利用SSR指纹图谱鉴别金裕1号茶树品系的方法技术

本发明专利技术提供一种利用SSR指纹图谱鉴别金裕1号茶树品系的方法。本发明专利技术利用44份来自12个省份的优良茶树品种作为样本材料，在茶树全基因组中设计76对SSR引物进行多态性筛选，鉴定流程主要包括茶树总DNA提取、引物的设计、PCR扩增、等位基因多态性统计，最终确立了5对引物作为金裕1号品种鉴定的核心引物，可以有效地将金裕1号新品种和其它43种茶树品种区分开，从而利于金裕1号茶树新品种的保护和推广，并为金裕1号茶品种的真伪鉴别提供快速、准确的方法。方法。

【技术实现步骤摘要】
利用SSR指纹图谱鉴别金裕1号茶树品系的方法


[0001]本专利技术属于分子生物学领域，具体地说，涉及一种利用SSR指纹图谱鉴别金裕1号茶树品系的方法。

技术介绍

[0002]金裕1号是安徽省六安市金寨县鲜花岭的当地茶农在群体种茶园中发现的一株新梢芽头肥嫩，生长势旺盛且抗性强的单株，并将其命名为
′
金麻1号
′
，后更名为
′
金裕1号
′
。此后以短穗扦插扩繁，并陆续建立母本园进行栽培管理。通过长达十来年的观察和培育，发现该品系产量高、抗性高、发芽特早、芽叶肥壮，十分适合六安瓜片的制作。该品系具有发芽早、鲜叶产量高、抗逆性较强、适制绿茶品质好等特点，推广应用经济效益较高，适合在优质绿茶区栽培。
[0003]金裕1号属灌木型，早生品种，树姿半开张，分枝密度密，芽叶密度密，叶长均7.3cm，叶宽均4.0cm，中叶类，叶形中等椭圆形，叶身平，叶脉均7对，叶质硬，有光泽，叶色中绿，幼嫩芽颜色浅绿色，茸毛少，一芽三叶百芽重73.33g，叶片上斜着生，叶尖渐尖，叶缘平，叶面微隆起，叶齿锐、密、中。
[0004]金裕1号按一芽二叶标准，春茶一季亩产鲜448.5kg，是其他品种的1
‑
2倍，金裕1号具有较高的推广价值。干茶具有较高化学品质，含游离氨基酸5.70％、茶多酚23.20％、儿茶素总量12.85％、咖啡碱2.33％、茶氨酸2.45％，酚氨比为4.07，适制绿茶。制作六安瓜片，外形为片形，黄绿稍深，较匀净；汤色绿黄微青，有沉淀；滋味鲜浓，清香纯正，较平；叶质嫩软，绿黄，匀亮。以金裕1号作为原材料制作的六安瓜片深受市场的青睐，由于发芽时间早、品质优，价格高于市场上同类产品，十分具有推广价值。
[0005]为了更好地保护和推广金裕1号茶树新品种，有效辨别鲜叶和干茶的真伪，亟需建立快速、简单的方法对金裕1号新品系进行精准鉴定。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种利用SSR指纹图谱鉴别金裕1号茶树品系的方法。
[0007]本专利技术利用44份来自12个省份的优良茶树品种作为样本材料，在茶树全基因组中设计76对SSR引物进行多态性筛选，鉴定流程主要包括茶树总DNA提取、引物的设计、PCR扩增、等位基因多态性统计，最终确立了5对引物作为金裕1号品种鉴定的核心引物，可以有效地将金裕1号新品种和其它43种茶树品种区分开，从而利于金裕1号茶树新品种的保护和推广，并为金裕1号茶品种的真伪鉴别提供快速、准确的方法。
[0008]为了实现本专利技术目的，第一方面，本专利技术提供一套用于扩增金裕1号茶树品系SSR标记的引物组合，包括5个SSR标记，分别为CS
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SSR 37、CS
‑
SSR 40、CS
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SSR 45、CS
‑
SSR 51和CS
‑
SSR 54；用于扩增它们的引物分别如SEQ ID NO：1
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2、SEQ ID NO：3
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4、SEQ ID NO：5
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6、SEQ ID NO：7
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8和SEQ ID NO：9
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10所示。
[0009]第二方面，本专利技术提供含有所述SSR引物组合的检测试剂或试剂盒。
[0010]第三方面，本专利技术提供所述SSR引物组合在金裕1号茶树品系鉴定及选育中的应用。
[0011]第四方面，本专利技术提供所述SSR引物组合在金裕1号茶树品系分子标记辅助育种中的应用。
[0012]第五方面，本专利技术提供所述SSR引物组合在构建金裕1号茶树品系SSR指纹图谱中的应用。
[0013]第六方面，本专利技术提供一种利用SSR指纹图谱鉴别金裕1号茶树品系的方法，包括以下步骤：
[0014]1)提取待测茶树样品的基因组DNA；
[0015]2)以提取的DNA为模板，利用所述SSR引物组合进行PCR反应；
[0016]3)分析PCR扩增产物。
[0017]优选地，PCR扩增体系为：40ng/μL DNA模板1μL，10μM上、下游引物各0.5μL，2
×
Es Taq MasterMix 5μL，ddH2O 3μL。
[0018]优选地，PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环；最后72℃延伸5min。
[0019]优选地，利用毛细管电泳对扩增产物进行检测。
[0020]前述的方法，用于扩增标记CS
‑
SSR 37的引物对应的扩增产物出现227bp的特征条带，用于扩增标记CS
‑
SSR 40的引物对应的扩增产物出现268bp的特征条带，用于扩增标记CS
‑
SSR 45的引物对应的扩增产物出现124bp和127bp的特征条带，用于扩增标记CS
‑
SSR 51的引物对应的扩增产物出现245bp的特征条带，用于扩增标记CS
‑
SSR54的引物对应的扩增产物出现175bp和181bp的特征条带，判定待测茶树为金裕1号金裕1号分子指纹图谱见图4。
[0021]借由上述技术方案，本专利技术至少具有下列优点及有益效果：
[0022](一)本专利技术提供的引物是建立在茶树基因组分析的基础上，与EST
‑
SSR相比，具有多态性高、数量多的特点。通过大量的引物筛选，最终确定5对核心引物用于对金裕1号新品系的鉴定。
[0023](二)本专利技术采用了SSR指纹图谱技术，该技术是近年来随着分子生物学发展而发展起来的一种应用性遗传种质分析方法，具有稳定性好、操作简单，准确率高的特点，对金裕1号优良品系鉴定提供了一个精确、快速、简单的方法。
[0024](三)本专利技术所选用的材料不受季节、环境和测试时间的限制，可以对金裕1号品系生长任何时期内的任意器官，或者制作好储存一段时间的干茶进行DNA提取，都不影响其鉴定结果。
[0025](四)本专利技术进行引物筛选所选用的是Fragment Analyzer
TM
全自动毛细管电泳系统，该系统具有高通量、安全方便、灵敏度高等特点，有助于快速、精确地建立SSR指纹图谱，并缩短了金裕1号优良品系鉴定的周期。
附图说明
[0026]图1为本专利技术较佳实施例中提取的DNA琼脂糖凝胶电泳图。
[0027]图2为本专利技术较佳实施例中5对核心引物对44个茶树品种的PCR扩增毛细管电泳图。
[0028]图3为本专利技术较佳实施例中5对核心引物对金裕1号鲜叶及干茶三次重复毛细管电泳胶图。
[0029]图4为金裕1号分子指纹图谱。
具体实施方式
[0030]本专利技术提供一种利用SSR指纹图谱技术鉴别金裕1号茶树新品系的方法，可以更精准地从植物基因的分子水平上鉴别金裕1号茶树新品种资源。
[0031本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于扩增金裕1号茶树品系SSR标记的引物组合，其特征在于，包括5个SSR标记，分别为CS
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SSR 37、CS
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SSR 40、CS
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SSR 45、CS
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SSR 51和CS
‑
SSR 54；用于扩增它们的引物分别如SEQ ID NO：1
‑
2、SEQ ID NO：3
‑
4、SEQ ID NO：5
‑
6、SEQ ID NO：7
‑
8和SEQ ID NO：9
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10所示。2.含有权利要求1所述SSR引物组合的检测试剂或试剂盒。3.权利要求1所述SSR引物组合在金裕1号茶树品系鉴定及选育中的应用。4.权利要求1所述SSR引物组合在金裕1号茶树品系分子标记辅助育种中的应用。5.权利要求1所述SSR引物组合在构建金裕1号茶树品系SSR指纹图谱中的应用。6.利用SSR指纹图谱鉴别金裕1号茶树品系的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提取待测茶树样品的基因组DNA；2)以提取的DNA为模板，利用权利要求1所述SSR引物组合进行PCR反应；3)分析PCR扩增产物。7.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦朝领，陈辉，庭玉杰，汪于奎，刘升锐，朱俊彦，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：