使用谷氨酰胺合成酶基因内互补载体直接选择表达高水平异聚蛋白的细胞制造技术

本发明专利技术涉及动物细胞培养物中的多肽的重组表达的一般领域。更具体地说，本发明专利技术涉及用经设计以表达多肽、特别是异多聚体多肽的重组工程化载体转染的细胞的选择改进。工程化载体转染的细胞的选择改进。工程化载体转染的细胞的选择改进。

【技术实现步骤摘要】
使用谷氨酰胺合成酶基因内互补载体直接选择表达高水平异聚蛋白的细胞
[0001]本申请是申请日为2017年5月11日，申请号为201780034550.7，专利技术名称为“使用谷氨酰胺合成酶基因内互补载体直接选择表达高水平异聚蛋白的细胞”的专利技术专利的分案申请。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求2016年5月11日提交的美国临时申请号62/334,966的权益，所述临时申请特此以引用的方式整体并入。
[0004]以电子方式提交的文本文件的描述
[0005]本申请含有已经以ASCII格式电子提交且特此以引用的方式整体并入的序列表。创建于2017年5月8日的序列表的计算机可读格式拷贝名为A
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2011
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WO
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PCT_SEQ_ST25.txt且大小为79.1千字节。


[0006]本专利技术涉及哺乳动物细胞培养物中的多肽的重组表达的一般领域。更具体地说，本专利技术涉及经设计以表达异聚多肽的重组工程化载体的细胞中的选择改进。
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技术介绍

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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种载体，其包含：a) 第一核酸，所述第一核酸编码第一多肽，以及b) 第二核酸，所述第二核酸编码第二多肽，其中所述第二多肽是选择性标记的初始片段，其中所述第一核酸的转录可操作地连接至所述第二核酸的转录，所述载体还包含：c) 第三核酸，所述第三核酸编码第三多肽，其中所述第三多肽能够与所述第一多肽缔合以形成异聚复合物，以及d) 第四核酸，所述第四核酸编码第四多肽，其中所述第四多肽是所述选择性标记的互补片段，其中所述第三核酸的转录可操作地连接至所述第四核酸的转录，其中所述选择性标记的所述初始片段和所述互补片段相互作用以提供可选择活性，并且进一步其中所述载体能够转染到哺乳动物细胞中并改进转染的细胞的选择。2.如权利要求1所述的载体，其中所述异聚复合物是免疫球蛋白，任选地其中所述第一核酸编码免疫球蛋白重链，并且所述第三核酸编码免疫球蛋白轻链。3.如权利要求1所述的载体，其中所述选择性标记是选自以下的代谢酶：谷氨酰胺合成酶、精氨基琥珀酸裂解酶、腺苷酸基琥珀酸合成酶和谷氨酸脱氢酶。4.如权利要求1所述的载体，其中内部核糖体进入位点(IRES)发生在选自以下的位点：a) 在所述第一核酸与所述第二核酸之间的位点；b) 在所述第三核酸与所述第四核酸之间的位点，以及c) 在所述第一核酸与所述第二核酸之间、以及在所述第三核酸与所述第四核酸之间的位点，任选地其中所述内部核糖体进入位点包含SEQ ID NO:23。5.如权利要求1所述的载体，其中所述选择性标记的所述初始突变体亚基是谷氨酰胺合成酶的N
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末端片段，并且所述选择性标记的所述互补突变体亚基是谷氨酰胺合成酶的C
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末端片段。6.如权利要求5所述的载体，其中谷氨酰胺合成酶的所述N
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末端片段和/或所述C
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末端片段在谷氨酰胺合成酶的选自以下的氨基酸处断裂：E110、Y104、S125、N126、E264、T111、N105、N126、Q127、和N265。7.如权利要求6所述的载体，其还包含N
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末端亮氨酸拉链或C
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末端亮氨酸拉链。8.一种分离的宿主细胞，其用如权利要求1
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7中任一项所述的载体转染、转化或转导，任选地其中所述细胞选自CHO、VERO、BHK、HeLa、Cos、MDCK、293、3T3、骨髓瘤细胞系以及WI38细胞。9.一种产生异聚复合物的方法，所述方法包括在由所述宿主细胞表达所述异聚复合物的条件下培养如权利要求8所述的宿主细胞的步骤，任选地其中所述异聚复合物是抗体。10.如权利要求9所述的方法，其还包括分离所述异聚复合物。11.一种表达系统，其包含：a) 第一载体，所述第一载体编码双顺反子转录物，所述第一载体包含编码第一多肽的第一核酸，所述第一核酸可操作地连接至编码第二多肽的第二核酸，其中所述第二多肽是选择性标记的初始片段，以及
b) 第二载体，所述第二载体编码双顺反子转录物，所述第二载体包含编码第三多肽的第三核酸，所述第三核酸可操作地连接至编码第四多肽的第四核酸，其中所述第四多肽是所述选择性标记的互补片段，所述互补片段能够与所述选择性标记的所述初始片段缔合以提供可选择活性，进一步其中所述第三多肽能够与所述第一多肽缔合以形成异聚复合物；并且进一步其中所述表达系统能够转染到哺乳动物细胞中并改进所述细胞的选择。12.如权利要求11所述的表达系统，其中所述异聚复合物是免疫球蛋白，任选地其中所述第一核酸编码免疫球蛋白重链，并且所述第三核酸编码免疫球蛋白轻链。13.如权利要求11所述的表达系统，其中所述选择性标记选自谷氨酰胺合成酶、精氨基琥珀酸裂解酶、腺苷酸基琥...

【专利技术属性】
技术研发人员：RR克彻姆，JT麦格鲁，DA富米纳亚林，TP蒙罗，NJ阿格拉沃尔，KM达里斯，
申请(专利权)人：美国安进公司，
类型：发明
国别省市：