粪产碱菌及其菌剂在畜禽粪污处理中消减病原菌的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种粪产碱菌及其菌剂在畜禽粪污处理中消减病原菌的应用，其属于功能型微生物筛选技术领域，所述粪产碱菌SYH

【技术实现步骤摘要】
粪产碱菌及其菌剂在畜禽粪污处理中消减病原菌的应用


[0001]本专利技术涉及一种粪产碱菌及其菌剂在畜禽粪污处理中消减病原菌的应用，尤其涉及一种粪产碱菌SYH
‑
1及其菌剂在畜禽粪污处理中消减病原菌的应用，其属于功能型微生物筛选


技术介绍

[0002]近年来，我国畜禽养殖总量不断上升，每年可产生约38亿吨畜禽粪污。许多大中型畜禽养殖场并未对畜禽粪污进行无害化、资源化等处理，便直接施于农田或随污水进入水体，一方面污染了周边环境，另一方面，畜禽粪污中的各种病原微生物破坏农田的生态环境平衡，对农产品质量安全造成潜在危害，影响人体健康。畜禽粪污中的病原菌包括细菌、真菌、寄生虫卵及病毒，尤其是其中的大肠杆菌、沙门氏菌等有较强的致病性，且多数病原菌在未经处理的畜禽粪污中可长期生存，比如在自然堆肥条件下，大肠杆菌需要2
‑
3个月才可以达到排放标准，沙门氏菌则需要4
‑
5个月。当含有致病微生物的粪便释放于土壤后，造成蔬菜污染，通过食物链威胁人类健康，甚至可能引发严重疾病和重大公共卫生事件。
[0003]为了使畜禽粪污能够高效安全利用，一个有效途径就是在畜禽粪污农用之前，对其进行堆肥处理，利用微生物发酵将畜禽粪污中复杂的有机物分解为腐殖质，杀死病原微生物。堆肥处理所使用的微生物菌剂直接影响病原菌的消减速度和水平，目前市场上已有的菌剂产品良莠不齐、品质不稳定，有必要进一步开发强效快速杀灭畜禽粪污中病原菌的微生物菌种菌剂。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是：为克服现有技术中存在的不足，提供一种粪产碱菌及其菌剂在畜禽粪污处理中消减病原菌的应用，该菌株制得的菌剂可应用于畜禽粪污的无害化处理中，能有效减少畜禽粪污中的病原菌，减少环境污染和由此带来的人体健康风险，且效果稳定，能在土壤中定殖长期保持较好的抑菌能力。
[0005]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：
[0006]一株粪产碱菌SYH
‑
1，分类名称为：Alcaligenes faecalis SYH
‑
1，筛选于中草药藜芦中，该菌株于2021年4月25日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为CCTCC No:M 2021453；所述粪产碱菌SYH
‑
1的16S rDNA基因序列如SEQ NO.1所示。
[0007]一种含有所述粪产碱菌SYH
‑
1的菌剂。
[0008]所述菌剂在畜禽粪污处理中消减病原菌的应用。
[0009]所述菌剂的制备方法，具体步骤如下：
[0010](1)首先将粪产碱菌SYH
‑
1在牛肉膏蛋白胨培养基上进行活化，然后接种于液体培养基中，37℃培养12h；
[0011](2)将活化好的粪产碱菌SYH
‑
1按5％接种量接种于液体培养基，37℃、180rpm条件
下振荡培养12～18h，当培养液中的活菌量达到目标值时，收集菌液即为含有粪产碱菌SYH
‑
1的菌剂。
[0012]更进一步地，所述菌剂中粪产碱菌SYH
‑
1的活菌量不低于109cfu/mL或109cfu/g。
[0013]更进一步地，所述液体培养基为：胰蛋白胨15～20g，大豆蛋白胨1～5g，酵母提取物1～5g，葡萄糖1～5g，NaCl 5～10g，K2HPO
4 1～5g，(NH4)2SO
4 0.1～0.5g，MgSO4·
7H2O 0.1～0.5g，MnSO4·
H2O 0.01～0.05g，Na2MoO4·
2H2O 0.01～0.05g，蒸馏水溶解定容至1L，pH 7.0，以121℃灭菌15min。
[0014]更进一步地，所述菌剂还包含酵母菌、乳酸菌、芽孢杆菌、光合细菌中的一种或两种及以上的组合；所述菌剂可浓缩制成液体菌剂或冷冻干燥制成固体菌粉。
[0015]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0016](1)粪产碱菌SYH
‑
1属于非致病细菌，对人畜无害，不污染环境，不危害生态平衡，符合生物安全法规；
[0017](2)该菌株制得的菌剂可应用于畜禽粪污的无害化处理中，能有效减少畜禽粪污中的病原菌，减少环境污染和由此带来的人体健康风险，且效果稳定，能在土壤中定殖长期保持较好的抑菌能力；
[0018](3)该菌株既可以单独使用，也可以与其它菌如酵母菌、乳酸菌、芽孢杆菌、光合细菌等制成混合菌剂使用，使用时可原位处理也可异位处理，以0.1％～1.0％接种量直接喷洒菌液或菌粉于畜禽粪污中，因其抗逆性强，可以在畜禽粪污中良好生长，占据有利生态位，抑制病原微生物生长繁殖，喷洒1次，即可长期发挥抑菌作用；
[0019](4)该菌株具有制备工艺简单高效、产品稳定可靠的特性，具有易形成商品化的明显的技术优势。
附图说明
[0020]图1为本专利技术中粪产碱菌SYH
‑
1的菌落形态；
[0021]图2为本专利技术中粪产碱菌SYH
‑
1的显微形态；
[0022]图3为本专利技术中粪产碱菌SYH
‑
1的电镜照片；
[0023]图4为本专利技术中粪产碱菌SYH
‑
1的基于16S rDNA序列的系统发育树。
具体实施方式
[0024]以下结合附图1至附图4对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。
[0025]实施例1：粪产碱菌SYH
‑
1的分离筛选与鉴定
[0026]初筛：用无菌水把新鲜获得的藜芦根洗去残留的泥土等杂物，切为0.5cm左右的小方块，用无菌水冲洗样品4次，吐温
‑
20浸泡处理30s，无菌水冲洗4次，用1％次氯酸钠溶液浸泡处理5min，无菌水冲洗4次，再用75％酒精浸泡处理5min，无菌水洗涤3次，在超净工作台内将样本切成0.2cm
×
0.2cm的小方块，分别接种于新鲜配制的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板上，30℃培养24h至出现菌落，挑取菌落划线纯化，得到纯培养菌株，置于甘油管
‑
80℃保藏待用。
[0027]复筛：取本实验室保藏的病原菌沙门氏菌进行活化培养，制成菌悬液涂布于牛肉
膏蛋白胨琼脂培养基平板，将上述初筛菌株点接于该平板上，30℃培养48h，观察是否有抑菌圈出现，用游标卡尺采用十字交叉法准确测量抑菌圈直径，比较后得到抑菌效果最明显的菌株SYH
‑
1。
[0028]鉴定：用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板培养48h观察菌落形态，采用革兰氏染色法对菌株SYH
‑
1进行显微观察，通过电镜观察菌体鞭毛和菌毛的着生情况，采用梅里埃VITEK 2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统研究了菌株的生理生化特性，结合1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株粪产碱菌SYH
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1，分类名称为：Alcaligenes faecalis SYH
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1，筛选于中草药藜芦中，该菌株于2021年4月25日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为CCTCC No:M 2021453；所述粪产碱菌SYH
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1的16S rDNA基因序列如SEQ NO.1所示。2.一种含有权利要求1所述粪产碱菌SYH
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1的菌剂。3.权利要求2所述菌剂在畜禽粪污处理中消减病原菌的应用。4.根据权利要求2所述菌剂的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)首先将粪产碱菌SYH
‑
1在牛肉膏蛋白胨培养基上进行活化，然后接种于液体培养基中，37℃培养12h；(2)将活化好的粪产碱菌SYH
‑
1按5％接种量接种于液体培养基，37℃、180rpm条件下振荡培养12～18h，当培养液中粪产碱菌SYH
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张兴晓，陈国忠，李有志，汤文利，姜琳琳，于馨，张建龙，朱洪伟，章安源，
申请(专利权)人：山东省饲料兽药质量检验中心，
类型：发明
国别省市：