一种YKL-40单克隆抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种YKL

【技术实现步骤摘要】
一种YKL
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40单克隆抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种YKL
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40单克隆抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]YKL
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40属于几丁质酶样蛋白(Chitinase
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Like Proteins，CLPs)中的一种，又叫几丁质酶
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3样蛋白1(CHI3L1)。YKL
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40是由分子量约为40kDa的肝素和具有高度保守结构域的几丁质结合的糖蛋白组成，因其N端又具有酪氨酸
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赖氨酸
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亮氨酸的YKL序列，故被命名为YKL
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40。哺乳动物不合成几丁质，但可产生两种几丁质酶及几种CLPs，其中包括YKL
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40。该蛋白可由巨噬细胞、软骨细胞、成纤维细胞样滑膜细胞、血管平滑肌细胞和肝星状细胞等多种细胞表达和分泌。YKL
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40作为人体糖基水解酶18家族的糖蛋白成员之一，不具有酶活性，故缺乏降解几丁质的能力，但仍显示寡糖结合能力。现代研究发现YKL
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40在代谢性疾病、心血管疾病、急慢性炎症、癌症等以炎症和组织重建为特点的疾病中水平升高。
[0003]神经系统相关研究表明，YKL
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40能够促进原代星形胶质细胞的迁移。该蛋白的缺失可以改变胶质细胞炎症反应，促进星形胶质细胞和小胶质细胞Aβ吞噬，减轻淀粉样斑块形成，并影响阿尔兹海默症(AD)的疾病进展；在创伤性脑损伤(TBI)相关的神经炎症反应的发生发展过程中，它的缺失会引发更严重的神经病理学现象和更显著的胶质细胞病变进程；此外，YKL
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40的高表达同样可促使主动脉粥样硬化斑块病程加速发展。随着研究的进一步深入，YKL
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40可能成为中枢神经系统相关病的诊断标志和治疗的新靶标。但是目前对于YKL
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40单克隆抗体的研究较为浅显，无法直接应用于医疗研究。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种YKL
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40单克隆抗体及其制备方法和应用，所述单克隆抗体效价好，并且基于得到所述单克隆抗体构建得到的表达载体和重组细胞，易于保存和改造。
[0005]本专利技术提供了一种特异性识别YKL
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40的单克隆抗体10F1，所述单克隆抗体10F1的重链的可变区包括3个互补决定区，氨基酸序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.3所示；
[0006]所述单克隆抗体10F1的轻链可变区包括3个互补决定区，氨基酸序列如SEQ ID NO.4～SEQ ID NO.6所示。
[0007]优选的，所述单克隆抗体10F1的重链的可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
[0008]本专利技术还提供了一种表达上述述单克隆抗体10F1的重组载体，所述重组载体的基础载体包括携带编码重链可变区核苷酸序列的pFUSE
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CHIg
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m2a，和携带编码轻链可变区核苷酸序列的pFUSE2ss
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CLIg
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mk。
[0009]本专利技术还提供了一种表达上述单克隆抗体10F1的重组细胞，所述重组细胞的基础细胞包括真核细胞。
[0010]本专利技术还提供了上述重组细胞的构建方法，包括以下步骤：将编码单克隆抗体10F1重链可变区的基因序列插入pFUSE
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CHIg
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m2a中，得10F1m2a；
[0011]将编码单克隆抗体10F1轻链可变区的基因序列插入pFUSE2ss
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CLIg
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mk中，得10F1mk；
[0012]将10F1m2a和10F1mk的质粒混合后转染真核细胞，得重组细胞。
[0013]优选的，将编码单克隆抗体10F1重链可变区的基因序列插入pFUSE
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CHIg
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m2a的EcoRI和NheI之间；
[0014]将编码单克隆抗体10F1轻链可变区的基因序列插入pFUSE2ss
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CLIg
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mk的EcoRI和NheI之间。
[0015]本专利技术还提供了一种制备上述单克隆抗体10F1的方法，包括以下步骤：培养上述重组细胞48h，收集上清液，上清液中包含所述单克隆抗体10F1。
[0016]本专利技术还提供了表达上述单克隆抗体10F1的杂交瘤细胞。
[0017]本专利技术还提供了上述单克隆抗体10F1在制备检测YKL
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40的试剂中的应用。
[0018]本专利技术还提供了上述单克隆抗体10F1在制备神经系统疾病诊断和/或预后判断的试剂中的应用。
[0019]有益效果：本专利技术提供了一种特异性识别YKL
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40的单克隆抗体10F1，效价良好。本专利技术分别将所述单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区插入不同的基础载体，并将两种重组载体混合后共同转染基础细胞，从而得到可表达单克隆抗体10F1的重组细胞。本专利技术得到的单克隆抗体载体易于保存，易于抗体生产过程质量控制；也方便对抗体做一系列的改造，更深入的研究，更广泛的应用。经实施例验证，本专利技术所述的单克隆抗体10F1或利用重组细胞生产得到的单克隆抗体10F1，可以识别YKL
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40蛋白，具有生物学活性。所述单克隆抗体均可用于YKL
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40抗原检测等其它科学研究，具有非常好的应用价值和非常重要科研指导意义。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0021]图1为CBA法检测免疫小鼠血清抗体效价结果图；
[0022]图2为CBA法筛选阳性杂交瘤细胞结果图；
[0023]图3为纯化后单克隆抗体考马斯亮蓝染色结果图；
[0024]图4为单克隆抗体亚型鉴定结果图，图中每组数据从左到右依次表示IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgM、kappa和lambda；
[0025]图5为单克隆抗体抗体效价测定结果图；
[0026]图6为免疫荧光验证单克隆抗体抗原表位分布情况；(a)该抗体识别位点位于氨基酸序列的293
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383区间；(b)更具体的说明抗体识别位点位于293
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310氨基酸片段上；
[0027]图7为WB验证重组单克隆抗体10F1作用特性结果图。
具体实施方式
[0028]本专利技术提供了一种特异性识别YKL...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性识别YKL
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40的单克隆抗体10F1，其特征在于，所述单克隆抗体10F1的重链的可变区包括3个互补决定区，氨基酸序列如SEQ IDNO.1～SEQ ID NO.3所示；所述单克隆抗体10F1的轻链可变区包括3个互补决定区，氨基酸序列如SEQ ID NO.4～SEQ ID NO.6所示。2.根据权利要求1所述单克隆抗体10F1，其特征在于，所述单克隆抗体10F1的重链的可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。3.一种表达权利要求1或2所述单克隆抗体10F1的重组载体，其特征在于，所述重组载体的基础载体包括携带编码重链可变区核苷酸序列的pFUSE
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CHIg
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m2a，和携带编码轻链可变区核苷酸序列的pFUSE2ss
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CLIg
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mk。4.一种表达权利要求1或2所述单克隆抗体10F1的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞的基础细胞包括真核细胞。5.权利要求4所述重组细胞的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将编码单克隆抗体10F1重链可变区的基因序列插入pFUSE
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【专利技术属性】
技术研发人员：李科，闫亚平，郝文斌，张亚剑，刘瑞曼，王洁，
申请(专利权)人：陕西脉元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：