一种高产量高粘度黄原胶的工程菌的构建方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种黄原胶生产菌的构建方法及其应用。本发明专利技术通过对生产菌野油菜黄单胞菌Xanthomonas campestris ATCC33913进行遗传改造，提高黄原胶产品性能。通过敲除竞争途径中的O

【技术实现步骤摘要】
一种高产量高粘度黄原胶的工程菌的构建方法及应用


[0001]本专利技术属于基因工程与食品相关领域，具体涉及通过微生物生产黄原胶，更具体涉及通过生产菌野油菜黄单胞菌进行遗传改造，提高黄原胶产品性能。

技术介绍

[0002]黄原胶(Xanthan Gum)是由野油菜黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris)产生的胞外酸性杂多糖的统称，又名汉生胶、苫顿胶等，为一种高分子量的天然碳水化合物，是目前产量最大的微生物多糖。黄原胶分子的骨架具有五糖的单元结构，由二分子D
‑
葡萄糖、二分子D
‑
甘露糖和一分子D
‑
葡萄糖醛酸组成。黄原胶具增稠性、假塑流变性、水溶性、悬浮性、乳化稳定性、耐酸耐碱、抗盐、抗温、优良的兼容性等特性，广泛应用于化工、食品、采油、印染、造纸、纺织、陶瓷、涂料、医药等行业。
[0003]黄原胶生产属于耗氧发酵，随着产物的生成，发酵液粘度增加，氧气传递效率降低，影响细胞间物质的传递，对产量造成一定的影响。目前已知可以利用改进发酵设备、提高供氧等机械手段以及通过菌种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种产黄原胶的工程菌的构建方法，包括如下步骤：在野油菜黄单胞菌Xanthomonas campestris中敲除基因wxcB获得的重组野油菜黄单胞菌，优选地，所述基因wxcB具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，或其同源基因，优选同源基因与SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列具有至少80％，或至少85％，或至少90％，或至少95％，优选至少99％同源性的序列。2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述敲除是通过基因编辑方法实现。3.如权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述敲除包括如下步骤：步骤1：扩增获得wxcB上下同源臂基因，通过overlap PCR将wxcB基因的上下同源臂连接，以自杀质粒pK18mobsacB为骨架，向质粒上的多克隆位点插入wxcB基因的上下同源臂片段，连接后将连接体系转化至E.coli DH5a菌株，得到转化子，获得O
‑
抗原合成关键基因wxcB基因的敲除质粒pK18
‑
wxcB；步骤2：将所述重组质粒pK18
‑
wxcB电转化至野油菜黄单胞菌中，利用Kana抗性平板筛选单交换菌株，蔗糖致死筛选获得缺失wxcB基因的双交换菌株
△
wxcB。4.根据权利要求1至3任一项所述的构建方法，其特征在于，还包括在重组野油菜黄单胞菌中导入vgb基因，优选地，把vgb基因插入敲除基因的位置进行表达；更优选地，所述vgb基因具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列具有至少80％，或至少85％，或至少90％，或至少95％，优选至少99％同源性的序列。5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述导入vgb基因包括如下步骤；步骤1：扩增获得wxcB基因的上下同源臂，利用基因合成获得密码子优化后的vgb基因，通过overlap PCR获得重组片段：wxcB上同源...

【专利技术属性】
技术研发人员：李金山，殷亮，杨书尧，刘斌，王钦宏，马延和，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：