CCHFV重组真核表达载体pVAX1-CCHFV-NP、构建方法和应用技术

本发明专利技术属于生物医学技术领域，具体涉及一种CCHFV重组真核表达载体pVAX1

【技术实现步骤摘要】
CCHFV重组真核表达载体pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP、构建方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种CCHFV重组真核表达载体pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP、构建方法和应用。

技术介绍

[0002]克里米亚
‑
刚果出血热病毒(CCHFV)是一种婢媒自然免疫源性病毒，该病毒可以通过婢虫叮咬而感染，易感染人类，它的临床症状与其他型的出血热相似，潜伏期2
‑
12天左右，临床表现为起病急骤、体温上升、头痛剧烈、恶心呕吐等，有较高的致死率。光学镜下，在鼠脑部的感染组织中能够观察到吉姆萨染色呈嗜碱性的如红细胞大小的细胞质涵体。
[0003]针对CCHFV疫苗的研究虽然有很多，但是目前仍未研发出具有良好疗效的疫苗(参考文献：“郭雷鸣,董兆昱,程林峰.克里米亚
‑
刚果出血热病毒疫苗的研究进展[J].热带医学杂志,2018,18(10):5”)，所以开发针对克里米亚
‑
刚果出血热病毒的疫苗仍是非常有必要的研究。
[0004]CCHFV的基因组中含有M段、S段以及L段三部分，其中M段编码包膜糖蛋白Gc和Gn，是病毒致病的关键蛋白，NP抗原并不是CCHFV疫苗常用的材料，本专利技术以真核表达载体pVAX和NP的完整抗原为基础，构建了真核表达载体pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP，获得了免疫效果良好的重组CCHFV DNA疫苗。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种CCHFV重组真核表达载体pVAX1
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CCHFV
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NP、构建方法和应用。
[0006]本专利技术提供了一种CCHFV重组真核表达载体pVAX1
‑
CCHFV
‑
Gc的构建方法，合成CCHFV毒株的结构蛋白NP的基因，如SEO ID NO.1所示，采用同源重组方法将扩增出的上述基因插入pVAX1质粒载体，构建成pVAX
‑
CCHFV
‑
NP重组真核表达载体。
[0007]优选的，上述CCHFV重组真核表达载体pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP的构建方法，所述CCHFV毒株为IbAr10200。
[0008]优选的，上述CCHFV重组真核表达载体pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP的构建方法，NP的基因插入pVAX1质粒载体的酶切位点为EcoR I与Xba I。
[0009]优选的，上述CCHFV重组真核表达载体pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP的构建方法，
[0010]优选的，上述CCHFV重组真核表达载体pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP，鉴定pVAX
‑
CCHFV
‑
NP重组真核表达载体所用的PCR方法的引物序列如下：
[0011]Primer
‑
F：
[0012]5’‑
TCCAGTGTGGTGGAATTC ATGGAAAACAAGATCGAGGTG
‑3’
；
[0013]Primer
‑
R：
[0014]5’‑
TTAAACGGGCCCTCTAGA CTAGCTCGAGCATGCCCGG
‑3’
。
[0015]本专利技术还提供了一种由上述方法够贱的CCHFV重组真核表达载体pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP。
[0016]本专利技术还提供了一种上述CCHFV重组真核表达载体pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP的应用，所述pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP用于制备CCHFV疫苗。
[0017]优选的，上述CCHFV重组真核表达载体pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP的应用，所述pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP免疫机体后可以抑制CCHFV tecVLP的感染，所以所述pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP用于制备CCHFV tecVLP感染抑制剂。
[0018]优选的，上述CCHFV重组真核表达载体pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP的应用，所述pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP免疫机体后可以有效促进免疫因子IFN
‑
γ、IL
‑
2、IL
‑
4、IL
‑
10的表达，所以所述pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP用于制备免疫因子IFN
‑
γ、IL
‑
2、IL
‑
4、IL
‑
10的表达促进剂。
[0019]优选的，上述CCHFV重组真核表达载体pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP的应用，所述pVAX
‑
LAMP
‑
CCHFV
‑
NP免疫机体后可以有效刺激机体产生以CTL杀伤为代表的细胞免疫应答，所以所述pVAX
‑
LAMP
‑
CCHFV
‑
NP用于制备细胞免疫反应促进剂。
[0020]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0021]1、本专利技术利用真核表达载体pVAX1为基础，构建了重组真核表达载体pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP，最终获得了以上重组CCHFV DNA疫苗(也就是pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP)。免疫动物后检测，pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP能够有效刺激机体产生以CTL杀伤为代表的细胞免疫应答。此外，以上疫苗可以有效保护机体免受CCHFV的攻击，具有很好的动物保护效果。以上结果提示，pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP疫苗具有作为CCHFV安全高效新型疫苗的潜力。
[0022]与以往的研究及专利相比，我们使用的是pVAX1载体，该载体安全性好，表达量高，已被美国FDA认证许可用于人类DNA疫苗。此外，我们研究的抗原是富含CCHFV中和抗原表位的NP蛋白，本专利技术使用的是NP的完整抗原，能够充分刺激机体的免疫反应，无论从抗原的种类以及同一抗原下的广度，本专利技术都更胜一筹。
附图说明
[0023]图1为pVAX
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CCHFV重组真核表达载体pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP的构建方法，其特征在于，合成CCHFV毒株的结构蛋白NP的基因，如SEO ID NO.1所示，采用同源重组方法将上述基因插入pVAX1质粒载体，构建成pVAX
‑
CCHFV
‑
NP重组真核表达载体。2.根据权利要求1所述的CCHFV重组真核表达载体pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP的构建方法，其特征在于，所述CCHFV毒株为IbAr10200。3.根据权利要求2所述的CCHFV重组真核表达载体pVAX1
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CCHFV
‑
NP的构建方法，其特征在于，NP的基因插入pVAX1质粒载体的酶切位点为EcoR I与Xba I。4.根据权利要求3所述的CCHFV重组真核表达载体pVAX1
‑
CCHFV
‑
NP的构建方法，其特征在于，鉴定pVAX
‑
CCHFV
‑
NP重组真核表达载体所用的PCR方法的引物序列如下：Primer
‑
F：5
’‑
TCCAGTGTGGTGGAATTCATGGAAAACAAGATCGAGGTG
‑3’
；Primer
‑
R：5
’‑
TTAAACGGGCCCTCTAGACTAGCTCGAGCATGCCCGG
‑3’
。5.根据权利要求1
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张芳琳，胡永亮，程林峰，张亮，叶伟，马宏炜，刘赫，张莲青，强遵先，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：