一种基于MLPA-NGS方法用于检测线粒体DNA变异的试剂盒及其应用技术

本发明专利技术公开了一种基于MLPA

【技术实现步骤摘要】
一种基于MLPA
‑
NGS方法用于检测线粒体DNA变异的试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，尤其涉及一种基于MLPA
‑
NGS方法用于检测线粒体DNA变异的试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]线粒体是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的细胞器，是细胞进行有氧呼吸的主要场所。线粒体DNA(mtDNA)是线粒体中的遗传物质，呈双链环状。一个线粒体中可有一个或数个mtDNA分子。人类正常mtDNA全长16569bp，包含37个基因，其中13个编码氧化磷酸化呼吸链复合体多肽的基因，2个核糖体RNA，22个转运RNA。
[0003]由于缺乏像核基因组DNA所具有的多种损伤修复机制等原因，mtDNA的突变率要高于核基因组DNA。在细胞分裂时，母细胞里的线粒体含有的突变mtDNA，在随机分离进入子细胞后，突变mtDNA在子细胞的线粒体中所占的比例可能发生改变。mtDNA为母系遗传，后代细胞中所含mtDNA，一般来自母亲。
[0004]mtDNA的突变可在体细胞中积累。已发现有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于MLPA
‑
NGS方法用于检测线粒体DNA变异的组合物，其特征在于，所述组合物包括针对于人线粒体DNA的CNV探针组合物和与疾病相关的SNV探针组合物，所述CNV探针组合物包括分别设计于线粒体DNA的多个区域上的探针对，所述SNV探针组合物包括分别用于检测多个位点变异情况的探针组；其中，所述位点变异选自m.1555A>G、m.1494C>T、m.8344A>G、m.3243A>G、m.11778G>A、m.3460G>A、m.14484T>C中的至少一个，各所述探针对和探针组均分别包括左侧探针和右侧探针；其中，所述组合物还包括引物组合物，所述引物组合物为用于扩增连接后的探针的带有index序列的1对通用引物；所述左侧探针的5
’
端和所述右侧探针的3
’
端分别包含一段通用序列，其作为所述通用引物扩增时的结合序列。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述CNV探针组合物包含用于结合模板DNA的如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.54所示序列；所述SNV探针组合物包含用于结合模板DNA的如SEQ ID NO.55～SEQ ID NO.75所示序列，其中各所述SNV探针组中左侧探针由分别针对野生型和突变型碱基的两条探针组成。3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述通用引物的序列如SEQ ID NO.76～SEQ ID NO.77所示，所述左侧探针的5
’
端的通用序列如SEQ ID NO.78所示，右侧探针的3
’
端的通用序列如SEQ ID NO.79所示。4.一种基于MLPA
‑
NGS方法用于检测线粒体DNA变异的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含如权利要求1～3中任一项所述的用于检测线粒体DNA变异的组合物。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述CNV探针组合物和SNV探针组合物混合获得探针工作液，所述探针工作液中每条探针浓度为0.2～20fmol/μL；和/或，所述引物组合物中，每一通用引物的配制浓度为2～200pMol；和/或，所述试剂盒还包括MLPA缓冲液、连接酶、连接酶缓冲液、PCR缓冲液、dNTP、PCR酶中的至少一种。6.一种如权利要求4～5中的任一项所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括步骤：步骤S1、DNA变性和探针杂交：将DNA样品进行变性操作；将MLPA缓冲液与探针工作液充分混合，进行杂交反应，反应程序为：95℃2min，65℃至55℃，每降一度孵育1小时，然...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨永臣，董斌斌，濮阳，
申请(专利权)人：江阴检汇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：