热堆肥芽孢杆菌及其用途制造技术

本发明专利技术属于微生物肥料技术领域，具体涉及一种热堆肥芽孢杆菌Bacillus thermocopriae及其用途。本发明专利技术公开了一种热堆肥芽孢杆菌(Bacillus thermocopriae)XY

【技术实现步骤摘要】
热堆肥芽孢杆菌及其用途


[0001]本专利技术属于微生物肥料
，更具体的是涉及一种热堆肥芽孢杆菌Bacillus thermocopriae及其用途。

技术介绍

[0002]据统计，当前我国单位面积化肥使用量很大。由于大量施用化肥，造成耕地土壤中化学养分大量累积，土壤酸化、次生盐渍化等问题越来越突出，土壤微生态平衡严重破坏，病原菌大量积累，植物生长弱势，病害高发，对农田生态环境安全和食品安全造成了严重威胁。改进当前农业生产中化肥农药过量施用的生产技术模式，改善土壤结构，增加土壤中有益微生物的数量和活性，促进植物生长，提高土壤中肥料的利用率，提高土壤的供肥能力，成为当前及以后我国农业发展的重要方向，对于恢复良好的农田生态环境，实现农业生产与自然和谐相处、共同发展，促进农业生态、经济、社会的可持续发展是十分必要的。
[0003]近年来，随着生物技术的不断进步，微生物肥料的研究与应用有了很大的发展，在我国也有微生物肥料应用方面的很多报道，是新型肥料的研究热点。研究表明，许多功能微生物可以固定空气中的氮气，溶解土壤中不能被植物直接吸收的磷素，分泌植物生长调节物质，促进植物根系生长，增强植物抗病能力，拮抗土壤中的致病微生物，减少土壤病害的发生。通过接种这些功能微生物制备的生物肥料，与化肥相比具有成本低，使用安全，持续效果好，增产稳定，非再生能源消耗少，对环境、食品安全，经济效益高等特点，同时可以改善土壤结构，提高土壤有机质含量，改良盐碱地，保持农牧业生态系统的平衡，实现农牧业生产的可持续发展。
[0004]但目前有效促进植物生长等的微生物菌肥的相关菌种仍较少，因此迫切需要开发基于新型微生物菌种的微生物菌肥的制备技术和方法，其具有广阔的应用前景和价值。
[0005]CN106811426A公开了一种用于乳化原油的热堆肥芽孢杆菌(Bacillus thermocopriae)BLG69菌株，该热堆肥芽孢杆菌BLG69菌株能够以原油作为唯一碳源，在37℃～60℃的温度下代谢产生乳化剂，对原油进行乳化，降低原油粘度，从而提高原油采收率，适用温度范围广。
[0006]CN109337837A涉及一种嗜热芽孢杆菌DF7菌株
‑‑
嗜热芽孢杆菌(热堆肥芽孢杆菌，Bacillus thermocopriae)DF7，菌株在有氧发酵的条件下可以高效的水解抗生素菌渣，使胞内有机物质溶出，促进后续资源化利用，并可以促进E.coli细胞的裂解。

技术实现思路

[0007]本专利技术要解决的技术问题是提供一种热堆肥芽孢杆菌XY
‑‑
3及其用途。
[0008]为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种热堆肥芽孢杆菌(Bacillus thermocopriae)XY
‑
3，其保藏号为CGMCC NO.19408。
[0009]作为本专利技术的热堆肥芽孢杆菌(Bacillus thermocopriae)XY
‑
3的改进：热堆肥芽孢杆菌XY
‑
3的16S rRNA基因序列如SEQ ID NO:1所述。
[0010]本专利技术还同时提供了上述热堆肥芽孢杆菌(Bacillus thermocopriae)XY
‑
3的用途：促进植物生长。
[0011]作为本专利技术的用途的改进：含菌量为106～10
10
/ml的发酵菌液能提高植物果实的产量。
[0012]本专利技术具有如下技术优势：
[0013]本专利技术中提供了一种基于热堆肥芽孢杆菌的新型微生物菌肥制备方法；原料价格低廉、来源丰富；通过本方法培养制备的菌肥能显著促进植物的生长，从而提高植物果实的产量，对环境和人体健康无任何毒害作用，具有经济实用、安全高效、环境友好等特点。
[0014]热堆肥芽孢杆菌作为一种芽孢杆菌，虽然芽孢杆菌用于微生物肥料的已有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等数十种，但目前有关热堆肥芽孢杆菌用于微生物肥料的研究报道较少，尚未列入农业部批准使用的微生物肥料所用菌种目录，因此利用本专利技术微生物制备的微生物菌剂具有创新性，应用前景广阔。
具体实施方式
[0015]下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：
[0016]实施例1、菌株的分离与筛选
[0017]取5g咖啡渣样品装入灭菌的50mL离心管中，再向其中添加灭菌的蒸馏水35mL，在50℃下以180r/min的转速水平振荡30min。将振荡后的悬液在80℃水浴加热15min。之后用灭菌的蒸馏水将其梯度稀释10～106倍，并进行稀释涂布，取不同浓度的悬液各100μL分别涂布于LB平板上。所有的平板置于50℃培养。观察及记录平板上菌落的生长情况，并挑取形态不同的菌落分别转移到新鲜LB斜面培养基中，50℃培养后于4℃冰箱保存。
[0018]细菌DNA提取：参照Lysis Buffer for Microorganism to Direct PCR试剂盒说明书。在10μL Lysis Buffer中挑入少量单菌落菌体，混匀后置于PCR仪上热变性15min，取出，低速离心，上清液即为PCR反应的模板。
[0019]16s rDNA序列扩增：扩增引物使用通用引物27F和1492R，引物序列如下：
[0020][0021]PCR扩增反应体系如下配制：
[0022][0023]配制完毕将反应体系混合均匀，PCR扩增反应程序如下：
[0024][0025]细菌16S rDNA序列在Ribosomal Database Project(RDP数据库)中进行比对，利用Seq Match功能检索近缘物种序列，下载与所分离的菌株最相近的序列，用MEGA7软件进行多序列比对分析，并借此构建Neighbor
‑
joining进化树。
[0026]从而获得一株热堆肥芽孢杆菌Bacillus thermocopriae。
[0027]菌株鉴定：分离纯化的热堆肥芽孢杆菌，根据16S rDNA测序鉴定方法初步鉴定该菌株为热堆肥芽孢杆菌。之后根据菌种的细胞形态、生理生化特征、16S rRNA基因序列等试验数据综合分析，参考《伯杰氏系统细菌学手册》以及International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology有关研究论文，鉴定结果为：热堆肥芽孢杆菌。其微生物学特性如表1所示。
[0028]表1、热堆肥芽孢杆菌XY
‑
3的生理生化特性
[0029]细胞形态和理化实验结果
[0030][0031][0032]注：+阳性反应；
‑
阴性反应
[0033]本专利技术的热堆肥芽孢杆菌XY
‑
3，保藏名称为：热堆肥芽孢杆菌Bacillus thermocopriae，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.热堆肥芽孢杆菌(Bacillus thermocopriae)XY
‑
3，其特征在于：保藏号为CGMCC NO.19408。2.根据权利要求1所述的热堆肥芽孢杆菌(Bacillus thermocopriae)XY
‑
3，其特征在于：热堆肥芽孢杆菌XY
‑
3的1...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹新红，
申请(专利权)人：上海环牧星生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：