一碳代谢抑制剂在抑制病毒感染中的应用制造技术

本发明专利技术涉及预防兽医学技术领域，具体为一碳代谢抑制剂在抑制病毒感染中的应用，本发明专利技术首次公开了SHIN1具有抑制水疱性口炎病毒和塞内卡病毒作用，通过对病毒滴度、病毒mRNA和蛋白水平进行评估，结果说明一碳代谢抑制剂抑制病毒复制，本发明专利技术为病毒的防控提供科学实验基础，为临床防治病毒感染性疾病提供可行有效的治疗方案。治疗方案。治疗方案。

【技术实现步骤摘要】
一碳代谢抑制剂在抑制病毒感染中的应用


[0001]本专利技术涉及预防兽医学
，具体为一碳代谢抑制剂在抑制病毒感染中的应用。

技术介绍

[0002]丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)是调节一碳代谢的关键蛋白具有胞浆(SHMT1)和线粒体(SHMT2)两种亚型，哺乳动物同时具有SHMT1和SHMT2，SHMT催化丝氨酸和四氢叶酸转化为甘氨酸和5，10
‑
亚甲基
‑
四氢叶酸，这种可逆转换为核苷酸合成提供一个碳单位，并影响DNA甲基化和NADH/NADPH的产生，在SHMT2缺失的细胞系中，它们则通过SHMT1分解代谢丝氨酸来支持胸苷酸和嘧啶的合成，高特异性SHMT1/2双重抑制剂SHIN1抑制SHMT1和SHMT2，有关一碳代谢抑制剂的开发，第一个SHMT抑制剂是NSC127755，由于其不良反应开发也受到限制，Leukopsin也被证明能抑制两种SHMT亚型，因其在体内容易转化为其他叶酸类似物而并未应用于临床，2015年，Marani等发现一种植物源性SHMT抑制剂化合物2.12，通过凋亡诱导肺癌细胞死亡，2017年，Ducker等基于植物源性抑制剂优化SHIN1，SHIN1增强SHMT的活性增强；
[0003]水疱性口炎(vesicular stomatitis，VS)是由水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus，VSV)感染引起的猪、马、牛等多种哺乳动物的急性高度接触性传染病，VSV属于弹状病毒科、水疱病毒属，基因组全长约11Kb，是不分节段的单股负链RNA，VSV通过节肢动物作为传播媒介，感染家畜和啮齿类动物，也可感染人类，VSV基因组从3
′
到5
′
端依次编码5个蛋白，核蛋白(N)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、糖蛋白(G)以及病毒RNA聚合酶(L)，自然界中该病毒具有传播媒介广，易感动物多，形态学复杂等特点，该病虽然致死率不高，但是对家畜所造成的危害性后果是不可逆的，并且对养殖业造成的经济损失巨大，因此对该病的防治具有重要的社会经济和公共卫生意义；
[0004]在最近的报道，以SARS
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CoV
‑
2为模式病毒，SARS
‑
CoV
‑
2劫持叶酸和一碳代谢进行自身复制，研究结果表明SHIN1抑制SARS
‑
CoV
‑
2的复制，SHIN1在人结直肠腺癌细胞中显示出针对SHMT的有效和特异的靶点活性，并抑制广泛的癌细胞株的增殖，在SHIN1的基础上进一步优化得到SHIN2，SHIN2通过抑制SHMT抑制T细胞的生长具有抗白血病的作用；
[0005]针对目前一碳代谢抑制剂的应用情况，本专利技术针对一碳代谢抑制剂抑制病毒复制，可用于预防或防治病毒。

技术实现思路

[0006](一)解决的技术问题
[0007]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一碳代谢抑制剂在抑制病毒感染中的应用，具备预防或防治病毒的优点，来解决上述问题。
[0008](二)技术方案
[0009]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一碳代谢抑制剂在抑制病毒感染中
的应用，其中，所述一碳代谢抑制剂是SHIN1，包括以下步骤：S1、一碳代谢抑制剂抑制病毒的工作浓度；S2、一碳代谢抑制剂影响病毒的入侵；S3、一碳代谢抑制剂抑制病毒的复制。
[0010]优选的，S1：首先通过筛选一碳代谢抑制剂0μM～50μM对细胞活性的影响，进一步使用不影响细胞活性的工作浓度，以筛选抑制病毒复制有效浓度。本专利技术使用0.5μM～20μM抑制剂作用于细胞并感染病毒，通过对荧光显微镜观察病毒的复制、病毒mRNA和蛋白水平进行评估，最终将其中对病毒复制抑制效果最好的工作浓度应用到本专利技术中。
[0011]优选的，S2:本专利技术进一步设计一碳代谢抑制剂影响病毒的入侵阶段。本专利技术分别在病毒感染前后使用抑制剂处理细胞，通过对荧光显微镜观察病毒的复制、病毒mRNA和蛋白水平进行评估，最终将其中最有效作用方式应用到本专利技术中。
[0012]优选的，S3:本专利技术将最优抑制剂浓度和最优使用抑制剂方式作用于病毒感染的细胞，通过对荧光显微镜观察病毒的复制、病毒滴度、病毒mRNA和蛋白水平进行评估，最终一碳代谢抑制剂抑制病毒复制。
[0013]优选的，所述卸料管道的前端内表面开设有散尘孔，所述散尘孔的长度大于卸料管道宽度的二分之一，防止灰尘的过度积累，延长使用寿命。
[0014]可选的，将所述抑制剂通过甲酸盐挽救SHIN1效应，本专利技术利用甲酸盐，通过对荧光显微镜观察病毒的复制、病毒滴度、病毒mRNA和蛋白水平进行评估，最终使一碳代谢抑制剂抑制病毒复制水平回调。
[0015](三)有益效果
[0016]与现有技术相比，本专利技术提供了一碳代谢抑制剂在抑制病毒感染中的应用，具备以下有益效果：
[0017](1)抑制剂不影响细胞活性：本专利技术一碳代谢抑制剂的使用浓度在0μM～50μM均不影响细胞浓度。
[0018](2)抑制病毒效果显著：本专利技术一碳代谢抑制剂使用浓度为3μM即可达到可观的抑制病毒复制效果。
[0019](3)发挥作用阶段广泛：本专利技术一碳代谢抑制剂在病毒复制前后均可发到抑制病毒复制的效果，前后均使用抑制剂效果最佳。
[0020](4)作用于多种病毒：本专利技术一碳代谢抑制剂能抑制水疱性口炎病毒和塞内卡病毒，说明能对多种病毒产生抑制效果。
[0021](5)抑制效果可被挽救：本专利技术一碳代谢抑制剂可被甲酸盐挽救，病毒复制水平恢复。
附图说明
[0022]图1筛选抑制剂工作浓度(A)通过CCK8检测SHIN1处理的细胞在OD450nm的数值。从图中可看出0μM～50μM对细胞活性无影响。(B
‑
D)从荧光显微镜观察结果、病毒mRNA和蛋白水平结果显示抑制剂SHIN1使用浓度(0.5μM、1μM、3μM、5μM、8μM、10μM和20μM)对病毒复制均有影响，本专利技术所选浓度3μM效果最好；
[0023]图2抑制剂影响病毒的入侵，通过不同时间点使用SHIN1抑制剂处理细胞，从荧光显示结果说明不同阶段使用抑制剂对病毒都发挥抑制作用，本专利技术预处理和后处理共同使用抑制病毒效果最好；
[0024]图3抑制剂抑制VSV复制，使用抑制剂前后均处理细胞感染病毒，如图所示、病毒滴度和蛋白水平结果，一碳代谢抑制剂有效抑制水疱性口炎病毒复制；
[0025]图4甲酸盐挽救SHIN1效应，使用甲酸盐作用于抑制剂处理的细胞。如图所示显微镜观察病毒的复制、病毒滴度、病毒mRNA和蛋白水平结果，使用甲酸盐后病毒的复制水平回调；
[0026]图5抑制剂抑制SVA复制，使用抑制剂前后均处理细胞感染病毒。如图所示病毒滴度、病毒mRNA和蛋白水平结果，病毒滴度、病毒mRNA和蛋白水平均下降。一碳代谢抑制剂有效抑制塞内卡病毒的复制。
具体实施方式
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测一碳代谢抑制剂在抑制病毒感染中的应用；其中，所述一碳代谢抑制剂是SHIN1，其特征在于，包括以下步骤：S1、一碳代谢抑制剂抑制病毒的工作浓度；S2、一碳代谢抑制剂影响病毒的入侵；S3、一碳代谢抑制剂抑制病毒的复制。2.根据权利要求1所述的一碳代谢抑制剂在抑制病毒感染中的应用，其特征在于，所述S3之后还包括：S4、将所述抑制剂通过甲酸盐挽救SHIN1效应。3.根据权利要求1所述的一碳代谢抑制剂在抑制病毒感染中的应用，其特征在于，一碳代谢抑制剂抑制病毒的工作浓度为0.5μM～50μM。4.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：李彦敏，张志东，张瑞，谭晓雨，游青，周泷，
申请(专利权)人：西南民族大学，
类型：发明
国别省市：