一种贴敷类化妆品中微生物的快速检测方法技术

本发明专利技术属于化妆品质检领域，具体涉及一种贴敷类化妆品中微生物的快速检测方法。该方法包括以下步骤：取样：从贴敷类化妆品获取样品，样品量不少于5g；在增菌液中增菌：将所取样品在LP增菌液或者SCDLP液体培养基中过夜培养；提取基因组DNA：使用水浴法提取在增菌液中增菌培养后的菌体的基因组DNA；以基因组DNA为模板，在用于检测待测菌的LAMP反应体系中进行扩增反应。本发明专利技术提供了一种贴敷类化妆品中微生物的快速检测方法，能够对面膜、眼贴等贴敷类化妆品中的微生物进行快速检测。采用本发明专利技术的方法进行检测，具有方便、快速、特异性好的优点。点。

【技术实现步骤摘要】
一种贴敷类化妆品中微生物的快速检测方法


[0001]本专利技术属于化妆品质检领域，具体涉及一种贴敷类化妆品中微生物的快速检测方法，及其应用。

技术介绍

[0002]面膜、眼贴等贴敷类化妆品是将护肤有效成分用辅助材料吸收，贴敷于面部或眼部，让有效成分通过局部吸收，起到清洁保护、滋润美白、祛斑去皱等效果的一类化妆品。
[0003]由于面部和眼部皮肤较为敏感，同时，贴敷类化妆品的液体环境为金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、粪大肠菌群等微生物的繁殖生长提供了有利环境，因此针对贴敷类化妆品中微生物的检测十分重要。然而，现在还没有针对面膜、眼贴等贴敷类化妆品中微生物的检测方法。虽然可以借鉴《中国药典》中药品的无菌检查法对贴敷类化妆品进行质检，但该方法为传统培养法，操作繁琐、耗时长，约需4
‑
7天，难以满足市场需求。因此，亟需发展一种针对贴敷类化妆品中微生物的快速检测方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题在于克服目前贴敷类化妆品中微生物没有针对性强的检测方法、以及现有微生物传统检测方法操作繁琐、耗时长的缺陷。
[0005]本专利技术提供一种贴敷类化妆品中微生物的快速检测方法，所述方法包括如下步骤：（1）取样：从贴敷类化妆品获取样品，样品量不少于5g；（2）在增菌液中增菌：将所取样品在LP增菌液中过夜培养；（3）提取基因组DNA：使用水浴法提取在增菌液中增菌培养后的菌体的基因组DNA；（4）以基因组DNA为模板，在针对待测菌的LAMP反应体系中进行扩增反应；（5）通过判断反应结果是否为阳性，确定待测样品中是否存在待测菌。
[0006]本专利技术的方法中，所述的取样为，每批贴敷类化妆品可以随机抽两个或两个以上包装完好的单位，试样量不少于5g，更好的，不少于10g。
[0007]本专利技术的方法中，所述的增菌为取上述试样10g放入装有增菌液的容器中，36
o
C
±
1 oC
培养18
‑
24小时。例如可以是36
o
C培养18小时，或者36
o
C培养24小时。
[0008]本专利技术的方法中，所述增菌液可以是LP增菌液或者SCDLP液体培养基。LP增菌液或者SCDLP液体培养基都可以用于培养细菌并使之增殖，但是LP培养液成分更为简单、成本更低，对于金黄色葡萄球菌增殖效果更佳。优选为LP培养液（即LP增菌液），其配方为：氯化钠5g、葡萄糖2g、卵磷脂1g、吐温20.7g，蒸馏水1000ml，其制法为：将上述成分加热溶解后，调pH值为7.2
‑
7.4，在121
o
C高压灭菌20min。
[0009]本专利技术的方法中，所述的提取基因组DNA，为水煮法。优选地为沸水浴，时间为10
‑
30 min，例如，15min、20 min、25 min等。
[0010]本专利技术的方法中，所述的特定反应体系为包含能扩增待测菌基因组特异性碱基序
列引物组的PCR反应体系，LAMP反应体系等。
[0011]本专利技术的方法中，所述的待测菌可以为金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、粪大肠菌群、霉菌、酵母菌等常见的菌种。
[0012]本专利技术的方法可以用于检测贴敷类化妆品中的微生物。当所述的待测菌为金黄色葡萄球菌时，基因组特异性碱基序列的引物组为：F3：5
’‑ꢀ
TAAAGTCACACACAATATAG
ꢀ‑3’ꢀ
（SEQ ID NO：1）；B3：5
’‑ꢀ
TGCCTAACATTGATGCTG
ꢀ‑3’ꢀ
（SEQ ID NO：2）；FIP：5
’‑ꢀ
GTCGTTGGTGGCAATTGAGGAGTATCGTTCCAGAGCTGTGA
ꢀ‑3’
； （SEQ ID NO：3）；BIP：5
’‑ꢀ
CGACTAGCGGTAGTAATGATTGGCCACTTCGCTATGGAACGTAAC
ꢀ‑3’ꢀ
（SEQ ID NO：4）。
[0013]本专利技术的方法中，所述扩增反应体系包括聚合酶反应缓冲液，Mg
2+
，dNTP，引物组、DNA聚合酶中的一种或多种。
[0014]本专利技术的方法中，在一个优选实施例中，所述扩增反应体系为：1
×ꢀ
Bst DNA聚合酶反应缓冲液，2
‑
9mmol/L Mg
2+
（MgSO4或MgCl2），1.0
‑
1.6mmol/L dNTP， 0.15
‑
0.3
µ
mol/L的F3和B3引物，0.8
‑
2.0
µ
mol/L的FIP和BIP引物，0.16
‑
0.64U/μL Bst DNA聚合酶和0
‑
1.5mol/L甜菜碱。
[0015]本专利技术的方法中，所述的扩增反应的反应程序为
①
65℃孵育60min；
②
80℃终止反应5min。
[0016]本专利技术不限制通过其他适宜反应程序来实现本专利技术检测方法。基于本领域常识可将上述各优选条件进行任意组合，均属本专利技术保护范围。
[0017]本专利技术为化妆品质检领域提供了一种贴敷类化妆品中微生物的快速检测方法。本专利技术有益效果包括：采用本专利技术检测方法具有操作简便、耗时短的优点。与目前常用的检测方法相比，本专利技术实现了对贴敷类化妆品中微生物的快速检测，操作简单，用时短，特异性强，非常适于化妆品质检领域推广使用。
具体实施方式
[0018]本专利技术公开了一种贴敷类化妆品中微生物的快速检测方法，属于化妆品质检领域。本专利技术所提供的方法包括如下步骤（1）取样；（2）在增菌液中增菌；（3）提取基因组DNA；（5）以基因组DNA为模板，在特定反应体系中进行扩增反应；（5）通过判断反应结果是否为阳性，确定待测样品中是否存在待测微生物。本方法操作简便、耗时短，检测效率高，适于面膜、眼贴等贴敷类化妆品中微生物的快速检测。
[0019]下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
[0020]实施例1取样和增菌取样：从每批眼贴（“炳济堂”护眼贴，批号：20210912）随机抽两个或两个以上包装完好的单位，试样量不少于10g。
[0021]增菌：首先配制LP增菌液：氯化钠5g、葡萄糖2.0g、卵磷脂1g、吐温20 7g，蒸馏水1000ml，将上述成分加热溶解后，调pH值为7.2
‑
7.4，在121
o
C高压灭菌20min。然后取上述试样10g放入装有90mL选LP增菌液中，36
o<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种贴敷类化妆品中微生物的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取样：从贴敷类化妆品获取样品，样品量不少于5g；（2）在增菌液中增菌：将所取样品分布在LP增菌液或者SCDLP液体培养基中，培养过夜；（3）提取基因组DNA：使用水浴法提取增菌培养后的菌体的基因组DNA；（4）以基因组DNA为模板，在用于检测待测菌的LAMP反应体系中进行扩增反应；（5）根据扩增反应的结果，确定待测样品中是否存在待测菌。2.根据权利要求1所述的一种贴敷类化妆品中微生物的快速检测方法，其特征在于，所述的取样为，每批贴敷类化妆品随机抽取两个或两个以上包装完好的单位或者试样量不少于10g。3.根据权利要求1所述的一种贴敷类化妆品中微生物的快速检测方法，其特征在于，所述的增菌为在增菌液中，36
o
C
±
1 oC
培养18
‑
24小时。4.根据权利要求1所述的一种贴敷类化妆品中微生物的快速检测方法，其特征在于，所述的提取基因组DNA的条件是沸水浴10
‑
30min。5.根据权利要求1所述的一种贴敷类化妆品中微生物的快速检测方法，其特征在于，所述的特定反应体系为包含能扩增待测菌基因组的特异性碱基序列引物组的PCR反应体系。6.根据权利要求1所述的一种贴敷类化妆品中微生物的快速检测方法，其特征在于，所述的待测菌选自但不限于：金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、粪大肠菌群、霉菌或者酵母菌。7.根据权利要求1所述的一种贴敷类化妆品中微生物的快速检测方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔大祥，李雪玲，彭家伟，仲禺俊，
申请(专利权)人：上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：