融合蛋白及其在制备靶向EGFR脑转移的药用外泌体载体中的应用制造技术

本发明专利技术涉及制备抗肿瘤药物技术领域，特别是涉及融合蛋白及其在制备靶向EGFR脑转移的药用外泌体载体中的应用。利用本发明专利技术所提供的融合蛋白制备的靶向EGFR脑转移的外泌体(GE11

【技术实现步骤摘要】
融合蛋白及其在制备靶向EGFR脑转移的药用外泌体载体中的应用


[0001]本专利技术涉及制备抗肿瘤药物
，特别是涉及融合蛋白及其在制备靶向EGFR脑转移的药用外泌体载体中的应用。

技术介绍

[0002]晚期非小细胞肺癌(non
‑
small cell lung cancer，NSCLC)常常合并脑转移，是肺癌患者预后不良的相关因素。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)是最常见NSCLC的敏感基因突变类型，与其他驱动基因突变类型相比，具有较高的脑转移风险。随着EGFR酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor，EGFR
‑
TKI)靶向的广泛使用，EGFR敏感突变NSCLC脑转移的预后及颅内外控制有较大改善。尽管三代EGFR
‑
TKI与一代、二代相比，具有更高的脑脊液渗透率，对脑转移更有效。但获得性耐药及毒性反应大仍是其无法避免的难题，故而针对该突变的相关治疗方案仍需继续探索。

技术实现思路

[0003]为了解决上述问题，本专利技术提供了融合蛋白及其在制备靶向EGFR脑转移的药用外泌体载体中的应用。利用本专利技术所提供的融合蛋白制备的靶向EGFR脑转移的外泌体，具有特异结合EGFR的主动靶向能力，可以实现高效低毒的治疗效果目的，可为肺癌颅内转移的诊断、治疗提供参考依据。
[0004]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0005]本专利技术提供了一种融合蛋白GE11
‑
lamp2b，包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
[0006]本专利技术还提供了上述技术方案所述融合蛋白GE11
‑
lamp2b的编码序列，包括如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
[0007]本专利技术还提供了一种融合蛋白GE11
‑
lamp2b的表达载体，包括上述技术方案所述的编码序列和基础载体。
[0008]优选的，所述基础载体包括pcDNA3.1(
‑
)载体。
[0009]本专利技术还提供了一种靶向EGFR脑转移的外泌体，所述外泌体包括上述技术方案所述的融合蛋白GE11
‑
lamp2b。
[0010]本专利技术还提供了一种分泌上述技术方案所述外泌体的细胞系，包括上述技术方案所述表达载体和真核细胞系。
[0011]本专利技术还提供了所述融合蛋白GE11
‑
lamp2b或上述技术方案所述编码序列或上述技术方案所述表达载体或上述技术方案所述外泌体或上述技术方案所述细胞系在以下一种或多种方面中的应用，包括：
[0012]1)制备抗肿瘤药物、抗肿瘤辅助药物、肿瘤诊断试剂或肿瘤示踪试剂；
[0013]2)制备靶向EGFR的药用外泌体载体。
[0014]优选的，所述肿瘤包括EGFR阳性肿瘤。
[0015]优选的，所述EGFR阳性肿瘤包括EGFR阳性脑转移肿瘤。
[0016]优选的，所述靶向EGFR的药用外泌体载体包括EGFR脑转移的药用外泌体载体。
[0017]有益效果：
[0018]本专利技术提供了一种融合蛋白GE11
‑
lamp2b，包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。利用本专利技术所提供的融合蛋白制备的靶向EGFR脑转移的外泌体(GE11
‑
Exo)，通过靶向肽GE11与外泌体膜蛋白lamp2b融合表达，使靶向肽位于外泌体表面，以lamp2b确保了融合蛋白在外泌体膜表面定位，利用抗EGFR靶向肽GE11对外泌体进行表面修饰来降低脱靶效应，减少不良反应，具有特异结合EGFR的主动靶向能力，可以实现高效低毒的治疗效果目的。电子显微镜、粒径分析仪、westernblot法检测GE11
‑
Exo理化性质良好，脑转移模型小动物活体成像证实GE11
‑
Exo在小鼠脑内高度分布，离体成像证实靶向外泌体高度聚集在颅内肿瘤灶中，可为肺癌颅内转移的诊断、治疗提供参考依据。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0020]图1为化学发光法观察融合蛋白表达情况图；
[0021]图2为透视电镜观察外泌体形态图；
[0022]图3为粒径分析仪检测外泌体粒径结果图；
[0023]图4为外泌体GE11
‑
Exo在PC9细胞膜表面及细胞内的共定位情况图；
[0024]图5为外泌体Exo在PC9细胞膜表面及细胞内的共定位情况图；
[0025]图6为感染luciferase病毒的PC9肺癌细胞和未感染luciferase病毒的PC9肺癌细胞的luciferase表达结果；
[0026]图7为EGFR阳性肺癌细胞脑转移动物模型IVIS LuminaⅡ活体成像图；
[0027]图8为不同时间活体成像拍照结果图；
[0028]图9为离体成像拍照结果和离体成像定量结果图；
[0029]图10为实施例3和对比例4制备的外泌体中6
×
His标签蛋白的表达结果图。
具体实施方式
[0030]本专利技术提供了一种融合蛋白GE11
‑
lamp2b，包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，具体如下：
[0031]MVCFRLFPVPGSGLVLVCLVLGAVRSYAGSGYHWYGYTPQNVIGSGSGSGGSSLELNLTDSENATCLYAKWQMNFTVRYETTNKTYKTVTISDHGTVTYNGSICGDDQNGPKIAVQFGPGFSWIANFTKAASTYSIDSVSFSYNTGDNTTFPDAEDKGILTVDELLAIRIPLNDLFRCNSLSTLEKNDVVQHYWDVLVQAFVQNGTVSTNEFLCDKDKTSTVAPTIHTTVPSPTTTPTPKEKPEAGTYSVNNGNDTCLLATMGLQLNITQDKVASVININPNTTHSTGSCRSHTALLRLNSSTIKYLDFVFAVKNENRFYLKEVNISMYLVNGSVFSIANNNLSYWDAPLGSSYMCNKEQTVSVSGAFQINTFDLRVQPFNVTQGKYSTAQECSLDDDTILIPIIVGAGLSGLIIVIVIAYVIGRRKSYAGYQTLHHHHHH；
[0032]其中第1到第28位氨基酸为信号肽，第29到31位氨基酸为连接肽，第32到第43位氨
基酸为GE11短肽，第44到53位氨基酸为连接肽，第54到第435位氨基酸为外泌体lamp2b膜蛋白区，第436到441位氨基酸为6
×
His标签。
[0033]本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白GE11
‑
lamp2b，其特征在于，包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。2.权利要求1所述融合蛋白GE11
‑
lamp2b的编码序列，其特征在于，包括如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。3.一种融合蛋白GE11
‑
lamp2b的表达载体，其特征在于，包括权利要求2所述的编码序列和基础载体。4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述基础载体包括pcDNA3.1(
‑
)载体。5.一种靶向EGFR脑转移的外泌体，其特征在于，所述外泌体包括权利要求1所述的融合蛋白GE11
‑
lamp2b。6.一种分泌权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜俊，陆远，张晓，张瑞，任新玲，刘振华，万毅，蒲晨，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：