氨肽酶重组菌、氨肽酶及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了氨肽酶重组菌、氨肽酶及其制备方法和应用，属于生物制备技术领域。本发明专利技术通过氨肽酶祖先序列构建获得具有编码氨肽酶基因核酸序列，并通过该核苷酸序列构建含有该祖先序列基因的重组表达载体及重组菌，通过重组菌制备得到氨肽酶，并利用该重组氨肽酶制备L

【技术实现步骤摘要】
氨肽酶重组菌、氨肽酶及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物制备
，尤其涉及氨肽酶重组菌、氨肽酶及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]L
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肌肽，是由β
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丙氨酸和L
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组氨酸组成的一种天然活性二肽，于1900年首次在牛肉中发现，在哺乳动物大脑、肌肉和其他组织中广泛存在，易溶于水、0.1M盐酸和0.1M氢氧化钠，在无水乙醇、三氯甲烷、乙腈等中几乎不溶。
[0003]研究表明，L
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肌肽具有良好的pH缓冲性能，有很强的抗氧化能力，在抗衰老、促进伤口愈合，清除自由基等方面可以发挥很好的作用，对高血压、心脏病、老年性白内障、溃疡等都有治疗效果。相比于其他抗氧化剂，L
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肌肽具有抗氧化能力强、无毒副作用、具多种生理活性等优点，因此在医药、保健、美容等领域具有广泛的应用前景。
[0004]目前，L
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肌肽的生产方法主要有两种：化学合成法和生物合成法，采用化学合成法，需要对底物L
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组氨酸和β
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丙氨酸的活性基团进行保护或活化，并且化学合成反应步骤繁琐，反应条件剧烈，反应过程中副产物较多，反应工艺不够环保，因此未能受到人们重视。
[0005]采用微生物酶法合成L
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肌肽，反应条件温和，绿色环保，具有良好的工业化应用前景。目前微生物酶法催化合成L
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肌肽的研究相对较少，且所报道的研究中大多存在需添加ATP以及反应时间较长等缺点。氨肽酶催化生成L
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肌肽是目前研究最广泛的用于生产L
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肌肽的绿色方法，故本专利技术尝试通过将已报道的具有合成L
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肌肽功能的氨肽酶基因进行祖先序列构建，以期获得酶活较高的氨肽酶基因。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的不足，本专利技术提供了氨肽酶重组菌、氨肽酶及其制备方法和应用。本专利技术通过氨肽酶祖先序列构建获得具有编码氨肽酶基因核酸序列，并通过该核苷酸序列构建含有该祖先序列基因的重组表达载体及重组菌，通过重组菌制备得到氨肽酶，并利用该重组氨肽酶制备L
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肌肽。本专利技术采用微生物酶法合成L
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肌肽，反应时间短、制备成本低，绿色、高效，具有广泛的应用前景。
[0007]本专利技术的技术方案如下：
[0008]一种氨肽酶，所述氨肽酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示。
[0009]所述SEQ ID NO.3具体为：
[0010]MKRARLRDLGITIGRLPTGPYNAITDVPGVRVGHTTIIEDDPHVVNTGVTTILPQDGEVWEHHVFAGYFRFNGSGEMTGSHWLEESGLLSSPVIITNSFGVGACYDALVKYAAEQDPTAPFTLPVIAETFDGWLSDIGAMAVTPEHVREALENARSGPVAEGNVGGGTGMITMGFKAGTGTSSRVVEVEGEGYTVGALVQSNFGGARFLTINGVPVGRLIPADQVPVPWEEPPREDGSIIVIIATDAPLLPHQCKRLARRATLGVARTGGWGSNYSGDIFLAFSTGNRLPRQPEEPVYGLKMLPNEEMDPLFQGAVEATEEAILNAICMAETMKGRKGREVKALPLDRLKEILKRPGRR；
[0011]所述SEQ ID NO.4具体为：
[0012]MPDTPGRERARIRELLPNLYLGRFPPGPRNSLTDVPGVLVSTQSIITPSDPKHHEVNTGVTTILPRKDWFESGCYAGIFRFNGSGEMTGSHWIEETGLLNSPIVITNSFGVGAAYNGVLEYAVRHHKDENGLADWFILPVVAETYDGWLSDIGAFAVTPEHVVEGIENASSDPVKEGNTGGGTGMICHGFKGGTGSSSRVVPGVKRDEKGEREQKEYTIGVLVQANYGRREDLRVGGVPVGRLLAEEGAAARGKKLGPAEPQKDGSIIVVIATDAPLLPIQLQRLAKRATVGLARVGGFGFNYSGDIFLAFSTASEIPRETTAGWTPTPLQPQEVLDDETINALFEAAADAVEEAIYNAICMAETTTGPQGRTVKALDLERLKEIMKRHAT。
[0013]进一步地，所述氨肽酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。
[0014]所述SEQ ID NO.1具体为：
[0015]ATGAAGCGTGCCCGTCTGCGTGATCTGGGCATTACCATTGGCCGCCTGCCGACAGGTCCGTATAATGCTATTACCGATGTTCCGGGTGTGCGTGTGGGTCATACCACCATTATTGAAGATGATCCGCATGTGGTTAACACCGGCGTTACCACCATTCTGCCGCAGGATGGCGAAGTTTGGGAACATCATGTTTTTGCCGGTTATTTTCGTTTCAACGGTAGCGGTGAAATGACCGGCAGTCATTGGCTGGAAGAAAGTGGCCTGCTGAGTAGTCCGGTGATTATTACCAATAGCTTTGGCGTGGGCGCATGTTATGATGCACTGGTTAAATATGCCGCAGAACAGGACCCTACCGCACCGTTTACCCTGCCTGTGATTGCCGAAACCTTTGATGGCTGGCTGAGCGATATTGGTGCAATGGCTGTGACCCCGGAACATGTTCGTGAAGCCCTGGAAAATGCCCGCAGTGGTCCGGTTGCAGAAGGTAATGTGGGTGGCGGCACCGGAATGATTACAATGGGTTTTAAAGCAGGCACCGGCACCAGTAGCCGCGTTGTGGAGGTTGAAGGCGAAGGTTATACCGTTGGTGCCCTGGTGCAGAGCAATTTTGGCGGTGCCCGCTTTCTGACCATTAATGGTGTTCCGGTTGGCCGTCTGATTCCGGCAGATCAGGTTCCGGTGCCGTGGGAGGAACCTCCTAGAGAAGATGGTAGCATTATTGTTATCATCGCAACCGATGCCCCGCTGCTGCCTCATCAATGCAAACGTCTGGCCCGTCGTGCCACCTTAGGTGTTGCACGTACCGGCGGTTGGGGTAGTAATTATAGCGGCGATATTTTTCTGGCCTTTAGTACCGGCAATCGCCTGCCGCGTCAGCCTGAGGAGCCTGTGTATGGTCTGAAAATGCTGCCGAATGAAGAAATGGACCCTCTGTTTCAGGGCGCCGTTGAAGCAACCGAAGAAGCCATTCTG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种氨肽酶，其特征在于，所述氨肽酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示。2.根据权利要求1所述的氨肽酶，其特征在于，所述氨肽酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。3.一种重组表达载体，其特征在于，表达含有编码权利要求1
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2任一项所述的氨肽酶的表达载体。4.一种重组菌，其特征在于，表达如权利要求3所述的重组表达载体的菌株。5.一种权利要求4所述重组菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：根据氨肽酶祖先序列重建技术挖掘出的祖先序列进行密码子优化后，获得如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，将核苷酸序列与表达载体连接，得到如权利要求3所述的重组表达载体；将重组表达载体转化至大肠杆菌感受态细胞，获得重组菌。6.根据权利要求5所述的重组菌的构建方法，其特征在于，所述大肠杆菌为E.coliBL21(DE3)。7.根据权利要求5所述的重组菌的构建方法，其特征在于，所述表达载体为pET28a(+)。8.一种权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：张梁，刘帆，方亚坤，辛瑜，顾正华，郭自涛，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：