一种高纯度莫诺苷及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种结合高温液相色谱法和低温液相色谱法制备高纯度莫诺苷的方法，该方法通过高温液相色谱法和低温液相色谱法相结合的方式，制备得到纯度高于98％的莫诺苷标准品，回收率高于95％。由于高温液相色谱法采用的色谱柱和流动相与低温液相色谱法采用的色谱柱和流动相完全相同，本发明专利技术所用高温液相色谱法和低温液相色谱法流动相完全兼容，因而该方法简单经济，耗时少，所得莫诺苷纯度高，且具有一定的示范性。制备所得莫诺苷标准品可应用于以莫诺苷为主要有效成分的中药材的质量标准研究。准研究。准研究。

【技术实现步骤摘要】
一种高纯度莫诺苷及其制备方法


[0001]本专利技术属于色谱纯化新技术及标准品研制领域，具体涉及一种结合高温液相色谱法和低温液相色谱法制备高纯度莫诺苷的方法。

技术介绍

[0002]山茱萸作为一味传统中药,味酸、涩，性微温，主治肝肾亏虚所致眩晕耳鸣、腰膝酸软、崩漏带下、遗精遗尿、体虚大汗等症。其中主要有效成分莫诺苷，属于环烯醚萜苷类化合物，具有抗氧化、抗凋亡、促进神经生长、降血糖、降低血液黏度、抗凝血、抗血小板聚集、保护内皮细胞和心肌细胞、抑制黑素形成、促进骨折愈合等多种药理作用。
[0003]公开号为CN108341845A的专利文献公开了经大孔吸附树脂富集、正向硅胶柱分离、中压反向硅胶柱分离，凝胶柱纯化得到纯度≧98％的莫诺苷，然而在纯化过程中硅胶色谱柱使用的流动相与反相色谱柱使用的流动相不兼容，导致硅胶层析柱接下来的组分需要浓缩和重新溶解才能进入反相色谱柱进行分离，纯化步骤多，回收率不高；公开号为CN1569867的专利文献中提到山茱萸提取液减压浓缩，浓缩液加水沉淀，上清液用大孔吸附树脂或活性炭进行柱层析，除去杂质，乙醇梯度洗脱，洗脱液减压浓缩并干燥，经反向硅胶分离的到山茱萸提取物莫诺苷，纯度为95.81％，但所得莫诺苷纯度未达到成为标准品的纯度标准，且经柱层析得到的洗脱液仍需减压浓缩并干燥才能经过反相硅胶柱分离，同时存在硅胶色谱柱使用的流动相与反相色谱柱使用的流动相不兼容导致的纯化步骤多、纯度不够等问题。
[0004]综上所述，现有技术中多使用不同分离机理的分离手段组合制备莫诺苷。虽然纯化效果很突出，但是不同分离机理的方法间有着共同的缺陷：分离流动相不兼容，直接将第一次分离所得组分液进行第二次分离，很容易导致较强的溶剂效应而造成分离失败。因此，在此过程中，将样品浓缩、重新溶解后分离通常是难以避免的。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的之一是提供一种结合高温液相色谱法和低温液相色谱法制备高纯度莫诺苷的方法，该方法克服了现有提纯方法存在的分离流动相不兼容导致较强的溶剂效应而造成分离失败问题，制备的莫诺苷具有高纯度。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：一种高纯度莫诺苷的制备方法，包括如下步骤：
[0007]S1、将去核的山茱萸果经干燥粉碎得到山茱萸粉末，用乙醇浸提，合并提取液，浓缩至无醇，上样至装有孔径为0.1mm～1.5mm的大孔树脂的层析柱中进行吸附，吸附饱和后，使用乙醇对层析柱进行洗脱，收集洗脱液浓缩冻干得山茱萸提取物，在山茱萸提取物中加水并超声溶解，制成山茱萸提取物的浓度为1mg/mL～100mg/mL的溶液，离心除去沉淀，作为第一进样液待用；
[0008]S2、将一根反相色谱柱连接在高效液相色谱仪上，柱温设置为20℃～80℃，将甲醇
和体积分数为0.01％～2％的甲酸水溶液通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，并控制流动相中甲醇的体积占比为20％～35％，平衡上述反相色谱柱；
[0009]将20μL～400μL的第一进样液进样至已平衡好的反相色谱柱中进行分离，收取含有莫诺苷的组分，浓缩至干燥，加乙腈重新溶解，作为第二进样液待用；
[0010]S3、将柱温改设为
‑
30℃～10℃，保持反相色谱柱、流动相以及进样体积不变，用流动相平衡上述反相色谱柱，将第二进样液进样至已平衡好的反相色谱柱中进行分离，收集含有莫诺苷的组分，经浓缩后冷冻干燥，得到高纯度莫诺苷。
[0011]作为高纯度莫诺苷的制备方法进一步的改进：
[0012]优选的，步骤S1中去核的山茱萸果在90～110℃烘烤3～7小时干燥。
[0013]优选的，步骤S1中用于浸提的乙醇的体积分数为30％～80％，山茱萸粉末与乙醇浸提液的料液比为1:(1～20)，单位为g/L。
[0014]优选的，步骤S1中用于浸提的乙醇为体积分数为45％～75％的乙醇水溶液，山茱萸粉末与乙醇的料液比为1:(2～6)，单位为g/L。
[0015]优选的，步骤S1中层析柱为天津市津达正通环保科技有限公司的型号HPD600产品。
[0016]优选的，步骤S1中采用体积分数为40％～95％的乙醇对层析柱进行洗脱。
[0017]优选的，步骤S2中将150μL～200μL的第一进样液进样至已平衡好的反相色谱柱中。
[0018]优选的，步骤S2和S3中所述的反相色谱柱为华谱科仪(北京)科技有限公司的型号C18产品，柱长为250mm，柱直径为4.6mm，填充颗粒的粒径为10μm。
[0019]优选的，步骤S3中柱温改设为
‑
5℃～5℃；或者，步骤S2和S3中所述流动相平衡反相色谱柱的时间为12
‑
20min。
[0020]本专利技术的目的之二是提供一种上述制备方法制得的高纯度莫诺苷。
[0021]本专利技术相比现有技术的有益效果在于：
[0022]1)在同一色谱柱上，山茱萸中莫诺苷及其不同类型杂质在高温和低温下的分离度是有差异的。本专利技术针对分离共性问题，基于同一色谱柱在不同温度下可以展现出不同的纯化效果这一原理，在同一根反相色谱柱上分别开发高温液相色谱和低温液相色谱法，在使用大孔树脂对山茱萸中莫诺苷进行富集后，将开发的高温色谱和低温色谱法结合起来对山茱萸中莫诺苷进行分离纯化，可以先后去除莫诺苷周围的不同杂质，最终得到高纯度的莫诺苷标准品。由于两次分离使用的是相同的色谱柱及流动相体系，其流动相兼容性非常好，有效避免了溶剂效应的产生。第一次分离收集到的组分可以直接进样至第二个方法并进行分离，不产生很强的溶剂效应，可以有效避免样品损失和繁琐的步骤。本专利技术对莫诺苷标准品的制备纯化，以及其他类型化合物标准品制备具有重要意义。
[0023]2)本专利技术所述方法所得莫诺苷的回收率均高达95％。制备所得莫诺苷纯度高于98％，可以用作药材的标准品，可为山茱萸药材及相关药物的标准化提供有效助力，具有产业化价值。
附图说明
[0024]图1为本专利技术实施例1中山茱萸提取物的第一次制备色谱图。色谱条件：色谱柱：华
谱科仪(北京)科技有限公司的C18柱；规格：长度250mm，内径4.6mm，填充粒径10μm；柱温40℃；流动相：甲醇和甲酸体积分数达0.1％的甲酸水二元混合溶剂，其中甲醇体积分数为24％；检测波长254nm。
[0025]图2为本专利技术实施例1中第一组分的制备色谱图。色谱条件：色谱柱：华谱科仪(北京)科技有限公司的C18柱；规格：长度250mm，内径4.6mm，填充粒径10μm；柱温0℃；流动相：甲醇和甲酸体积分数达0.1％的甲酸水二元混合溶剂，其中甲醇体积分数为24％；检测波长254nm。
[0026]图3为本专利技术实施例1中所得莫诺苷标准品的分析鉴定图。色谱条件：色谱柱：华谱科仪(北京)科技有限公司的C18柱；规格：长度250mm，内径4.6mm，填充粒径10μm；柱温40℃；流动相：甲醇和甲酸体积分数达0.1％的甲酸水二元混合溶剂，其中甲醇体积分数本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高纯度莫诺苷的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将去核的山茱萸果经干燥粉碎得到山茱萸粉末，用乙醇浸提，合并提取液，浓缩至无醇，上样至装有孔径为0.1mm～1.5mm的大孔树脂的层析柱中进行吸附，吸附饱和后，使用乙醇对层析柱进行洗脱，收集洗脱液浓缩冻干得山茱萸提取物，在山茱萸提取物中加水并超声溶解，制成山茱萸提取物的浓度为1mg/mL～100mg/mL的溶液，离心除去沉淀，作为第一进样液待用；S2、将一根反相色谱柱连接在高效液相色谱仪上，柱温设置为20℃～80℃，将甲醇和体积分数为0.01％～2％的甲酸水溶液通过高效液相色谱仪的溶剂泵混合作为流动相，并控制流动相中甲醇的体积占比为20％～35％，平衡上述反相色谱柱；将20μL～400μL的第一进样液进样至已平衡好的反相色谱柱中进行分离，收取含有莫诺苷的组分，浓缩至干燥，加乙腈重新溶解，作为第二进样液待用；S3、将柱温改设为
‑
30℃～10℃，保持反相色谱柱、流动相以及进样体积不变，用流动相平衡上述反相色谱柱，将第二进样液进样至已平衡好的反相色谱柱中进行分离，收集含有莫诺苷的组分，经浓缩后冷冻干燥，得到高纯度莫诺苷。2.根据权利要求1所述的高纯度莫诺苷的制备方法，其特征在于，步骤S1中去核的山茱萸果在90～110℃烘烤3～7小时至干燥。3.根据权利要求1所述的高纯度莫诺苷的制备方法，其特征在于，步...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨李影，孙光映，关婷婷，李长江，张峥，吴慧敏，杨宇婷，张梦楠，吴敏，柯仲成，
申请(专利权)人：黄山学院，
类型：发明
国别省市：