Bag5基因敲除小鼠动物模型的构建方法和应用技术

本发明专利技术首次公开了Bag5基因敲除小鼠动物模型的构建方法和应用，属于生物技术领域。构建方法包括：通过高效的CRISPR/Cas9基因编辑技术，根据Bag5基因序列确定Bag5小鼠待敲除基因的两条特异性靶点gRNA1和gRNA2，并与Cas9核酸酶体外转录成mRNA，显微注射入小鼠受精卵并移植至代孕母鼠输卵管内，待产出小鼠后传代培养，经基因型鉴定得到稳定遗传的Bag5基因敲除小鼠动物模型。本发明专利技术首次在Bag5敲除小鼠模型中鉴定出无头精子症的不可育表型，通过ICSI技术，将精子头注射入发育良好的卵细胞内，成功使不育小鼠再次生出后代，为研究临床上的无头精子症患者提供了Bag5基因敲除小鼠动物模型，为无头精子症疾病的作用机制和治疗提供依据，并验证了Bag5基因的突变筛选在预防无头精子症中的应用。症中的应用。症中的应用。

【技术实现步骤摘要】
Bag5基因敲除小鼠动物模型的构建方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及Bag5基因敲除小鼠动物模型的构建方法和应用。

技术介绍

[0002]BCL2相关的athanogene 5预测使腺苷酸
‑
核苷酸交换因子活性；伴侣结合活性；和酶结合活性。预计参与多个过程，包括细胞蛋白质代谢过程的负调控；蛋白质重折叠的负调控；和蛋白质稳定。预计位于包涵体中；线粒体；和细胞质的核周区。预计在胞质溶胶、膜和核中有活性。与人类Bag5(Bag cochaperone 5)直系同源。
[0003]根据估计，由男性因素导致的不孕夫妇逐年增长。在生殖临床上通常采用辅助生育技术(Assisted Reproductive Technology，ARTs)来治疗不育男性，辅助生育技术例如有体外受精(In Vitro Fertilization，IVF)、卵细胞胞浆内单精子注射(Intracytoplasmic Sperm Injection，ICSI)和宫腔内人工授精(Intrauterine Insemination，IU本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Bag5基因敲除小鼠动物模型的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)根据Bag5基因序列确定Bag5小鼠待敲除基因的两条特异性靶点gRNA1和gRNA2，并与Cas9核酸酶体外转录成mRNA；(2)将两条特异性靶点gRNA1和gRNA2的mRNA和Cas9的mRNA一起显微注射入小鼠受精卵内，显微注射后的受精卵移植至代孕母鼠输卵管内；(3)待产出小鼠后继续传代培养，经基因型鉴定，得到稳定遗传的Bag5基因敲除小鼠动物模型；其中，所述gRNA1的靶点序列如SEQ ID NO:1所示，所述gRNA2的靶点序列如SEQ ID NO:2所示。2.根据权利要求1所述的Bag5基因敲除小鼠动物模型的构建方法，其特征在于：所述步骤(3)中，所述基因型鉴定为：若为一个271bp的条带，为阳性纯合子；若为663bp和271bp的两个条带，为阳性杂合子；若为一个271bp的条带，为野生型对照。3.根据权利要求2所述的Bag5基因敲除小鼠动物模型的构建方法，其特征在于：所述步骤(3)中，显微注射后的受精卵移植至代孕母鼠输卵管内，产出小...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁水桥，甘世明，熊孟能，周淑敏，熊欣欣，范旭，刘款，杨诗语，江楠，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：