一种刺梨发酵获得多种三萜的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种刺梨发酵获得多种三萜的制备方法，属于植物提取技术领域，这种刺梨发酵获得多种三萜的制备方法，包括制渣、菌种扩培、发酵、提纯和蒸馏，通过制备培养基步骤中添加多种复合酶和乳酸菌及多种营养成分，对后续发酵步骤中的菌种生存环境达到一个先扩培预发酵的作用，让微生物繁殖速度增快，最终达到让刺梨果渣中的多种三萜类得到更好的提取，经过实验对比，发现按照本发明专利技术生产制备多种三萜的方法能达到多种三萜提取量远超于常规刺梨果渣中的多种三萜提取量。梨果渣中的多种三萜提取量。

【技术实现步骤摘要】
一种刺梨发酵获得多种三萜的制备方法


[0001]本专利技术涉及植物提取
，具体为一种刺梨发酵获得多种三萜的制备方法。

技术介绍

[0002]刺梨是一种蔷薇科植物缫丝花的果实，刺梨的果肉脆甜，有浓芳香味，营养丰富，是滋补健身的佳果，秋季成熟，去刺后洗净、除去种子，可以鲜吃或者晒干用于入药等，具有消食健脾、收敛止泻、消渴解暑、解酒等功效。刺梨中含有多种微量元素，其中包含三萜类，经过临床机构验证，刺梨中的三萜类具有诱导癌细胞凋亡、使癌细胞向正常细胞转化的功效。
[0003]经检索，现有技术中，中国专利申请号：CN201710929795.8公布了一种多种三萜提取物在制备预防和治疗酒精性肝病药物、保健品和保健食品中的应用，但该专利技术中仍然存在以下问题：刺梨鲜果在破碎榨汁的过程后，刺梨果汁本就具有药用价值再用于提取多种三萜过于浪费，从刺梨果渣中提取出来的三萜类含量很少，进而容易因提取技术问题造成刺梨果渣中多种三萜成分的浪费。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服上述
技术介绍
困难，提供一种能提高刺梨果渣中多种三萜含量的多种三萜生产制备方法。
[0005]为达到上述目的，采用的技术方案为：一种刺梨发酵获得多种三萜的制备方法，包括以下步骤：（1）制渣：刺梨鲜果制作刺梨果渣，冷藏备用；（2）制备培养基:200ml蒸馏水和10g煮沸5min后晾凉的乳酸菌浓缩液以及多种复合酶充分混合，静置2
‑
3h后得到菌液1，将菌液1加入葡萄糖5.0g、黄豆粉5g、红薯淀粉5g、琼脂5g、酵母膏0.01g、维生素B 0.01g、K2HPO4 1.5g、MgSO4 0.2g和1L蒸馏水充分混合，在pH 5
‑
6、35
‑
37℃的环境下静置4
‑
6小时，最后0.1 Mpa灭菌30min，得到菌液2；（3）菌株扩培：将步骤（2）中得到的菌液2依次放于培养瓶、种子罐和发酵罐中扩大培养，最终获得培养菌液；（4）发酵：将步骤（3）的培养菌液与将50g的刺梨果渣搅拌均匀后放置于恒温35
‑
37℃的无菌环境下自然发酵48h，得到刺梨发酵液；（5）提纯：将步骤（4）得到的刺梨发酵液用75%纯度的乙醇回流2
‑
3次，回收乙醇，得到滤液A；（6）蒸馏：接着将滤液A过滤，将沉淀部分用蒸馏水洗1
‑
3次，在40℃减压真空干燥，得到多种三萜粉末。
[0006]进一步的，所述步骤（1）中制备的果渣为100
‑
150目。
[0007]进一步的，所述步骤（2）中的复合酶包括：β—葡聚糖酶3g，纤维素酶5g、果胶酶5g和蛋白酶0.5g。
[0008]进一步的，所述步骤（2）中的操作环境为无菌环境下操作。
[0009]进一步的，所述步骤（3）在进行菌株扩培需要将步骤（2）得到多种三萜扩培基进行冷却至室温。
[0010]进一步的，所述步骤（6）中的过滤用到的是孔径为0.5～1μm的微滤膜。
[0011]进一步的，所述步骤（2）中添加的乳酸菌溶液或为醋酸菌浓缩液。
[0012]采用上述方案的有益效果为：这种刺梨发酵获得多种三萜的制备方法，包括制渣、菌种扩培、发酵、提纯和蒸馏，通过制备培养基步骤中添加多种复合酶和乳酸菌及多种营养成分，对后续发酵步骤中的菌种生存环境达到一个先扩培预发酵的作用，让微生物繁殖速度增快，最终达到让刺梨果渣中的多种三萜类得到更好的提取，经过实验对比，发现按照本专利技术生产制备多种三萜的方法能达到多种三萜提取量远超于常规刺梨果渣中的多种三萜提取量。
具体实施方式
[0013]下面结合本专利技术的具体实施例，对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述。所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部。基于本专利技术中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0014]实施例1一种刺梨发酵获得多种三萜的制备方法，包括以下步骤：（1）制渣：刺梨鲜果制作刺梨果渣，冷藏备用；（2）制备培养基:200ml蒸馏水和10g煮沸5min后晾凉的乳酸菌浓缩液以及多种复合酶充分混合，静置2
‑
3h后得到菌液1，将菌液1加入葡萄糖5.0g、黄豆粉5g、红薯淀粉5g、琼脂5g、酵母膏0.01g、维生素B 0.01g、K2HPO4 1.5g、MgSO4 0.2g和1L蒸馏水充分混合，在pH 5
‑
6、35
‑
37℃的环境下静置4
‑
6小时，最后0.1 Mpa灭菌30min，得到菌液2；（3）菌株扩培：将步骤（2）中得到的菌液2依次放于培养瓶、种子罐和发酵罐中扩大培养，最终获得培养菌液；（4）发酵：将步骤（3）的培养菌液与将50g的刺梨果渣搅拌均匀后放置于恒温35
‑
37℃的无菌环境下自然发酵48h，得到刺梨发酵液；（5）提纯：将步骤（4）得到的刺梨发酵液用75%纯度的乙醇回流2
‑
3次，回收乙醇，得到滤液A；（6）蒸馏：接着将滤液A过滤，将沉淀部分用蒸馏水洗1
‑
3次，在40℃减压真空干燥，得到多种三萜粉末。
[0015]在本专利技术中，做出了以下对照组实验，分别以
①
刺梨果渣直接提取多种三萜
②
刺梨果渣普通发酵提取多种三萜
③
刺梨果渣添加了步骤（2）中的多种复合酶后提取多种三萜（复合酶包括：β—葡聚糖酶3g，纤维素酶5g、果胶酶5g和蛋白酶0.5g。），分别对50g刺梨果渣在37℃，自然pH的同等环境下静置发酵3h后进行提纯和蒸馏，对三组对照组进行提取多种三萜并记录含量，得到以下实验数据：含量/项目不发酵普通发酵复合酶发酵多种三萜含量6.13%8.67%13.28%从以上实验结果中看出，使用本专利技术后对相同克重的刺梨果渣提取的多种三萜的
含量明显上升，多种三萜含量复合酶发酵＞普通发酵＞不发酵，说明了在对刺梨果渣进行提取时，复合酶确实起到了对多种三萜含量的提升作用。
[0016]因为水果类本身含的营养物质较少，微生物在其繁殖的速率较慢，所以本专利技术中在对果渣添加多种复合酶后，做出以下对照组对步骤（2）中扩培添加的营养材料进行实验选择：（实验步骤为选择50g刺梨果渣对刺梨果渣混合步骤（2）中相同的复合酶
→
加入
①‑⑤
不同的营养成分
→
恒温35
‑
37℃的无菌环境下自然发酵48h，得到刺梨发酵液
→
提纯蒸馏记录多种三萜的含量）
①
葡萄糖5.0g、黄豆粉5g、琼脂5g、酵母膏0.01g、维生素B 0.01g、K2HPO4 1.5g、MgSO4 0.2g和1L蒸馏水
②
葡萄糖5.0g、黄豆粉5g、红薯淀粉5g、琼脂5g、酵母膏0.01g、维生素B 0.01g、K2HPO4 1.5g、MgSO4 0.2g和1L蒸馏水<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种刺梨发酵获得多种三萜的制备方法，其特征是：包括以下步骤：（1）制渣：刺梨鲜果制作刺梨果渣，冷藏备用；（2）制备培养基:200ml蒸馏水和10g煮沸5min后晾凉的乳酸菌浓缩液以及多种复合酶充分混合，静置2
‑
3h后得到菌液1，将菌液1加入葡萄糖5.0g、黄豆粉5g、红薯淀粉5g、琼脂5g、酵母膏0.01g、维生素B 0.01g、K2HPO4 1.5g、MgSO4 0.2g和1L蒸馏水充分混合，在pH 5
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6、35
‑
37℃的环境下静置4
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6小时，最后0.1 Mpa灭菌30min，得到菌液2；（3）菌株扩培：将步骤（2）中得到的菌液2依次放于培养瓶、种子罐和发酵罐中扩大培养，最终获得培养菌液；（4）发酵：将步骤（3）的培养菌液与将50g的刺梨果渣搅拌均匀后放置于恒温35
‑
37℃的无菌环境下自然发酵48h，得到刺梨发酵液；（5）提纯：将步骤（4）得到的刺梨发酵液用75%纯度的乙醇回流...

【专利技术属性】
技术研发人员：林友钧，陈慧如，
申请(专利权)人：贵州佳义生物科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：