一种靶向基因TMEM215抑制剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种靶向基因TMEM215抑制剂及其应用，属于分子生物医学技术领域。通过考察TMEM215在血管内皮细胞中的促存活功能，发现该分子与内皮细胞的凋亡有关；通过考察TMEM215对小鼠肿瘤生长和肿瘤新生血管形成的影响，发现该分子的诱导性剔除可显著抑制小鼠肿瘤新生血管形成和肿瘤发展，且不影响机体正常血管的稳态；通过考察抑制TMEM215的siRNA的抗肿瘤血管新生治疗效果，发现靶向肿瘤内皮细胞递送TMEM215的siRNA可显著抑制小鼠肿瘤新生血管形成和肿瘤发展。因此，TMEM215有潜力成为抗肿瘤血管新生治疗的新靶点。为抗肿瘤血管新生治疗的新靶点。为抗肿瘤血管新生治疗的新靶点。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向基因TMEM215抑制剂及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物医学
，具体涉及一种靶向基因TMEM215抑制剂及其应用。

技术介绍

[0002]肿瘤是危害人类健康的最重要问题之一，对于肿瘤治疗主要通过手术切除、传统的放疗化疗、免疫疗法、肿瘤细胞靶向治疗和肿瘤血管靶向治疗等方式。肿瘤的生长可以分为两个时期，即无血管期和有血管期。无血管期的肿瘤体积通常小于2mm3，主要依靠弥散的方式吸收营养和氧气，瘤体生长缓慢。随着肿瘤体积的增大，仅仅依靠弥散吸收营养和氧气难以维持生长需求，此时肿瘤细胞就会分泌出一些化学物质，激活血管内皮细胞生长因子，促使肿瘤血管新生。一旦肿瘤血管出现，营养和氧气大量供给，肿瘤生长进入快速增殖期。因此，肿瘤血管已成为肿瘤治疗的重要靶标之一。
[0003]自首个血管靶向药物贝伐珠单抗获批以来，无论是大分子或是小分子抗血管生成药物的研究均取得显著成就，临床广泛用于甲状腺髓样癌、肾细胞癌、和肝癌等恶性实体瘤的治疗。其中小分子多靶点酪氨酸激酶抑制剂，通过抑制肿瘤血管生成和改善肿瘤微环境发挥抗肿瘤作用，作用显著，临床使用方便，得到广泛应用。然而，抗血管生成药物不仅具有抑制肿瘤血管生成的作用，还可能对人体正常血管造成损伤，引起高血压、蛋白尿、手足综合征等不良反应。随着精准医疗的推进，如何根据不同的肿瘤类型和个体差异实施科学合理的精准治疗策略，进一步研发针对肿瘤血管的特异性药物和用药方案，提高其抗肿瘤疗效的同时，减轻药物毒副作用，规范抗血管生成药物的临床应用，仍需要进一步研究探索。因此，深入研究血管生成的调控机制，并在此基础上发展新的抗肿瘤血管新生的治疗手段，依然具有重要的现实意义。

技术实现思路

[0004]为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种靶向基因TMEM215抑制剂及其应用，在实现抗肿瘤疗效的同时，减轻药物毒副作用。
[0005]为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
[0006]本专利技术公开了一种靶向基因TMEM215抑制剂，所述靶向基因TMEM215抑制剂为抑制TMEM215的siRNA分子，序列如SEQ.ID.NO.5所示。
[0007]本专利技术还公开了靶向基因TMEM215抑制剂在制备抗肿瘤血管新生药物中的应用。
[0008]优选地，所述靶向基因TMEM215抑制剂的序列如SEQ.ID.NO.5所示。
[0009]优选地，靶向基因TMEM215抑制剂通过抑制血管内皮细胞实现抗肿瘤血管新生。
[0010]优选地，所述药物的剂型为注射剂型。
[0011]本专利技术还公开了一种抗肿瘤血管新生的药物组合物，包括靶向基因TMEM215抑制剂。
[0012]优选地，所述药物组合物还包括其他肿瘤药物。
[0013]优选地，所述药物包括药学上可接受的一种或多种载体。
[0014]进一步优选地，所述载体包括稀释剂、粘合剂、吸附载体、填充剂和崩解剂。
[0015]优选地，所述药物还包括添加剂，所述添加剂包括稳定剂、杀菌剂、缓冲剂、等渗剂、螯合剂、pH值控制剂和表面活性剂。
[0016]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0017]本专利技术提供的一种靶向基因TMEM215抑制剂，通过探究TMEM215在维持血管内皮细胞存活中的作用，发现TMEM215对于血管内皮细胞的存活至关重要，敲低TMEM215后内皮细胞存活数目显著减少，Annexin V阳性的凋亡细胞的数目以及内源性凋亡信号通路的cl.Caspase3和cl.Caspase9蛋白水平显著升高，说明TMEM215可作为抗新生血管治疗的重要靶点。通过探究内皮细胞TMEM215剔除对小鼠肿瘤生长和肿瘤新生血管形成的影响，发现剔除TMEM215能够显著抑制小鼠肿瘤的生长，小鼠的肿瘤质量显著减小，肿瘤组织坏死面积显著增大，CD31和cl.Caspase3共同标记的凋亡内皮细胞数目显著增多，说明剔除TMEM215后肿瘤新生血管形成和肿瘤发展受到抑制，并且其它正常脏器的生理性血管不受影响。通过探究靶向肿瘤内皮递送抑制TMEM215的siRNA对小鼠肿瘤生长和肿瘤新生血管形成的影响，发现使用肿瘤内皮细胞靶向材料cRGD
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PEI
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PEG递送靶向基因TMEM215抑制剂能够显著减小小鼠肿瘤质量，小鼠肿瘤组织坏死面积显著增大，小鼠肿瘤组织CD31标记的血管密度显著降低，CD31和cl.Caspase3共同标记的凋亡内皮细胞数目显著增多。综上实验说明靶向基因TMEM215能够为抗肿瘤新生血管治疗提供参考，抑制TMEM215可有效抑制肿瘤新生血管形成和肿瘤发展，提示以TMEM215为抗肿瘤血管新生药物的靶点可改善现有药物不良副作用多的现状，具有良好的医学转化前景。
附图说明
[0018]图1为本专利技术感染人脐静脉内皮细胞表达TMEM215
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shRNA的慢病毒后存活情况图；
[0019]图2为本专利技术的流式细胞术检测内皮细胞的凋亡情况图；其中，A为流式细胞术检测凋亡细胞流式结果图，B为凋亡细胞数量统计图；
[0020]图3为本专利技术Western Blot检测细胞凋亡信号通路的标志蛋白变化水平图；
[0021]图4为本专利技术的通过对内皮细胞TMEM215诱导性剔除的基因修饰小鼠皮下接种肺癌细胞系，建立的皮下荷瘤模型图；
[0022]图5为本专利技术的基因修饰小鼠肿瘤生长曲线图；
[0023]图6为本专利技术的基因修饰小鼠肿瘤取材结果图；其中，A为基因修饰小鼠肿瘤取材实物形貌图，B为基因修饰小鼠肿瘤取材质量统计图；
[0024]图7为本专利技术的小鼠肿瘤组织切片HE染色结果图；其中，A为对照小鼠肿瘤组织切片HE染色图，B为内皮特异性敲除TMEM215小鼠肿瘤组织切片HE染色图，C为小鼠肿瘤组织坏死面积统计图；
[0025]图8为本专利技术的基因修饰小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31的免疫荧光染色结果图；其中，蓝色为hoechst，红色为血管标志物CD31，A为对照小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31的免疫荧光染色图，B为内皮特异性敲除TMEM215小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31的免疫荧光染色图，C为小鼠肿瘤组织免疫荧光染色结果统计图；
[0026]图9为本专利技术的基因修饰小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31和凋亡标志物
cl.Casp3免疫荧光染色结果图；其中，蓝色为hoechst，红色为血管标志物CD31，绿色为凋亡标志物cl.Casp3，A为对照小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31和凋亡标志物cl.Casp3免疫荧光染色图，B为内皮特异性敲除TMEM215小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31和凋亡标志物cl.Casp3免疫荧光染色图，C为小鼠肿瘤组织切片血管标志物CD31和凋亡标志物cl.Casp3免疫荧光染色结果统计图；
[0027]图10为本专利技术的肿瘤内皮细胞靶向材料递送抑制TMEM215的siRNA的治疗方案示意图；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向基因TMEM215抑制剂，其特征在于，所述靶向基因TMEM215抑制剂为抑制TMEM215的siRNA分子，序列如SEQ.ID.NO.5所示。2.靶向基因TMEM215抑制剂在制备抗肿瘤血管新生药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述靶向基因TMEM215抑制剂的序列如SEQ.ID.NO.5所示。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，靶向基因TMEM215抑制剂通过抑制血管内皮细胞实现抗肿瘤血管新生。5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为注射剂型。6.一种抗肿瘤血管新生的药物组合物，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：张沛然，梁亮，晏贤春，杨子岩，韩骅，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：