肿瘤抗PD-L1单抗靶向TGF-β1-siRNA纳米粒子及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种肿瘤抗PD

【技术实现步骤摘要】
肿瘤抗PD
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L1单抗靶向TGF
‑
β1‑
siRNA纳米粒子及其制备方法


[0001]本专利技术涉及一种核酸药物靶向载体，特别涉及一种可以在肿瘤组织局部靶向性投递核酸类药物的肿瘤抗PD
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L1单抗靶向TGF
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β1
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siRNA纳米粒子及其制备方法。

技术介绍

[0002]以核酸分子作为药物的治疗方法在癌症治疗领域是研究热点之一，这种方法通过两种不同的途径发挥作用，一种是在基因组中添加新的基因材料来弥补缺失基因的功能，另外一种是阻止有害基因的表达。
[0003]目前晚期肿瘤治疗的主要手段是内科治疗，但是作为内科治疗重要手段化疗药物存在的毒副作用非常大，使得化疗的应用受到诸多限制。许多和化疗相关的毒副作用是和化疗药物的剂量大小呈正相关关系，降低化疗药物的给药剂量可以减轻毒副作用，但是这又同时会降低抗肿瘤疗效，因此化疗药物的疗效和毒性之间存在着矛盾。近几年来免疫卡控点抑制剂尤其是针对PD
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1/PD
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L1的免疫治疗在实体肿瘤中的应用越来越广泛，但是免疫治疗整体有效率也只有10～30％之间。
[0004]转化生长因子
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β(transforming growth factor
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β，TGF
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β)是一个多功能的细胞因子，在恶性肿瘤中广泛表达。研究发现TGF
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β高表达的恶性肿瘤多为“免疫豁免表型”。肿瘤微环境内TGF
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β可活化基质形成成纤维细胞，细胞基质内胶原沉积。TGF
‑
β参与了“免疫豁免表型”中CTLs细胞浸润至肿瘤免疫微环境的调控，阻断TGF
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β通路后可将“免疫豁免表型”转化为“免疫炎症表型”并显著提高免疫检查点抑制剂αPDL1单抗抗肿瘤效果。RNA干扰(RNA interference，RNAi)是一种由双链RNA诱发而产生的基因沉默现象，其通过抑制特定基因的翻译或转录来抑制特定蛋白的表达。基于RNAi技术衍生出来的小干扰RNA(Small interfering RNA，siRNA)药物已经成为新药开发领域的一个重要研究方向。以TGF
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βmRNA为靶标的小干扰RNA(Small interfering RNA；siRNA)(TGF
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β1
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siRNA)负载基因载体降低TGF
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βmiRNA的表达水平后，将“免疫豁免表型”转化为“免疫炎症表型”并显著提高免疫检查点抑制剂αPDL1。载体一般分为两类：病毒载体和非病毒载体。病毒载体可高效转运基因，但存在转运量有限、毒性、有潜在的病毒复制可能以及花费高等缺点，非病毒型载体虽然制备简单、无免疫原性和比较安全，但是转染效率低是其致命缺点，同样广泛使用的脂质体也具有一定的细胞毒性。
[0005]近年来随着纳米技术的发展,各学科之间的交叉渗透,纳米生物技术逐渐应用于生物治疗中，在制备非病毒载体方面良好的应用前景。另外，靶向性纳米颗粒药物传输系统可以有效地实现对肿瘤组织的定位而减少非特异性药物吸收带来的副作用，现有技术中，已有许多靶向药物载体被报道：如热靶向，即在肿瘤局部进行热疗，使药物在热疗部位靶向性释放；又如磁靶向，是在肿瘤部位外加磁场，从而磁性载体定向到肿瘤。然而，由于热靶向和磁靶向都需要外界的热疗设施或磁场，在实施时，病灶的部位必须明确，因此对于病灶不明、病灶深在或者广泛转移的病灶，就不能充分发挥作用；从手段来说，也相对较为复杂。

技术实现思路

[0006]专利技术目的：为了克服现有技术的上述缺陷，本专利技术提供了一种肿瘤抗PD
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L1单抗靶向TGF
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β1
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siRNA纳米粒子及其制备方法。
[0007]技术方案：本专利技术提供了一种肿瘤抗PD
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L1单抗靶向TGF
‑
β1
‑
siRNA纳米粒子，所述纳米粒子是由PD
‑
L1单抗、聚乙二醇和聚己内酯连接形成肿瘤抗PD
‑
L1单抗靶向载药高分子PDL1
‑
PEG
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PCL，然后物理包裹TGF
‑
β1
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siRNA所形成。
[0008]优选的，所述肿瘤抗PD
‑
L1单抗靶向载药高分子，其结构式如式(I)所示：
[0009][0010]优选的，所述肿瘤抗PD
‑
L1单抗靶向载药高分子的制备方法包括以下步骤：
[0011](1)二甲酰亚胺化聚乙二醇的制备：
[0012](1.1)磺酰化聚乙二醇(sTO
‑
PEG
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OTs)的制备：在碱存在下，以PEG2000和对甲苯磺酰氯(Tscl)为原料制得磺酰化聚乙二醇(sTO
‑
PEG
‑
OTs)；
[0013](1.2)二甲酰亚胺化聚乙二醇(PI
‑
PEG
‑
PI)的制备：磺酰化聚乙二醇(sTO
‑
PEG
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OTs)和邻苯二甲酰亚胺钾反应，制得二甲酰亚胺化聚乙二醇(PI
‑
PEG
‑
PI)；
[0014]反应式如下：
[0015][0016](2)一端氨基被Boc保护的两端氨基化的聚乙二醇(Boc
‑
PEG
‑
NH2)的制备：
[0017](2.1)两端氨基化聚乙二醇(NH2‑
PEG
‑
NH2)的制备：二甲酰亚胺化聚乙二醇(PI
‑
PEG
‑
PI)和水合肼反应，制得两端氨基化聚乙二醇(NH2‑
PEG
‑
NH2)；
[0018](2.2)一端被Boc保护的两端氨基化聚乙二醇的制备：在碱存在下，两端氨基化聚乙二醇(NH2‑
PEG
‑
NH2)和二碳酸二叔丁酯(Boc2O)、1,4
‑
二氧六环(1,4
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dioxane)反应，制得一端被Boc保护的两端氨基化聚乙二醇(Boc
‑
PEG
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NH2)；
[0019]反应式如下：
[0020][0021](3)PEG端氨基化的PEG
‑
PCL共聚物(Boc
‑
PEG
‑
PCL)的制备：
[0022](3.1)末端氨基保护的聚乙二醇
‑
聚己内酯(Boc
‑
PEG
‑
PCL)的制备：在惰性气体保护下，催化剂条件下，一端被Boc保护的两端氨基化聚乙二醇(Boc
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤抗PD
‑
L1单抗靶向TGF
‑
β1
‑
siRNA纳米粒子，其特征在于，所述纳米粒子是由PD
‑
L1单抗、聚乙二醇和聚己内酯连接形成肿瘤抗PD
‑
L1单抗靶向载药高分子PDL1
‑
PEG
‑
PCL，然后物理包裹TGF
‑
β1
‑
siRNA所形成。2.根据权利要求1所述的肿瘤抗PD
‑
L1单抗靶向TGF
‑
β1
‑
siRNA纳米粒子，其特征在于，所述肿瘤抗PD
‑
L1单抗靶向载药高分子，其结构式如式(I)所示：3.根据权利要求1所述的肿瘤抗PD
‑
L1单抗靶向TGF
‑
β1
‑
siRNA纳米粒子，其特征在于，所述肿瘤抗PD
‑
L1单抗靶向载药高分子的制备方法包括以下步骤：(1)二甲酰亚胺化聚乙二醇的制备：(1.1)磺酰化聚乙二醇(sTO
‑
PEG
‑
OTs)的制备：在碱存在下，以PEG2000和对甲苯磺酰氯(Tscl)为原料制得磺酰化聚乙二醇(sTO
‑
PEG
‑
OTs)；(1.2)二甲酰亚胺化聚乙二醇(PI
‑
PEG
‑
PI)的制备：磺酰化聚乙二醇(sTO
‑
PEG
‑
OTs)和邻苯二甲酰亚胺钾反应，制得二甲酰亚胺化聚乙二醇(PI
‑
PEG
‑
PI)；反应式如下：(2)一端氨基被Boc保护的两端氨基化的聚乙二醇(Boc
‑
PEG
‑
NH2)的制备：(2.1)两端氨基化聚乙二醇(NH2‑
PEG
‑
NH2)的制备：二甲酰亚胺化聚乙二醇(PI
‑
PEG
‑
PI)和水合肼反应，制得两端氨基化聚乙二醇(NH2‑
PEG
‑
NH2)；(2.2)一端被Boc保护的两端氨基化聚乙二醇的制备：在碱存在下，两端氨基化聚乙二醇(NH2‑
PEG
‑
NH2)和二碳酸二叔丁酯(Boc2O)、1,4
‑
二氧六环(1,4
‑
dioxane)反应，制得一端被Boc保护的两端氨基化聚乙二醇(Boc
‑
PEG
‑
NH2)；反应式如下：
(3)PEG端氨基化的PEG
‑
PCL共聚物(Boc
‑
PEG
‑
PCL)的制备：(3.1)末端氨基保护的聚乙二醇
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聚己内酯(Boc
‑
PEG
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PCL)的制备：在惰性气体保护下，催化剂条件下，一端被Boc保护的两端氨基化聚乙二醇(Boc
‑
PEG
‑
NH2)和己内酯(ε
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CL)开环聚合反应，制得末端氨基保护的聚乙二醇
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聚己内酯(Boc
‑
PEG
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PCL)；(3.2)聚乙二醇
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聚己内酯(NH2‑
PEG
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PCL)的制备：末端氨基保护的聚乙二醇
‑
聚己内酯(Boc
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PEG
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PCL)和三氟乙酸(Trifluoroacetic acid,TFA)反应，制得聚乙二醇
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聚己内酯(NH2‑
PEG
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PCL)；反应式如下：(4)抗PD
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L1单抗
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聚乙二醇
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聚己内酯(αPDL1
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PEG
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PCL)的制备；在碳二亚胺(EDAC)、N
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羟基硫代琥珀酰亚胺(Suflo
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NHS)存在下，聚乙二醇
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聚己内酯(NH2‑
PEG
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PCL)末端的氨基和抗PD
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L1单抗末端的羧基发生酰胺化反应，制得抗PD
‑
L1单抗
‑
聚乙二醇
‑
聚己内酯(αPDL1
‑
PEG
‑
PCL)；反应式如下：4.根据权利要求3所述的肿瘤抗PD
‑
L1单抗靶向TGF
‑...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴风雷，孙运良，胡楠，田青水，洪义东，张竞舟，
申请(专利权)人：连云港市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：