用于预测多肽免疫原性的基于细胞的方法技术

本文公开的主题提供了用于确定多肽或其片段，例如抗体或其片段，诱发产生抗药物抗体(ADA)的倾向的方法，以及用于进行此类方法的试剂盒。试剂盒。试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于预测多肽免疫原性的基于细胞的方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年7月13日所申请的美国临时申请第63/051,157号以及2020年8月28日所申请的美国临时申请第63/071,535号的优先权，其各自内容通过引用以其全文并入本文，并要求其各自的优先权。


[0003]本公开涉及用于确定多肽诱发产生抗药物抗体(ADA)的倾向的方法以及进行此类方法的试剂盒。

技术介绍

[0004]基于多肽的治疗剂(例如抗体)极大地改善了对越来越多的严重且难治疾病的治疗。遗憾的是，此类治疗剂当施用患者时可能会诱发抗药物抗体(ADA)的产生。ADA可对治疗剂具有中和作用。这些中和作用可包括限制治疗剂的活性、增加治疗剂的清除率以及可能降低归因于治疗剂施用的总体临床反应。在某些情况下，ADA的产生也与患者严重不良事件(包括超敏反应和过敏反应)的发生一致。
[0005]在药物开发的临床前阶段了解基于多肽的治疗剂的免疫原性，可改善治疗剂在后续临床阶段成功的可能性。虽然免疫原性表位通常使用计算机模拟工具来预测，但已开发了数种基于细胞的技术，以确定临床前治疗候选药物的免疫原性潜力。一种此类技术称为第II类主要组织相容性复合体(MHC)相关肽蛋白体学(MAPP)。MAPP涉及将例如树突状细胞的抗原呈递细胞(APC)群与基于多肽的所关注治疗剂一起培育。APC会将治疗剂内化并加工成短肽。肽被加载到第II类MHC分子上并呈递在APC的表面上。经由液相色谱
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质谱法(LC/MS)对这些MHC
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肽复合物进行免疫沉淀和分析，可鉴别基于多肽的治疗剂中潜在的免疫原性表位。另一种用于确定临床前治疗候选药物的免疫原性潜力的技术是T细胞增殖测定。T细胞增殖测定涉及在与APC(例如树突状细胞)共培养后检测T细胞增殖，这些APC已与所关注的基于多肽的治疗剂一起培育。然而，这些技术是人力密集、耗时、并且需要许多高成本设备。因此，本领域中需要一种用于确定基于多肽的治疗剂诱发ADA产生的倾向的更省时且更具成本效益的方法。

技术实现思路

[0006]本公开提供了用于确定多肽或其片段相对于已知参考物诱发产生抗药物抗体(ADA)的倾向的方法。在某些实施例中，本文所公开的方法可包括(a)使抗原呈递细胞(APC)与多肽或其片段接触；(b)测量存在于APC的外表面上的多肽或其片段的量；(c)测量与APC缔合的多肽或其片段的总量；(d)通过从(c)中所测量的与APC缔合的多肽或其片段的总量减去(b)中所测量的与APC的外表面上结合的多肽或其片段的量来计算内化指数值；以及将(d)中的内化指数与参考内化指数比较，该参考内化指数指示已知的诱发ADA产生的倾向。在某些实施例中，与该APC缔合的多肽或其片段的总量，包括存在于该APC的外表面上的多
肽或其片段的量和存在于该APC内的多肽或其片段的量。在某些实施例中，当(d)中的内化指数值大于该参考内化指数时，该多肽或其片段具有比该参考物更大的引起ADA的倾向。在某些实施例中，当(d)中的内化指数值小于该参考内化指数时，该多肽或其片段具有比该参考物更小的诱发ADA的倾向。
[0007]在某些实施例中，该多肽或其片段是肽。在某些实施例中，该多肽或其片段是重组蛋白。在某些实施例中，该多肽或其片段是抗体或其片段，例如，人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在某些实施例中，该多肽或其片段，例如，抗体或其片段，是单结构域抗体。在某些实施例中，该多肽或其片段，例如，抗体或其片段，是抗体
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药物缀合物(ADC)。
[0008]在某些实施例中，该APC是选自由以下组成的群组：树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞和B细胞。在某些实施例中，该APC是树突状细胞。例如但不限于，该树突状细胞是未成熟树突状细胞。在某些实施例中，该未成熟树突状细胞通过分化从供体(例如人供体)所分离的单核细胞而生成。在某些实施例中，该经分离的单核细胞是在介白素
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4(IL
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4)和粒细胞
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巨噬细胞集落刺激因子(GM
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CSF)中的一者或多者存在下分化以生成未成熟树突状细胞。
[0009]在某些实施例中，该APC是在试剂的存在下与该多肽或其片段接触。例如，但不作为限制，该试剂是选自由以下组成的组：炎性细胞因子、前列腺素E2(PGE2)、脂多糖(LPS)和其组合。炎性细胞因子的非限制性实例包括TNFα、IL
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6、IL
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1β和其组合。在某些实施例中，该试剂是LPS。
[0010]在某些实施例中，测量与该APC缔合的多肽或其片段的总量可包括(i)透化该APC，(ii)使该APC与检测剂接触，该检测剂与该多肽或其片段结合，和(iii)确定与存在于该APC的外表面上和该APC内的多肽或其片段结合的检测剂的量，以测量与该APC缔合的多肽或其片段的总量。在某些实施例中，测量存在于该APC的外表面上的多肽或其片段的量可包括(i)使该APC与检测剂接触，该检测剂与该多肽或其片段结合和(ii)确定与存在于该APC的外表面上的多肽或其片段结合的检测剂的量，以测量存在于该APC的外表面上的多肽或其片段的量，其中在使该APC与该检测剂接触之前，该APC是未经透化的。在某些实施例中，该检测剂是抗体，例如，缀合至荧光团的抗体。在某些实施例中，该抗体是抗IgG抗体。在某些实施例中，确定与该多肽或其片段结合的检测剂的通过流式细胞术来进行。
[0011]本公开进一步提供用于进行本文所公开的任何一种方法的试剂盒。在某些实施例中，该试剂盒包括以下中的一者或多者：APC；剂；检测剂；和透化剂。在某些实施例中，该剂是选自由以下组成的组：炎性细胞因子、前列腺素E2(PGE2)、脂多糖(LPS)和其组合。在某些实施例中，该炎性细胞因子是选自由以下组成的组：TNFα、IL
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6、IL
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1β和其组合。在某些实施例中，该试剂是LPS。在某些实施例中，该检测剂是抗体，例如，缀合至荧光团的抗体。在某些实施例中，该检测剂是抗IgG抗体。在某些实施例中，该透化剂是皂素。
附图说明
[0012]图1示出了一种用于确定多肽诱发ADA产生的倾向的方法的非限制性实施例的示意图。
[0013]图2示出了检测与抗原呈递细胞(APC)的表面结合的抗体的量和与该APC缔合的总抗体的量的示意图。
[0014]图3示出了用于确定与APC的表面结合的抗体的量和与该APC缔合的总抗体的量的
流式细胞术门控策略。
[0015]图4示出了显示相对于抗体伯考赛珠单抗(bococizumab)和的APC总染色的APC外部染色的图。
[0016]图5示出了在临床环境下具有不同免疫原性程度的不同抗PCSK9抗体的内化指数值。
[0017]图6示出了在临床环境下具有高免疫原性的抗体和具有低免疫原性的抗体的内化指数值，包括(依那西普(etanercept))、(阿本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于确定多肽或其片段相对于已知参考物诱发产生抗药物抗体(ADA)的倾向的方法，其包括：(a)使抗原呈递细胞(APC)与所述多肽或其片段接触；(b)测量存在于所述APC的外表面上的多肽或其片段的量；(c)测量与所述APC缔合的多肽或其片段的总量，其中与所述APC缔合的多肽或其片段的所述总量包含存在于所述APC的所述外表面上的多肽或其片段的所述量和存在于所述APC内的多肽或其片段的量；(d)通过从(c)中所测量的与所述APC缔合的多肽或其片段的总量减去(b)中所测量的与所述APC的所述外表面结合的多肽或其片段的所述量来计算内化指数值；以及(e)将(d)中的内化指数与参考内化指数比较；其中，当(d)中的所述内化指数值大于所述参考内化指数时，所述多肽或其片段具有比所述参考物更大的诱发ADA的倾向，而当(d)中的所述内化指数值小于所述参考内化指数时，所述多肽或其片段具有比所述参考物更小的诱发ADA的倾向。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述多肽或其片段是肽。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述多肽或其片段是重组蛋白。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述多肽或其片段是抗体或其片段。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述抗体或其片段是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。6.根据权利要求4或5所述的方法，其中所述抗体或其片段是单结构域抗体。7.根据权利要求1所述的方法，其中所述多肽是抗体
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药物缀合物(ADC)。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述APC选自由树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞和B细胞组成的组。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述APC是树突状细胞。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述树突状细胞是未成熟的树突状细胞。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述未成熟的树突状细胞是通过分化从供体分离的单核细胞而产生的。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述经分离的单核细胞是在介白素
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4(IL
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4)和粒细胞
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巨噬细胞集落刺激因子(GM
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CSF)中的一者或多者的存在下分化以生成所述未成熟的树突状细胞。13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述APC是在药剂的存在下与所述多肽或其片段接触。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述药剂选自由以下组成的组：炎症性细胞因子、前列腺素E2(PGE2)、脂多糖(LPS)和其组合。15.根据权利要求14所述的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：L，
申请(专利权)人：基因泰克公司，
类型：发明
国别省市：