一种菌种冻存液及其用途制造技术

本申请公开了一种菌种冻存液及其用途，所述菌种冻存液包含小核菌胶和四氢嘧啶，使用本申请所述的菌种冻存液，所述小核菌属的菌种保藏时间长，可以在

【技术实现步骤摘要】
一种菌种冻存液及其用途


[0001]本申请涉及微生物工程
，尤其涉及一种菌种冻存液及其用途。

技术介绍

[0002]球形小核菌属半知菌亚门真菌。菌核数量较少，球形，卵圆或圆柱形，深褐色，大小0.3
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2mm，表面粗糙，无内外层之别。
[0003]齐整小核菌在PDA培养基上呈辐射状生长，菌落圆形，菌丝白色绢丝状，30℃培养3d长满直径90mm的PDA平板，7d左右菌落表面开始形成菌核。菌核初为白色，渐变为黄色，10d后成熟，最后变成褐色，球形，表面光滑有光泽，直径为0.4～1.7mm。它不产生无性孢子，但很容易形成菌核，该菌核的生存力较强，菌核的这种特性在菌种保存方面很有应用价值。
[0004]四氢嘧啶是一种广泛存在于嗜盐菌(Halomonas Elongata)和链霉菌属、大肠杆菌等非嗜盐菌中的渗透压保护物质，亦可在大肠杆菌脱水和储藏过程中起保护作用，它是渗透压补偿性溶质，可用于渗透压基因诱导剂，能够平衡细胞的渗透压，在高温、冷冻和干燥等逆境下，对酶、DNA、细胞膜和整个细胞提供保护作用；同时可以稳定酶制剂的酶分子结构，在冻融、高温等极端条件下保证酶不失去活性。因此四氢嘧啶是一种细胞全能防护剂，是一种功效卓著的抗压保护分子，也是一种多功能的活性成分。
[0005]在实验室中，小核菌属菌种的保存往往采用试管斜面培养基生长的菌丝体形态存放，这样的保存方法虽然简单有效，但也存在一些弊端，主要是保存时间较短，要达到长期保存菌种的目的，每年需要3～4次的转接活化培养工作，工作量大，耗时费力；另外，反复的转接活化培养会增加菌种的污染和变异的机率。在中国专利CN103396948B中公开了一种稻纹枯病菌菌种长期保存的方法，该方法采用稻纹枯病菌产生的菌核作为菌种保存形态，使用超净工作台风干法进行菌核的脱水干燥，该方法虽然操作简易，但是风干耗时太长，不可控因素太多，脱水的程度不可控，无法量化，容易增加菌种的污染几率，同时在超净台中风干易污染环境。
[0006]在中国专利申请CN110878279A公开了一种替考游动放线菌的保藏方法，其主要保护的是培养基和菌种的培养方式，文中提到的用甘油和硬葡聚糖作为菌种保藏的保护剂，根据硬葡聚糖的添加量在2
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5％可推测硬葡聚糖为水解小核菌胶，1％的水溶液黏度约为2000
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3000mpa.s，作用与甘油的作用差别不大，仅能保证使水不结冰，无法达到更好的保护效果。

技术实现思路

[0007]针对上述问题，本申请提供了一种用于小核菌属的菌种冻存液，所述菌种冻存液中含有小核菌胶和四氢嘧啶，所述小核菌胶不仅可以使水不易结冰，并且由于其可塑性好，隔绝效果尤为突出，所述四氢嘧啶在高温、冷冻和干燥等逆境下，对酶、DNA、细胞膜和整个细胞提供保护作用；同时可以稳定酶制剂的酶分子结构，在冻融、高温等极端条件下保证酶不失去活性，能够更好的保护菌种，将含有小核菌胶和四氢嘧啶的菌种冻存液用于保藏小
核菌属，菌株保藏时间长，并可以在
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40℃保藏两年以上，并且在复苏时仍有100％的萌发率。
[0008]现有技术中使用的冷冻保护剂成分一般选用甘油和某些多元醇类化合物如甘露醇等，也有一些用到二甲基亚砜。甘油和多元醇的主要作用是使水不易结冰，而本申请中的小核菌胶不但能达到如此效果，由于其可塑性好，隔绝空气效果尤为突出。二甲基亚砜能够降低细胞的冰点，减少冰晶的形成，减少自由基对其细胞的损害，改变生物膜对电解质和代谢产物的通透性，但是二甲基亚砜在常温下对细胞有较强的毒性作用，而四氢嘧啶是渗透压补偿性溶质，能够平衡细胞的渗透压，在高温、冷冻和干燥等逆境下，对酶、DNA、细胞膜和整个细胞提供保护作用；同时可以稳定酶制剂的酶分子结构，在冻融、高温等极端条件下保证酶不失去活性，能够更好的保护菌种，因此，本申请所述的冻存液能够更好地保护菌株，并且保藏时间长。
[0009]本申请具体技术方案如下：
[0010]1.组合物在制备菌种冻存液中的应用，其中，所述组合物包含小核菌胶和四氢嘧啶。
[0011]2.组合物在提高冻存菌株复苏萌发率中的应用，其中，所述组合物包含小核菌胶和四氢嘧啶。
[0012]3.根据项1或2所述的应用，其中，所述小核菌胶和四氢嘧啶的质量比为1：1
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5。
[0013]4.一种菌种冻存液，其中，所述菌种冻存液包含小核菌胶和四氢嘧啶。
[0014]5.根据项4所述的菌种冻存液，其中，所述小核菌胶和四氢嘧啶质量比为1：1
‑
5。
[0015]6.根据项4所述的菌种冻存液，其中，所述菌种冻存液的黏度为大于等于5000mPa.s，优选为5000
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10000mPa.s。
[0016]7.根据项1
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3中任一项所述的应用或项4
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6中任一项所述的菌种冻存液，其中，所述菌种为小核菌属。
[0017]8.一种菌种的冻存方法，其中，使用项4
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6中任一项所述的菌种冻存液。
[0018]9.根据项8所述的冻存方法，其中，所述冻存方法包括将菌种与所述菌种冻存液混合之后进行冷冻，其中所述菌种与所述菌种冻存液的比例为8
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15个菌核/mL。
[0019]10.一种菌剂，其中，所述菌剂包括菌体、小核菌胶和四氢嘧啶。
[0020]11.根据项10所述的菌剂，其中，所述菌剂通过项8或9所述的冻存方法制备得到。
[0021]专利技术的效果
[0022]使用本申请所述的菌种冻存液，所述小核菌属的菌种保藏时间长，可以在
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40℃下保藏两年以上，并且经保藏后的小核菌属的菌核在复苏时仍有100％的萌发率，并且使用菌种冻存液的保藏过程简单，盛装菌种的管体积小，便于储存与查找。
具体实施方式
[0023]下面结合所描述的实施方式对本申请做以详细说明。虽然显示了本申请的具体实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本申请而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本申请，并且能够将本申请的范围完整的传达给本领域的技术人员。
[0024]需要说明的是，在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定组件。本领
域技术人员应可以理解，技术人员可能会用不同名词来称呼同一个组件。本说明书及权利要求并不以名词的差异作为区分组件的方式，而是以组件在功能上的差异作为区分的准则。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本申请的较佳实施方式，然而所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本申请的范围。本申请的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
[0025]本申请提供了组合物在制备菌种冻存液中的应用，其中，所述组合物包含小核菌胶和四氢嘧啶。
[0026]本申请采用含有小核菌胶和四本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.组合物在制备菌种冻存液中的应用，其特征在于，所述组合物包含小核菌胶和四氢嘧啶。2.组合物在提高冻存菌株复苏萌发率中的应用，其特征在于，所述组合物包含小核菌胶和四氢嘧啶。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述小核菌胶和四氢嘧啶的质量比为1：1
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5。4.一种菌种冻存液，其特征在于，所述菌种冻存液包含小核菌胶和四氢嘧啶。5.根据权利要求4所述的菌种冻存液，其特征在于，所述小核菌胶和四氢嘧啶质量比为1：1
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5。6.根据权利要求4所述的菌种冻存液，其特征在于，所述菌种冻存液的黏度为大于等于5000mPa.s，优选为5000
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【专利技术属性】
技术研发人员：马良，孙劭靖，陆震，王瑞妍，王恩旭，周贤龙，郭学平，
申请(专利权)人：华熙生物科技天津有限公司北京华熙荣熙生物技术研究有限公司，
类型：发明
国别省市：