一种高效嗜热基因打靶系统及其应用技术方案

本发明专利技术提供了一种新的基于嗜热II型内含子的高效嗜热基因打靶系统。所述打靶系统由嗜热II型内含子RNA和内含子编码蛋白（IEP）组成。所述内含子RNA序列包含四个特征性的外显子识别序列EBS2、EBS2b、EBS1和EBS3；靶位点上包含四个特征性的内含子结合序列IBS2、IBS2b、IBS1和IBS3。所述外显子识别序列与所述内含子结合序列通过碱基互补配对相互识别，形成EBS2/IBS2，EBS2b/IBS2b，EBS1/IBS1和EBS3/IBS3配对，确定系统在染色体上的打靶位点，进而实现靶位点的敲除。所述的打靶系统中，增加了一个内含子RNA关键识别位点EBS2b/IBS2b位点；通过该位点的配对，将打靶成功率提高至原来的4

【技术实现步骤摘要】
一种高效嗜热基因打靶系统及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学与微生物学领域，涉及一种在微生物中应用的基因打靶系统，具体涉及一种高效嗜热基因打靶系统。

技术介绍

[0002]嗜热微生物在生物能源、生物冶炼、生物降解、工业酶生产等众多领域具有重要功能。开发高效便捷的嗜热遗传改造系统，对于加快嗜热微生物在工、农、医药、环保等领域的研究和应用具有重要价值和意义。尽管CRISPR
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Cas9相关的遗传操作系统具有强大的基因编辑功能，但该系统不适用于嗜热微生物的遗传改造。因此，如何实现嗜热微生物高效便捷的遗传改造，是亟待解决的问题。
[0003]为解决这一问题，Thermotargetron基因打靶系统应运而生，专利技术专利201410155715.4公开了“一种适用于嗜热微生物遗传改造的基因元件及其载体和应用”。所述的Thermotargetron基因打靶系统，是基于嗜热II型内含子构建的嗜热基因打靶系统，具有耐高温特点，目前已应用于嗜热微生物的遗传改造。该系统来源于嗜热蓝细菌(Thermosynechococcus 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于高效嗜热基因打靶系统的靶位点DNA识别序列，其特征在于：所述靶位点DNA识别序列由如下结构组成：A(
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15)A(
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14)xxxxxX(
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8)xxxxxxxNA(+1)；其中，A(+1)表示靶位点下游的第1个碱基为A，A(
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15)和A(
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14)表示靶位点上游的第14和第15两个位点碱基为A；X(
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8)表示靶位点上游的第8个位点IBS2b，所述IBS2b位点与内含子RNA的EBS2b位点互补配对；x表示与内含子RNA相互识别的碱基，N表示靶位点。2.根据权利要求1所述的靶位点DNA识别序列，其特征在于：靶位点上游的第7个位点x为IBS1，所述IBS1位点与内含子RNA的EBS1位点互补配对；靶位点上游的第6个位点x为IBS2，所述IBS2位点与内含子RNA的EBS2位点互补配对；靶位点上游的第5个位点x为IBS3，所述IBS3位点与内含子RNA的EBS3位点互补配对。3.根据权利要求1或2所述的靶位点DNA识别序列，其特征在于：所述识别位点IBS2b、IBS1、IBS2和IBS3均为A、T、G、C四个碱基中的任意一个。4.一种表达载体，其特征在于：含有权利要求1
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3中任意一项所述的靶位点DNA识别序列的表达载体。5.如权利要求1
‑
3中任意一项所述的靶位点DNA识别序列的应用，其特征在于：用于高效嗜热基因打靶系统中靶位点的识别，进而使得靶位点被敲除。6.高效嗜热基因打靶系统，其特征在于：所述打靶系统由嗜热II型内含子RNA和内含子编码蛋白（IEP）组成；其中，所述内含子RNA序列包含四个特征性的外显子识别序列EBS2、EBS2b、EBS1和EBS3；靶位点上包含四个特征性的内含子结合序列IBS2、IBS2b、IBS1和IBS3，所述外显子识别序列与所述内含子结合序列通过碱基互补配对相互识别，形成EBS2/IBS2，EBS2b/IBS2b，EBS1/IBS1和EBS3/IBS3配对，确定系统在染色体上的打靶位点，进而实现靶...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪伟，崔古贞，赵行行，花登雄，刘亚君，齐晓岚，陈峥宏，
申请(专利权)人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所，
类型：发明
国别省市：