Circ_1483在治疗胃癌中的用途制造技术

本发明专利技术实施例公开了Circ_1483在治疗胃癌中的用途。本发明专利技术以胃癌细胞AGS与HGC

【技术实现步骤摘要】
Circ_1483在治疗胃癌中的用途


[0001]本专利技术实施例涉及生物
，具体涉及一种Circ_1483在治疗胃癌中的用途，具体涉及Circ_1483作为胃癌治疗的新靶标及其应用。

技术介绍

[0002]胃癌(Gastric Cancer，GC)是指起源于胃黏膜上皮细胞的恶性肿瘤，是全球范围内常见的消化道恶性肿瘤之一，发病率和死亡率分别居于全球恶性肿瘤的第5位和第4位。根据劳伦分型可以将胃癌分为肠型胃癌，弥漫型胃癌和混合型胃癌，研究认为肠型胃癌经历从正常黏膜/浅表性胃炎向萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生的进展，最后演变为胃癌的过程。尽管近年来胃癌的发病率和死亡率有所下降，但是胃癌患者发生腹腔转移的预后较差，中位生存期＜6个月。探索胃癌发生发展及侵袭转移的机制及寻找治疗靶点对于胃癌防治具有十分重要的意义。
[0003]环状RNA(Circular RNAs,circRNAs)是一种具有共价闭合环结构的单链内源性RNA，最初被认为是转录过程中剪接错误的产物。近年来的研究报道，circRNA在癌组织和正常组织之间表达水平不同，在肿瘤的发生和发展中发挥重要作用。近10年来，越来越多的研究表明，circRNA作为miRNA海绵，通过抑制miRNA活性来上调miRNA靶基因表达水平，具有作为癌症治疗靶点的应用价值。
[0004]Hsa_circ_1483位于第5号染色体上的DHX29基因内。其基因组长度为5038bp，转录后环状RNA长度为750bp。Starbase数据库(http://starbase.sysu.edu.cn/index.php)显示hsa_circ_1483具有miRNAs的互补结合位点。circBase(http://www.circbase.org/)显示hsa_circ_1483在正常脑组织和慢性粒细胞白血病细胞系中均有表达。hsa_circ_0001483是否具有作为胃癌治疗的新靶点的应用价值，目前尚未被探索。

技术实现思路

[0005]为此，本专利技术实施例提供一种Circ_1483作为胃癌治疗的新靶标及其应用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术实施例提供如下技术方案：
[0007]根据本专利技术实施例的第一方面，本专利技术提供Circ_1483在制备抑制胃癌细胞增殖、分化、和迁移侵袭的药物中的应用。
[0008]进一步地，所述药物包括Circ_1483表达促进剂。
[0009]进一步地，所述Circ_1483表达促进剂包括Circ_1483过表达质粒和慢病毒。
[0010]根据本专利技术实施例的第二方面，本专利技术提供一种预防或/和治疗胃癌的组合物，所述组合物包括：
[0011](1)Circ_1483表达促进剂；
[0012](2)药剂学上可接受的载体。
[0013]进一步地，所述Circ_1483表达促进剂包括Circ_1483过表达质粒和慢病毒。
[0014]本专利技术实施例具有如下优点：
[0015]本专利技术以胃癌细胞AGS与HGC
‑
27为模型，经体外细胞实验证明，转染Circ_1483过表达质粒后，能够显著抑制胃癌细胞活性/增殖、分化和迁移，另外，经体内动物实验证明，过表达Circ_1483可以抑制裸鼠皮下肿瘤发生，说明过表达Circ_1483为胃癌患者的靶向治疗提供新的治疗方案。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本专利技术的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。
[0017]图1为Circ_1483对胃癌细胞活性/增殖的影响。
[0018]图2为Circ_1483过表达对细胞分化指标mRNA表达水平的影响。
[0019]图3为Circ_1483过表达对细胞分化指标蛋白表达水平的影响。
[0020]图4为Circ
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1483对胃癌细胞迁移的影响。
[0021]图5为Circ_1483对裸鼠成瘤作用的影响。
具体实施方式
[0022]以下由特定的具体实施例说明本专利技术的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0023]实施例1Circ_1483对胃癌细胞活性/增殖的影响
[0024]1.1细胞培养
[0025]AGS与HGC
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27均在完全培养液(10％胎牛血清+1640培养基)中进行贴壁培养。(1)细胞复苏：将冻存管自液氮取出后进行37℃水浴，待细胞悬液融化后移入1.5ml EP管，1000rpm离心5min，弃去上清液后加入1ml PBS吹打清洗，1000rpm离心5min，弃去上清液后移入小培养瓶(底面积25cm2)补充至3ml培养液，“十字”摇匀后放入恒温细胞培养箱(37℃，5％CO2)；(2)细胞换液：弃去旧培养液，小培养瓶加入1ml PBS，大培养瓶(底面积75cm2)加入2ml PBS，摇晃清洗，重复1次，加入适量培养液(小培养瓶3ml，大培养瓶7ml)；(3)细胞传代：弃去旧培养液，清洗细胞(同细胞换液)，加入含0.25％EDTA的胰蛋白酶消化细胞(小培养瓶1ml，大培养瓶2ml)，显微镜下观察大部分细胞脱落后加入胰蛋白酶体积2倍的培养液终止消化。将所有液体移入15ml离心管，1000rpm离心5min，弃去上清液后加入1ml PBS吹打清洗，1000rpm离心5min，弃去上清液后1：3移入新培养瓶，补充至适量培养液；(4)细胞冻存：细胞消化、离心(同细胞传代)，加入1ml冻存液重悬细胞(900μl胎牛血清+100μl DMSO)，移入冻存管进行梯度冻存(4℃
×
30min，
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20℃
×
30min，
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80℃
×
24h)，于液氮保存。
[0026]1.2质粒转染
[0027]细胞消化、离心(同细胞传代)、计数，6孔板中每孔种细胞1.5
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2.5
×
105个，加入2ml完全培养液，放入培养箱孵育24h。细胞转染实验步骤严格依照jetPrime转染试剂的试剂说明书进行。(1)配制2μg携带Circ_1483基因的质粒DNA(由上海吉凯基因公司合成)+200
μljetPRIME buffer，涡旋10s，短暂离心；(2)加入4μljetPRIME转染试剂，涡旋10s，短暂离心，室温孵育10min；(3)细胞换液后加入配制好的转染试剂，孵育4h后换液；(4)培养24
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Circ_1483在制备抑制胃癌细胞增殖、分化、和迁移侵袭的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物包括Circ_1483表达促进剂。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述Circ_1483表达促进剂包括Circ_1483过表达质粒和慢病毒。...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁媛，徐倩，丁涵栖，刘文静，
申请(专利权)人：中国医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：