基于核酸适配体置换结合检测多种生物胺的色谱分析法制造技术

本发明专利技术公开了基于核酸适配体置换结合检测多种生物胺的色谱分析法，所述方法借助DSN剪切过程，循环放大了来自生物胺的信号，并结合剪切的长短核酸探针实现了多种生物胺在HPLC上的信号分离，有效进行了目标信号源的置换工作，实现了在一次运行中对多种生物胺进行快速识别和检测。与现有技术相比，本发明专利技术具有以下优点：(1)所述方法可忽略的背景信号与累积信号放大将四种目标生物胺检测限分别降低至0.25pM、0.21pM、0.27pM和0.19pM，线性范围为1pM

【技术实现步骤摘要】
基于核酸适配体置换结合检测多种生物胺的色谱分析法


[0001]本专利技术属于食品药品检测
，涉及实现高通量同时检测多种生物胺的方法，具体为基于核酸适配体置换结合检测多种生物胺的色谱分析法。

技术介绍

[0002]生物胺是一类有生物活性的、含氮的、低分子量有机物质的统称。低水平的生物胺是生物蛋白质中至关重要的部分，在调控核酸与蛋白质的化学组成及生物膜稳定性等方面起着重要作用。然而一些高水平的生物胺则被归类为有害化合物，可能会在敏感的人体中引起疾病或不良症状。生物胺的高摄取量(食物中超过100mg/kg)可能对人类健康构成威胁。生物胺主要的外部摄入来源是一些常见的食品或药品，如抗生素和肉制品等。因此，精确检测食品药品中生物胺(尤其是组胺、酪胺、精胺和色胺)含量是否超标具有重要意义。
[0003]传统的检测生物胺的策略主要包括色谱法、光谱法、电泳法、比色法、化学发光法、和电化学方法等。其中常用的色谱方法有薄层色谱法、离子交换色谱法、气相色谱法、液相色谱法(HPLC)等，结合不同的检测器进行检测。然而，传统的色谱法检测多种生物胺需要复杂的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于核酸适配体置换结合检测多种生物胺的色谱分析法，其特征在于，包括步骤：S1、将被生物素标记的适配体Aptamer 1、Aptamer 2、Aptamer 3和Aptamer 4偶联至链霉亲和素涂层的磁珠表面，得到4种适配体
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磁珠偶联物，适配体序列为SEQ ID NO:1
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4；将被生物素标记的探针Probe 1、Probe 2、Probe 3和Probe 4偶联至链霉亲和素涂层的磁珠表面，得到4种探针
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磁珠偶联物，探针序列为SEQ ID NO:5
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8；S2、将4种适配体
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磁珠偶联物加入离心管中，然后依次加入Trigger 1、Trigger 2、Trigger3、Trigger 4，序列为SEQ ID NO:9
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12和反应缓冲液，37℃反应1小时后依次加入酪胺、组胺、精胺和色胺，37℃继续反应2小时；反应结束后置于磁力架上，取上清液加入到含有4种探针
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磁珠偶联物的棕色离心管中，然后加入DSN和反应缓冲液，反应混合物混合均匀后40℃孵育，加入2
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DSN终止反应，反应液置于磁力架上，取上清液注入HPLC中进行检测；S3、采用5％的乙腈和100mM的醋酸三乙胺溶液作为流动相A，甲醇作为流动相B，柱温设置为35℃，流速为1.0mL/min，在梯度洗脱模式下，20min内甲醇的比例由10％增加到20％，荧光检测器的激发波长和发射波长分别设置为488nm和520nm，对目标物进行荧光检测。2.根据权利要求1所述的基于核酸适配体置换结合检测多种生物胺的色谱分析法，其特征在于，适配体
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磁珠偶联物的具体制备方法为：取磁珠加入到离心管中，离心后放置在磁力架上，弃去溶剂并将磁珠保留在离心管中，然后使用1
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B&W缓冲液低档震荡清洗后置于磁力架上，弃去溶剂保留磁珠；将磁珠重悬于2
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B&W缓冲液中，同时加入4种适配体，在室温下涡旋得到适配体
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磁珠偶联物。3.根据权利要求1所述的基于核酸适...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐盛，沈薇，刘畅，宋畅，
申请(专利权)人：江苏科技大学，
类型：发明
国别省市：