改善蛋白质表达的方法技术

本披露涉及包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列的核酸，其中该免疫球蛋白重链中的一个或两个内含子的核苷酸序列缺失。这些核酸可用于增加免疫球蛋白表达。用于增加免疫球蛋白表达。用于增加免疫球蛋白表达。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】改善蛋白质表达的方法


[0001]本披露涉及表达目标多肽的改良方法。包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列和内含子缺失的核酸有助于增加免疫球蛋白的特定细胞生产力。

技术介绍

[0002]DNA由内含子序列和外显子序列构成，其中内含子在mRNA加工期间通过剪接被去除。该加工与通过核孔复合物从细胞核中输出的mRNA出核密切相关。该出核是表达的基础，并在文献中有详细记载。参见Kohler A.等人，Nature Review Molecular Cell Biology[自然评论分子细胞生物学]8：761
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773(2007)；Bjork，P.等人，Seminars in Cell&Developmental Biology[细胞与发育生物学研讨会]32：47
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54(2014)：Reed，R.Current Opinion in Cell Biology[当代细胞生物学观点]，15：326
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331(2003)。
[0003]已经观察到，与在该区域中没有内含子的相同核苷酸序列相比，在表达载体中编码的密码子优化的重链恒定区内存在内含子引起收获滴度提高。然而，与使用含有内含子的表达载体相关的风险是，在比如抗体或免疫球蛋白等目标蛋白质的表达期间可能会发生内含子保留和错误剪接事件，从而引起需要在纯化期间去除的不需要的异常蛋白质种类。如果在下游加工期间无法去除这些替代种类，这会增加纯化加工的额外复杂性和潜在的批次间差异。
[0004]已经表明，使用含有来自重链恒定区的内含子的非密码子优化的序列可以消除重链恒定区中剪接变体的出现。密码子优化引起的核苷酸序列变化被认为引入了隐蔽剪接，从而产生了这些替代种类。此外，已经表明，单独去除内含子中的每一个内含子(从而留下剩余的三个内含子中的两个)表现出收获滴度的惊人提高。
[0005]从免疫球蛋白重链恒定区去除一个或两个内含子可以降低内含子保留和错误剪接事件的风险，同时增加免疫球蛋白表达。这将产生新一代的表达载体，其在基于抗体或免疫球蛋白的重组蛋白的生产期间产生异常蛋白质种类的风险较低。

技术实现思路

[0006]本披露总体上涉及一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子2和内含子3的核苷酸序列缺失。
[0007]本披露还涉及一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的一个内含子的核苷酸序列缺失。在一个方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子1的核苷酸序列缺失。在另一方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子2的核苷酸序列缺失。在另一方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子3的核苷酸序列缺失。
[0008]本披露还涉及一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的两个内含子的核苷酸序列缺失。在一个方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子1和内含子2的核苷酸序列缺失。在另一方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子1和内含子3的核苷酸序列缺失。
[0009]本披露还涉及一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子1的核苷酸序列缺失，并且免疫球蛋白重链恒定区的内含子2和/或内含子3的核苷酸序列缺失，并且其中内含子2和/或内含子3的核苷酸序列经内含子1的核苷酸序列取代。在一个方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子2的核苷酸序列经内含子1的核苷酸序列取代。在一个方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子3的核苷酸序列经内含子1的核苷酸序列取代。
[0010]本披露还涉及一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子2和/或内含子3的核苷酸序列经内含子1的核苷酸序列替换。在一个方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子2的核苷酸序列经内含子1的核苷酸序列替换。在一个方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子3的核苷酸序列经内含子1的核苷酸序列替换。
[0011]本披露还涉及一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子3的核苷酸序列经包含与免疫球蛋白重链恒定区的内含子1的核苷酸序列大约相同数量的核苷酸的内含子的核苷酸序列替换。
[0012]本披露还涉及一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子2的核苷酸序列经包含与免疫球蛋白重链恒定区的内含子1的核苷酸序列大约相同数量的核苷酸的内含子的核苷酸序列替换。在一个方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子1的核苷酸序列缺失。
[0013]在一个方面，该核酸当以编码免疫球蛋白轻链的核酸表达时，以比含有免疫球蛋白重链恒定区的所有内含子序列的核酸更高的滴度表达免疫球蛋白。在另一方面，该核酸当以编码免疫球蛋白轻链的核酸表达时，以比不含有免疫球蛋白重链恒定区的内含子序列的核酸更高的滴度表达免疫球蛋白。在另一方面，免疫球蛋白轻链是κ轻链或λ轻链。在另一方面，该核酸是密码子优化的。在另一方面，经表达的免疫球蛋白具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。在另一方面，经表达的免疫球蛋白是人免疫球蛋白、人源化免疫球蛋白、嵌合免疫球蛋白或表面重塑的免疫球蛋白。在另一方面，编码免疫球蛋白重链的核酸是脱氧核糖核酸(DNA)。
[0014]在另一方面，本披露涉及一种包含本披露的核酸的载体或表达载体。在另一方面，本披露涉及一种包含本披露的载体或表达载体的宿主细胞。在一个方面，宿主细胞是真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
[0015]本披露还总体涉及一种产生免疫球蛋白的方法，该方法包括在宿主细胞表达该免疫球蛋白的条件下在培养基中培养该细胞；其中宿主细胞包含含有编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列的核酸以及编码免疫球蛋白轻链的核酸，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子2和内含子3的核苷酸序列缺失，其中宿主细胞以比包含编码免疫球蛋白重链的核酸和编码免疫球蛋白轻链的核酸的宿主细胞更高的滴度表达该免疫球蛋白，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子1至3中的全部均存在或其中无任一者存在。
[0016]本披露还总体涉及一种产生免疫球蛋白的方法，该方法包括在宿主细胞表达该免疫球蛋白的条件下在培养基中培养该细胞；其中宿主细胞包含含有编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列的核酸以及编码免疫球蛋白轻链的核酸，其中免疫球蛋白重链恒定区的一个内含子的核苷酸序列缺失，该宿主细胞以比包含编码免疫球蛋白重链的核酸和编码免疫球蛋
白轻链的核酸的宿主细胞更高的滴度表达该免疫球蛋白，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子1至3中的全部均存在或其中无任一者存在。在一个方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子1的核苷酸序列缺失。在另一方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子2的核苷酸序列缺失。在另一方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子3的核苷酸序列缺失。
[0017]本披露还总体涉及一种产生免疫球蛋白的方法，该方法包括在宿主细胞表达该免疫球蛋白的条件下在培养基中培养该细胞；其中宿主细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子2和内含子3的核苷酸序列缺失。2.一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的一个内含子的核苷酸序列缺失。3.如权利要求2所述的核酸，其中该免疫球蛋白重链恒定区的内含子1的核苷酸序列缺失。4.如权利要求2所述的核酸，其中该免疫球蛋白重链恒定区的内含子2的核苷酸序列缺失。5.如权利要求2所述的核酸，其中该免疫球蛋白重链恒定区的内含子3的核苷酸序列缺失。6.一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的两个内含子的核苷酸序列缺失。7.如权利要求6所述的核酸，其中该免疫球蛋白重链恒定区的内含子1和内含子2的核苷酸序列缺失。8.如权利要求6所述的核酸，其中该免疫球蛋白重链恒定区的内含子1和内含子3的核苷酸序列缺失。9.一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子1的核苷酸序列缺失，并且该免疫球蛋白重链恒定区的内含子2和/或内含子3的核苷酸序列缺失，并且其中内含子2和/或内含子3的核苷酸序列经内含子1的核苷酸序列取代。10.如权利要求9所述的核酸，其中该免疫球蛋白重链恒定区的内含子2的该核苷酸序列经内含子1的该核苷酸序列取代。11.如权利要求9所述的核酸，其中该免疫球蛋白重链恒定区的内含子3的该核苷酸序列经内含子1的该核苷酸序列取代。12.一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子2和/或内含子3的核苷酸序列经内含子1的核苷酸序列替换。13.如权利要求12所述的核酸，其中该免疫球蛋白重链恒定区的内含子2的该核苷酸序列经内含子1的该核苷酸序列替换。14.如权利要求12所述的核酸，其中该免疫球蛋白重链恒定区的内含子3的该核苷酸序列经内含子1的该核苷酸序列替换。15.一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子3的核苷酸序列经包含与该免疫球蛋白重链恒定区的内含子1的核苷酸序列大约相同数量的核苷酸的内含子的核苷酸序列替换。16.一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子2的核苷酸序列经包含与该免疫球蛋白重链恒定区的内含子l的核苷酸序列大约相同数量的核苷酸的内含子的核苷酸序列替换。17.如权利要求15或16所述的核酸，其中该免疫球蛋白重链恒定区的内含子1的核苷酸序列缺失。18.如权利要求1至17中任一项所述的核酸，其中该核酸当以编码免疫球蛋白轻链的核
酸表达时，以比含有该免疫球蛋白重链恒定区的所有内含子序列的核酸更高的滴度表达免疫球蛋白。19.如权利要求1至17中任一项所述的核酸，其中该核酸当以编码免疫球蛋白轻链的核酸表达时，以比不含有该免疫球蛋白重链恒定区的内含子序列的核酸更高的滴度表达免疫球蛋白。20.如权利要求18或19所述的核酸，其中该免疫球蛋白轻链是κ轻链或λ轻链。21.如权利要求1至20中任一项所述的核酸，其中该核酸是密码子优化的。22.如权利要求18至21中任一项所述的核酸，其中经表达的免疫球蛋白具有IgGl、IgG2、IgG3或IgG4同种型。23.如权利要求22所述的核酸，其中该免疫球蛋白是人免疫球蛋白、人源化免疫球蛋白、嵌合免疫球蛋白或表面重塑的免疫球蛋白。24.如权利要求1至23中任一项所述的核酸，其是脱氧核糖核酸(DNA)。25.一种载体，其包含如权利要求1至24中任一项所述的核酸。26.一种表达载体，其包含如权利要求1至25中任一项所述的核酸。27.一种宿主细胞，其包含如权利要求25所述的载体。28.一种宿主细胞，其包含如权利要求26所述的表达载体。29.如权利要求27或28所述的宿主细胞，其中该宿主细胞是真核细胞。30.如权利要求29所述的宿主细胞，其中该真核细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。31.一种产生免疫球蛋白的方法，该方法包括在宿主细胞表达该免疫球蛋白的条件下在培养基中培养该细胞；其中该宿主细胞包含编码免疫球蛋白重链的如权利要求1所述的核酸，以及编码免疫球蛋白轻链的核酸，其中该宿主细胞以比包含编码免疫球蛋白重链的核酸和编码免疫球蛋白轻链的核酸的宿主细胞更高的滴度表达该免疫球蛋白，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子1至3中的全部均存在或其中无任一者存在。32.一种产生免疫球蛋白的方法，该方法包括在宿主细胞表达该免疫球蛋白的条件下在培养基中培养该细胞；其中该宿主细胞包含编码免疫球蛋白重链的如权利要求2所述的核酸，以及编码免疫球蛋白轻链的核酸，其中该宿主细胞以比包含编码免疫球蛋白重链的核酸和编码免疫球蛋白轻链的核酸的宿主细胞更高的滴度表达该免疫球蛋白，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子1至3中的全部均存在或其中无任一者存在。33.如权利要求32所述的方法，其中该免疫球蛋白重链恒定...

【专利技术属性】
技术研发人员：E，
申请(专利权)人：阿斯利康瑞典有限公司，
类型：发明
国别省市：