一种CutC蛋白抑制剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种CutC蛋白抑制剂及其应用，所述CutC蛋白抑制剂为柔毛地胆宁（Molephantinin）。经实验发现，干扰CutC能够抑制鼻咽癌细胞增殖生长，因此，开发靶向抑制CutC的药物对于治疗鼻咽癌具有潜在意义。本发明专利技术通过双向热稳定SILAC质谱技术，发现Molephantinin可直接与CutC蛋白结合，进一步，通过ICP

【技术实现步骤摘要】
一种CutC蛋白抑制剂及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医用领域，尤其涉及一种CutC蛋白抑制剂及其应用。

技术介绍

[0002]铜转运蛋白CutC是Cut家族蛋白质的六个成员之一，Cut家族蛋白包括CutA、CutB、CutC、CutD、VutE和CutF，参与铜稳态调控的吸收、储存、输送和流出等过程
[1]。CutC基因从细菌到哺乳动物高度保守的，大小为29 kDa，广泛分布于细胞质和细胞核中。铜是维持正常细胞生理所必需的微量元素，CutC在多种疾病中扮演重要角色，例如，肠道菌群的CutC基因能够影响中风的严重程度
[2]；在肝癌细胞HepG2中敲低CutC基因，能够影响导HepG2对铜的敏感性，并最终诱导细胞凋亡
[3]。尽管CutC在铜稳态中扮演重要角色，然而目前并没有针对CutC的抑制剂，因此，开发针对CutC蛋白抑制剂，对研究CutC功能、治疗CutC异常所引起的疾病，具有重要意义。
[0003]柔毛地胆宁（Molephantinin）属于倍半萜内酯，是地胆草提取物的活性成分之一，分子量大小为374.43，结构式如式1所示。地胆草为菊科地胆草属植物，民间用其全草入药，主治感冒、百日咳、扁桃体炎、眼结膜炎、黄疸、肾炎水肿、湿疹等症。多种从地胆草中提取的小分子化合物包括倍半萜内酯、三萜、黄酮和甾醇等被报道具有抗肿瘤活性，而Molephantinin的抗肿瘤作用鲜有报道，其作用机制不明，作用靶点未知。
[0004][0005]【式1】【参考文献】[1] Li, J., Ji, C., Chen, J., Yang, Z., et al., Identification and characterization of a novel Cut family cDNA that encodes hμMan copper transporter protein CutC. Biochemical and biophysical research communications 2005, 337, 179
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183.[2] Zhu, W., Romano, K. A., Li, L., Buffa, J. A., et al., Gut microbes impact stroke severity via the trimethylamine N
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oxide pathway. Cell host & microbe 2021, 29, 1199
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1208 e1195.[3] Kunjunni, R., Sathianathan, S., Behari, M., Chattopadhyay, P., Subbiah, V., Silencing of HμMan CutC Gene (hCutC) Induces Apoptosis in HepG2 Cells. Biol Trace Elem Res 2016, 172, 120
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126.

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提出一种CutC蛋白抑制剂及其应用。
[0007]本专利技术的目的将通过以下技术方案得以实现：本专利技术一方面提供了一种CutC蛋白抑制剂，所述CutC蛋白抑制剂为柔毛地胆宁。
[0008]进一步的，所述CutC蛋白抑制剂包括治疗有效量的柔毛地胆宁或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
[0009]本专利技术另一方面提供了柔毛地胆宁在制备CutC蛋白抑制剂中的应用。
[0010]进一步的，所述CutC蛋白抑制剂包括治疗有效量的柔毛地胆宁或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
[0011]本专利技术另一方面提供了柔毛地胆宁在制备通过干扰CutC蛋白能够预防和/或治疗的疾病的药物中的应用。
[0012]进一步的，所述通过干扰CutC蛋白能够预防和/或治疗的疾病为鼻咽癌。
[0013]本专利技术的突出效果为：经实验发现，干扰CutC能够抑制鼻咽癌细胞增殖生长，本专利技术通过双向热稳定SILAC质谱技术，发现Molephantinin可直接与CutC蛋白结合，进一步，通过ICP
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MS实验发现Molephantinin通过作用于CutC蛋白，使细胞内铜稳态发生改变，引起鼻咽癌细胞的死亡。因此，Molephantinin可作为CutC蛋白抑制剂，为后续CutC蛋白在铜稳态等功能方面研究提供有效途径，此外，Molephantinin有望作为靶向CutC治疗鼻咽癌的新型药物，为临床鼻咽癌治疗提供新思路。
[0014]以下便结合实施例，对本专利技术的具体实施方式作进一步的详述，以使本专利技术技术方案更易于理解、掌握。
附图说明
[0015]图1为本专利技术实施例1中细胞活性检测实验结果图；图2为本专利技术实施例1中克隆形成实验结果图；图3为本专利技术实施例2中通过双向热稳定SILAC质谱寻找Molephantinin的靶标蛋白实验过程及结果图；图4为本专利技术实施例3中免疫印迹实验的显色结果图；图5为本专利技术实施例3中免疫印迹实验的灰度值计算结果图；图6为本专利技术实施例4中Molephantinin与CutC 的分子对接模拟结果图；图7为本专利技术实施例5中不同浓度的Molephantinin诱导CNE
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1细胞内的铜离子浓度检测结果图；图8为本专利技术实施例5中Molephantinin处理干扰CutC的CNE
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1细胞内的铜离子浓度检测结果图；图9为本专利技术实施例6中CCK8实验证明Molephantinin可以抑制鼻咽癌细胞生长的结果图；图10为本专利技术实施例6中CCK8实验证明鼻咽癌常用化疗药物对鼻咽癌细胞生长抑制情况的结果图。
实施方式
[0016]为使本专利技术的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下参照实施例对本专利技术作
进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限本专利技术。
[0017]本专利技术上下文中所使用的试剂，均通过市售获得。本专利技术所使用的实验方法均为本领域的常规方法和技术。
[0018]实施例1：干扰CutC显著抑制鼻咽癌细胞增殖生长本实施例采用CCK8细胞活性检测实验与克隆形成实验，干扰CutC能够显著抑制鼻咽癌细胞的增殖生长。具体过程如下：1. 细胞培养：本论文所涉及细胞系CNE
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1和S18购自中国厦门逸漠生物。所有细胞均培养在37℃、5% CO2的培养箱中，用含10%胎牛血清（Gibco公司）、1% 青霉素/链霉素（Hyclone公司）和10 μg/mL环丙沙星（Sigma公司）的DMEM培养基（Gibco公司）进行培养。
[0019]2. RNA干扰：CutC干扰片段、Negative Control siRNA片段由权阳生物设计并合成，选择 Lip3000 作为RNA的转染试剂，瞬时转染使siRNA进入细胞。在转染前一天晚上将细胞用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CutC蛋白抑制剂，其特征在于：所述CutC蛋白抑制剂为柔毛地胆宁。2.一种根据权利要求1所述的CutC蛋白抑制剂，其特征在于：所述CutC蛋白抑制剂包括治疗有效量的柔毛地胆宁或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。3.柔毛地胆宁在制备CutC蛋白抑制剂中的应用。4.根据权利要求1所述的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：张静，张水兴，韩紫琴，汪洋，李楠，吴忠南，李琛，
申请(专利权)人：暨南大学附属第一医院广州华侨医院，
类型：发明
国别省市：