一种检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统及其应用技术方案

本发明专利技术公开了一种检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统及其应用，所述报告系统以表达载体pLVX

【技术实现步骤摘要】
一种检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学及生物荧光成像
，具体涉及一种检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统及其应用。

技术介绍

[0002]分子伴侣介导的自噬(Chaperone
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mediated autophagy,CMA)是哺乳动物细胞中唯一的选择性自噬类型。它的选择性依赖于分子伴侣蛋白HSC70识别并结合目的蛋白的五肽基序，形成HSC70/底物蛋白复合物，移位至CMA活性溶酶体表面，随后底物蛋白复合物转移到单跨溶酶体相关膜蛋白2A型(LAMP2A)的尾部，触发其组装成多聚体分子转运通道，底物蛋白复合物通过该转运通道到达溶酶体腔进行降解。这种独特的转运机制和对底物的选择性是CMA动态清除蛋白质的基础。
[0003]但是，现有的检测分子伴侣介导的自噬活性报告系统表达效率低、对于CMA活性的监测不够灵敏，因此限制了其在CMA中的相关研究应用。因此，亟需一种表达效率更高、检测CMA的活性更加灵敏、准确的报告系统。

技术实现思路

[0004]本专利技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统，其特征在于，所述报告系统以表达载体pLVX
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IRES
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puro为基本骨架，在所述pLVX
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IRES
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puro的启动子后插入目的基因CMA报告序列，所述CMA报告序列包含荧光蛋白、连接在荧光蛋白N末端的含有五肽基序KFERQ的S
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Tag1、连接在荧光蛋白C末端的含有五肽基序KDRVQ的S
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Tag2；其中，所述表达载体pLVX
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IRES
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puro的序列如SEQ ID NO.1所示。2.如权利要求1所述的检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统，其特征在于，所述荧光蛋白包含EGFP、mCherry、Dendra2中的任意一种。3.如权利要求2所述的检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统，其特征在于，所述荧光蛋白是Dendra2，所述Dendra2的序列如SEQ ID NO.2所示。4.如权利要求1所述的检测分子伴侣介导的自噬活性的报告系统，其特征在于，所述报告系统还包含若干个刚性linker，其中，所述含有五肽基序KFERQ的S
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Tag1和所述荧光蛋白之间至少连接一刚性linker，所述含有五肽基序KDRVQ的S
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：董淑娴，张思桐，王乾，
申请(专利权)人：上海市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：