窄孢灵芝中三萜类化合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体涉及药用真菌窄孢灵芝中的三萜类化合物及其制备方法及这类化合物在抗糖尿病方面的应用。该化合物具有式1所示结构，采用硅胶柱层析、ODS柱层析、HPLC等色谱方法分离得到，本发明专利技术还提供所述化合物在制备抗糖尿病药物中的应用。本发明专利技术制备方法简单，重现性好，所得化合物纯度高，具有较好的抑制α

【技术实现步骤摘要】
窄孢灵芝中三萜类化合物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于医药
，具体涉及药用真菌窄孢灵芝中的三萜类化合物及其制备方法及这类化合物在抗糖尿病方面的应用。

技术介绍

[0002]“灵芝”作为国内外最著名的药用真菌之一，隶属于担子菌门(Basidiomycota)，伞菌纲(Agaricomycetes)，多孔菌目(Polyporales)，灵芝科(Ganodermataceae)，灵芝属(Ganoderma P.Karst)，其历史最早可以追溯到东汉《神农本草经》，具有补气安神，止咳平喘等功效。现代药理研究表明灵芝具有防治心血管疾病、保肝、抗肿瘤、免疫调节、抗衰老、抗菌等作用，其化学成分主要有三萜、甾体、混源萜、生物碱和多糖。然而，随着灵芝物种多样性和系统学研究的推进，灵芝属中仍有许多物种有待深入研究。其中，窄孢灵芝(Ganoderma angustisporum)为2018年发现于中国东南部的一个灵芝新种，至今未进行过化学成分及药理活性方面的研究。
[0003]糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病，其发病率呈逐年上升趋势。α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂可延缓肠道碳水化合物的吸收，有效降低餐后血糖水平，目前已广泛应用于临床。然而，现有的α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂常会引起腹泻、腹部绞痛、肠胃胀气、呕吐等不良反应，故从天然产物中寻找和开发新的α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的首要目的是提供一种从窄孢灵芝G.angustisporum中制备的三萜类化合物。
[0005]本专利技术的另一目的是提供所述三萜类化合物的制备方法及所述三萜类化合物在制备降血糖药物中的应用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用技术方案为
[0007]一种三萜类化合物，化合物1结构如下所示：
[0008][0009]一种所述的三萜类化合物的制备方法：
[0010](1)种子培养基的制备：窄孢灵芝菌丝体G.angustisporum接入种子培养基，振荡培养获得种子培养液；
[0011](2)发酵：将上述种子培养液接种至大米固体发酵培养基，采用固态发酵方式进行
发酵培养；
[0012](3)将(2)中发酵得到的培养物用乙酸乙酯提取3
‑
5次，合并提取液减压浓缩后得到浸膏，所得浸膏经硅胶柱色谱，以石油醚/乙酸乙酯(100:1～1:1)和二氯甲烷/甲醇(50:1～1:1)系统按体积比依次进行梯度洗脱，收集石油醚/乙酸乙酯5:1至二氯甲烷/甲醇30:1的组分，所得组分经ODS柱色谱分离，以乙醇/水梯度洗脱，收集70％～90％组分，再经硅胶柱色谱以二氯甲烷/甲醇按体积比100:1～5:1梯度洗脱，收集20:1～10:1组分，经制备型HPLC，以甲醇/水洗脱，收集110～125min的色谱峰，所得样品经半制备型HPLC色谱，以乙腈/水洗脱，收集24.1min的色谱峰得到化合物1。
[0013]所述以乙醇/水梯度洗脱时乙醇浓度梯度为：20％，30％，40％，45％，50％，55％，60％，65％，70％，80％，90％，100％；
[0014]所述制备型HPLC分离的甲醇/水洗脱时甲醇浓度为75％～80％；
[0015]所述半制备型HPLC分离的乙腈/水脱时乙腈浓度为70％～75％。
[0016]所述窄孢灵芝菌G.angustisporum为MycoKeys 34:93
‑
108(2018)中记载的公知菌株，本专利技术所采用菌株是由北京林业大学戴玉成教授馈赠获得。
[0017]制备化合物中菌丝为将窄孢灵芝菌丝体G.angustisporum接种到PDA平板上，置于28℃，避光条件下培养5
‑
7天。而后将平板上的菌丝体均匀切成0.5cm2小块待用；所述PDA培养基的组分为：麦芽浸粉20g/L，琼脂12g/L，蒸馏水，pH自然；
[0018]所述种子培养基的组分为：麦芽浸粉1～5g，蒸馏水100～200mL；所述振荡培养的条件为：25～28℃下，摇床转速120～200rpm，培养时间为7～10天；
[0019]将所述种子培养液按每10～50g大米固体发酵培养基种介入1～5mL种子液的比例接种，而后静置培养40
‑
50天；其中，大米固体发酵培养基为每100～250mL水中加入80～120g大米。
[0020]所得化合物1经过系统结构鉴定结果如下，相应谱图见附图1
‑
7：
[0021]化合物1：白色粉末，HRESIMS给出准分子离子峰m/z 629.3673[M+Na]+
(calcd for C
36
H
52
O9Na,629.3684)，结合氢谱和碳谱数据确定其分子式为C
32
H
54
O9，计算不饱和度为11。1H NMR(400MHz,CDCl3)数据表明化合物1结构中含有9个甲基[δ
H 0.73(s),0.87(s),0.94(s),0.95(6H,overlap),1.10(s),1.87(s),2.00(s),2.06(s),2.07(s)]，3个连氧次甲基[δ
H 4.59(dd,J＝11.6,4.5Hz),5.07(m),6.21(dd,J＝10.0,5.7Hz)]，以及2个烯烃质子信号[δ
H 6.76(t,J＝7.9Hz),5.05(m)]。
13
C NMR(100MHz,CDCl3)数据显示化合物1含有36个碳信号，其中包括10个甲基碳，4个sp2杂化碳(δ
C 120.8,129.0,139.1,143.3)，1个酮羰基(δ
C 208.4)，4个酯/羧酸羰基(δ
C 169.5,170.7,171.1,171.1)，3个脂肪族季碳，8个次甲基(其中包括3个连氧次甲基δ
C 74.1,74.6,80.2)和6个亚甲基。根据以上核磁数据推测化合物1具有羊毛甾烷型三萜骨架。
[0022]1H
‑1H COSY中显示有4个自旋偶合系统，分别是H
‑
1/H
‑
2/H
‑
3，H
‑
7/H
‑
8，H
‑
11/H
‑
12，H
‑
15/H
‑
16/H
‑
17/H
‑
20(H
‑
21)/H
‑
22/H
‑
23/H
‑
24。HMBC谱中，H
‑2′
,2
″
,2
″′
分别与C
‑1′
,1
″
,1
″′
有相关，说明结构中含有3个乙酰氧基；H本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种三萜类化合物，其特征在于：化合物1结构如下所示：2.一种权利要求1所述的三萜类化合物的制备方法，其特征在于：(1)种子培养基的制备：窄孢灵芝菌丝体G.angustisporum接入种子培养基，振荡培养获得种子培养液；(2)发酵：将上述种子培养液接种至大米固体发酵培养基，采用固态发酵方式进行发酵培养；(3)将(2)中发酵得到的培养物用乙酸乙酯提取3
‑
5次，合并提取液减压浓缩后得到浸膏，所得浸膏经硅胶柱色谱，以石油醚
‑
乙酸乙酯(100:1～1:1)和二氯甲烷/甲醇(50:1～1:1)系统按体积比依次进行梯度洗脱，收集石油醚/乙酸乙酯5:1至二氯甲烷/甲醇30:1的组分，所得组分经ODS柱色谱分离，以乙醇/水梯度洗脱，收集70％～90％组分，再经硅胶柱色谱以二氯甲烷/甲醇按体积比100:1～5:1梯度洗脱，收集20:1～10:1组分，经制备型HPLC，以甲醇/水洗脱，收集110～125min的色谱峰，所得样品经半制备型HPLC色谱，以乙腈/水洗脱，收集24.1min的色谱峰得到化合物1。3.按权利要求2所述的三萜类化合物的制...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁海生，王雨曦，魏玉莲，秦问敏，
申请(专利权)人：中国科学院沈阳应用生态研究所，
类型：发明
国别省市：