油浴中将TCPP溶液加热到120℃，再加入La(NO3)3·
6H2O溶液，在连续磁力搅拌下，将混合物在该温度下保持反应6h，冷却至室温后、离心、纯水洗涤三次...

【专利技术属性】
技术研发人员：母昭德，吴依洁，白丽娟，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：