单克隆抗体及其在制备用于预防/治疗神经系统退行性疾病的生物制品中的应用技术方案

本发明专利技术提供了单克隆抗体及其在制备用于预防/治疗神经系统退行性疾病的生物制品中的应用。与与现有技术相对比，本发明专利技术具有以下优点：本发明专利技术所提供的单克隆抗体在制备用于预防/治疗神经系统退行性疾病的生物制品中的应用，利用重组表达的TREML2蛋白进行TREML2抑制型抗体的筛选，抗体与TREML2受体的亲和力强，能够有效与TREML2的特定区域结合形成复合物，通过有效抑制髓样细胞表达触发受体相关蛋白2实现了针对阿尔茨海默症的治疗，为AD提供新的治疗方案，不仅是对AD治疗药物的新探索，也为今后针对新靶点抗AD药物的研发提供借鉴。今后针对新靶点抗AD药物的研发提供借鉴。今后针对新靶点抗AD药物的研发提供借鉴。

【技术实现步骤摘要】
单克隆抗体及其在制备用于预防/治疗神经系统退行性疾病的生物制品中的应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，具体涉及单克隆抗体及其在制备用于预防/治疗神经系统退行性疾病的生物制品中的应用。
技术背景
[0002]巨噬细胞是一类重要的免疫调节和免疫效应细胞，其存在于所有组织中，具有极大的可塑性和功能多样性，是免疫应答、组织修复、维持机体稳态的关键调节者。巨噬细胞表达各种受体，这些受体是巨噬细胞实现多种功能的基础。巨噬细胞能通过模式识别受体(PRR)，如Toll样受体(TLR)、清道夫受体、Nod样受体等(NLR)，识别病原体相关分子模式(PAMPs)启动固有免疫应答，并通过抗原呈递功能激活适应性免疫应答；通过调理性受体，如免疫球蛋白超家族受体、补体受体等，识别免疫球蛋白或其它免疫复合物，调节免疫应答的强度，保持免疫系统的内稳态；通过多种细胞因子受体实现细胞的迁移、活化和免疫应答的调节功能。
[0003]髓样细胞表达触发受体分子(髓样细胞表达的激发型受体，Triggering receptor expressed on myeloid cells，TREM)是一种免疫球蛋白超家族分子，与NK细胞蛋白44分子同源，除在人和小鼠体内表达外，也表达于鸡、鳐和部分硬骨鱼体内。TREM家族成员包括TREM
‑
1、TREM
‑
2、TREM
‑
3(仅在小鼠体内表达)、TLT(TREM
‑
like transcript)
‑
1、TLT
‑
2等分子，TREM家族分子基因表达于人类染色体6p21区域及小鼠染色体17C3区域。
[0004]阿尔茨海默症(Alzheimer's disease，AD)是一种中枢神经系统退行性疾病，是老年痴呆最常见的表现形式，以细胞外β淀粉样蛋白(βamyloid protein，Aβ)沉积形成的淀粉样斑块、细胞内过度磷酸化tau蛋白形成的纤维缠结及神经炎症为主要特征性病理表现。目前，AD的发病机制尚不完全清楚，无有效的治疗方法。近年来，随着全基因组测序即遗传学研究方法的发展，人们发现髓样细胞触发受体2(Triggering receptor expressed on myeloid cells
‑
2，TREM2)的罕见变异可以使AD的发病风险增加。TREM2在AD病理机制中发挥作用，但其对AD发病的具体影响尚不清楚。
[0005]髓样细胞表达的激发型受体(Triggering receptor expressed by myeloid cells，TREM)家族蛋白参与调控AD的发病。
[0006]近年来多个AD发病相关的风险因子相继被发现，其中同属于TREM家族的TREM2和TREML2(Trem
‑
like transcript 2protein，TLT2)对AD的发展起截然相反的作用。基因遗传学相关研究显示TREM2的R47H突变体是迟发型AD的一个危险因素，而其同家族蛋白TREML2 S144G突变体可以降低AD的风险。目前尚未有研究解释TREM2和TREML2对AD发病风险调控的分子机制。
[0007]TREM是新近发现的属于免疫球蛋白超家族的一类蛋白家族，此蛋白家族多由髓样细胞触发产生，故称髓样细胞激发型受体。在外周组织，TREM主要表达于单核、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞和破骨细胞的细胞膜上，在脑内主要表达于小胶质细胞的胞膜上。作
为模式识别受体家族的成员之一，TREM参与调控炎症反应和细胞成熟，在固有免疫和获得性免疫应答过程中发挥重要作用。人类的TREM基因主要编码两个激活型受体TREM1和TREM2，以及两个抑制型受体TREML1(Trem
‑
like transcript 1protein，TLT1)和TREML2(TLT2)。在人基因组中，TREM3被证明是假基因，目前尚不清楚人TREML3和TREML4是否编码功能性蛋白。
[0008]TREM家族蛋白是AD发病相关Aβ蛋白的潜在受体。
[0009]TREM2被报道可以与脂蛋白、载脂蛋白(ApoE)、凝聚素(clusterin)及热休克蛋白60(HSP60)等结合。最新的研究证实与AD发病密切相关的Aβ是TREM2的配体，能够与TREM2直接结合(KD＝86.5nM)，激活TREM2下游信号。AD风险相关的突变(TREM2 R47H)显著抑制TREM2和Aβ的结合(抑制率＝72％)，提示脑组织中小胶质细胞对Aβ的吞噬作用依赖于TREM2的调控。作为TREM2的同家族蛋白，TREML2极有可能通过结合Aβ发挥生物学功能。目前研究显示B7
‑
H3可以通过特异性的结合TREML2激活T细胞，促进T细胞分泌IL
‑
2和IFN
‑
γ。此外，TREML2也被报道可以与磷脂酰丝氨酸结合，参与调控细胞凋亡；尚无小胶质细胞中TREML2的配体的研究。
[0010]髓样细胞表达触发受体相关蛋白2(Triggering receptor expressed on myeloid cells
‑
like protein 2，TREML2)是申请人经过蛋白序列分析后所获得的高纯度重组人TREML2蛋白，先表达此重组蛋白，再以此筛选单克隆抗体。

技术实现思路

[0011]针对上述存在的拘束局限性，本专利技术提出了一种抗髓样细胞表达触发受体相关蛋白2的单克隆抗体及其应用，克服了
技术介绍
中提到的不足和缺陷。
[0012]为实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：
[0013]本专利技术的第一个专利技术点在于，提供了一种单克隆抗体，所述单克隆抗体重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:2的第26
‑
34、54
‑
62、104
‑
112位氨基酸序列所示，轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:3的第24
‑
33、49
‑
57、90
‑
98位氨基酸序列所示。
[0014]单克隆抗体是抗髓样细胞表达触发受体相关蛋白2(TREML2)的单克隆抗体，简写为3F5。
[0015]单克隆抗体3F5重链可变区的CDR1为：GPAATHDTY；
[0016]单克隆抗体3F5重链可变区的CDR2为：SVVAPTDSD；
[0017]单克隆抗体3F5重链可变区的CDR3为：RPVTTAKEF；
[0018]单克隆抗体3F5轻链可变区的CDR1为：RHADQAPCPA；
[0019]单克隆抗体3F5轻链可变区的CDR2为：AQPLSADTS；
[0020]单克隆抗体3F5轻链可变区的CDR3为：QRILASTST。
[0021]进一步的，上述的一种单克隆本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:2的第26
‑
34、54
‑
62、104
‑
112位氨基酸序列所示，轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:3的第24
‑
33、49
‑
57、90
‑
98位氨基酸序列所示。2.根据权利要求1所述的一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示或为与SEQ ID NO:2序列同源性大于90％的氨基酸序列，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示或为与SEQ ID NO:3序列同源性大于90％的氨基酸序列。3.根据权利要求2所述的一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示或为与SEQ ID NO:4序列同源性大于90％的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示或为与SEQ ID NO:5序列同源性大于90％的氨基酸序列。4.根据权利要求1
‑
3任一所述的一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体是抗髓样细胞表达触发受体相关蛋白2的单克隆抗体，所述髓样细胞表达触发受体相关蛋白2的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所述或为与SEQ ID NO:1序列同源性大于90％的氨基酸序列。5.一种编码权利要求1
‑
4任一所述的单克隆...

【专利技术属性】
技术研发人员：童贝，董咸池，陈剑，简暾昱，丁晓琴，牛冠婷，孟秀花，盖亚男，
申请(专利权)人：南京大学人工智能生物医药技术研究院，
类型：发明
国别省市：