用于帕金森病诊断、辅助诊断或早期筛查的引物组制造技术

本发明专利技术涉及用于帕金森病诊断、辅助诊断或早期筛查的引物组，属于核酸检测技术领域。本发明专利技术提供了用于帕金森病诊断、辅助诊断或早期筛查的引物组，包括靶向Syt11基因的第一引物组和靶向内参基因的第二引物组，靶向Syt11基因的第一引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1～10任一项所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.11～20任一项所示的反向引物。以正常人外周血中Syt11基因mRNA表达量均值的1.5倍作为检测线，59.1％PD患者外周血中Syt11基因mRNA的表达量上调，且外周血中Syt11基因mRNA表达量上调的92.9％的人群是PD患者，表明引物组能够实现帕金森病诊断。组能够实现帕金森病诊断。组能够实现帕金森病诊断。

【技术实现步骤摘要】
用于帕金森病诊断、辅助诊断或早期筛查的引物组


[0001]本专利技术涉及用于帕金森病诊断、辅助诊断或早期筛查的引物组，属于核酸检测


技术介绍

[0002]帕金森综合征特指各种原因，如脑血管病、脑动脉硬化、感染、中毒、外伤、药物以及遗传突变等，造成的以运动迟缓为主的一组临床症候群，属于神经系统变性重大脑病，多发生在50岁以上的老年人群。现阶段，主要将帕金森综合征分为原发性帕金森病、帕金森叠加综合征、继发性帕金森综合征和遗传变性病性帕金森综合征。其中，原发性帕金森综合征即为帕金森病(Parkinson
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sdiseases,PD)，其常见症状主要为运动迟缓、肌肉僵直、静止性震颤和姿势步态失稳等运动障碍，常常还伴随有抑郁、痴呆、睡眠剥夺、嗅觉障碍、疼痛、尿失禁、便秘等一系列非运动性障碍，且非运动症状往往比运动症状出现早10年甚至更久的时间，为PD的早期诊断提供了很长的窗口期。
[0003]目前，临床上主要通过运动障碍与多巴胺能神经元凋亡两大指征诊断作为帕金森病的临床诊断金标准。然而，运动障碍出现时，帕金森病患者多巴胺能神经元的凋亡与缺失常已高达60％以上，因多巴胺能神经元不可再生，给帕金森病的临床治疗带来困难，目前临床尚无有效的根治方案。因此，帕金森病的临床诊治至今依然是个难题。若能在帕金森病早期对帕金森病患者进行诊断，并根据诊断结果在DA神经元死亡前对帕金森病患者进行保护或预防性治疗，有望实现帕金森病的预防和根治。
[0004]帕金森病存在一定的遗传机制，包括PARK1(SNCA)、PARK2(Parkin)、PARK6(Pink1)、PARK7(DJ
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1)和PARK8(LRRK2)在内的大量基因均被证实与帕金森病的发生具有密切的遗传相关性。虽然关于这些遗传相关基因的功能研究有助于理解PD的病理机制，然而，目前已知所有家族遗传性(基因突变)帕金森病仅占全部帕金森病病例的5～10％，因此，基因突变或遗传因素检测作为帕金森病的诊断方法严重受限。现阶段，仍未找到诊断率高的帕金森病诊断、辅助诊断或早期筛查方法。

技术实现思路

[0005]为解决上述问题，本专利技术提供了用于帕金森病诊断、辅助诊断或早期筛查的引物组，所述引物组包括靶向Syt11基因的第一引物组以及靶向内参基因的第二引物组；所述靶向Syt11基因的第一引物组包含核苷酸序列如SEQ IDNO.1～10任一项所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.11～20任一项所示的反向引物。
[0006]在本专利技术的一种实施方式中，所述靶向Syt11基因的第一引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1～3任一项所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ IDNO.10～13任一项所示的反向引物。
[0007]在本专利技术的一种实施方式中，所述Syt11基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.21所示。
[0008]在本专利技术的一种实施方式中，所述内参基因包括ACTB内参基因、GAPDH内参基因、
EF1α内参基因、Ubiquitin内参基因、RPL内参基因、Tubulin内参基因、RPS内参基因、18SrRNA、HPRT内参基因和Cyciophilin内参基因中的一种或一种以上。
[0009]在本专利技术的一种实施方式中，当内参基因为ACTB内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示的的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示的反向引物；当内参基因为GAPDH内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.42所示的的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.43所示的反向引物；当内参基因为EF1α内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQ IDNO.44所示的的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.45所示的反向引物；当内参基因为Ubiquitin内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.46所示的的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.47所示的反向引物；当内参基因为RPL内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.48所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.49所示的反向引物；当内参基因为Tubulin内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.50所示的的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.51所示的反向引物；当内参基因为RPS内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.52所示的的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.53所示的反向引物；当内参基因为18rRNA内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.54所示的的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.55所示的反向引物；当内参基因为HPRT内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQ IDNO.56所示的的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.57所示的反向引物；当内参基因为Cyciophilin内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.58所示的的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.59所示的反向引物。
[0010]本专利技术还提供了用于帕金森病诊断、辅助诊断或早期筛查的试剂盒，所述试剂盒包括上述引物组。
[0011]在本专利技术的一种实施方式中，所述试剂盒还包括荧光定量PCR(Quantitative real time polymerase chain reaction,Q
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PCR)所需试剂。
[0012]在本专利技术的一种实施方式中，所述荧光定量PCR包括SYBR@GREEN法/TB@GREEN法、Taqman@探针法、分子信标法和LUX@Primers法中的一种或一种以上。
[0013]所述荧光定量PCR所需试剂包括2
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TB Green Premix Ex TaqⅡ(Tli RNaseH Plus)以及RNase
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free dH2O。
[0014]在本专利技术的一种实施方式中，所述试剂盒还包括RNA提取所需试剂。
[0015]在本专利技术的一种实施方式中，所述RNA提取包括TRIzol法、梯度密度离心法、离子交换法、盐析法、硅胶膜法和磁珠法中的一种或一种以上。
[0016]在本专利技术的一种实施方式中，所述RNA提取所需试剂包括RNAiso Blood、氯仿、异丙醇以及RNase
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free dH2O。
[0017]在本专利技术的一种实施方式中，所述试剂盒还包括逆转录所需试剂。
[0018]在本专利技术的一种实施方式中，所述逆转录所需试剂包括PrimeScript RT Enzyme Mix I、RT Primer Mix、5
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PrimeScript Buffe本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于帕金森病诊断、辅助诊断或早期筛查的引物组，其特征在于，所述引物组包括靶向Syt11基因的第一引物组以及靶向内参基因的第二引物组；所述靶向Syt11基因的第一引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1～10任一项所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.11～20任一项所示的反向引物。2.如权利要求1所述的用于帕金森病诊断、辅助诊断或早期筛查的引物组，其特征在于，所述靶向Syt11基因的第一引物组包含核苷酸序列如SEQ IDNO.1～3任一项所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.10～13任一项所示的反向引物。3.如权利要求1或2所述的用于帕金森病诊断、辅助诊断或早期筛查的引物组，其特征在于，所述内参基因包括ACTB内参基因、GAPDH内参基因、EF1α内参基因、Ubiquitin内参基因、RPL内参基因、Tubulin内参基因、RPS内参基因、18SrRNA、HPRT内参基因和Cyciophilin内参基因中的一种或一种以上。4.如权利要求3所述的用于帕金森病诊断、辅助诊断或早期筛查的引物组，其特征在于，当内参基因为ACTB内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示的的正向引物和核苷酸序列如SEQ IDNO.23所示的反向引物；当内参基因为GAPDH内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.42所示的的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.43所示的反向引物；当内参基因为EF1α内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.44所示的的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.45所示的反向引物；当内参基因为Ubiquitin内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.46所示的的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.47所示的反向引物；当内参基因为RPL内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQID NO.48所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.49所示的反向引物；当内参基因为Tubulin内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.50所示的的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.51所示的反向引物；当内参基因为RPS内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.52所示的的正向引物和核苷酸序列如SEQ IDNO.53所示的反向引物；当内参基因为18rRNA内参基因时，所述靶向内参基因的第二引物组包含核苷酸序列如SEQ ID NO.54所示的的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.55所示的反向引...

【专利技术属性】
技术研发人员：王昌河，康新江，谢振丽，顾禹豪，陈洋，
申请(专利权)人：苏州百脉得生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：