抗古象属害虫虫卵的抗体及其应用制造技术

本申请提供了一种抗古象属(Sitophilus)害虫虫卵的抗体，用于检测古象属害虫虫卵的试纸条及其制备方法和使用方法，以及包含所述抗体或所述试纸条的试剂盒。体或所述试纸条的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
抗古象属害虫虫卵的抗体及其应用


[0001]本申请涉及分子生物学和免疫学领域，具体而言，涉及一种抗古 象属(Sitophilus)害虫虫卵的抗体，用于检测古象属害虫虫卵的试纸 条及其制备方法和使用方法，以及包含所述抗体或试纸条的试剂盒。

技术介绍

[0002]玉米象(S.zeamais)是主要的储粮害虫之一。在面粉加工厂和大米 加工厂，该害虫均能造成很大的粮食污染。玉米象是蛀蚀性储粮害虫， 他会直接取食粮粒，并将虫卵产于粮粒中，从虫卵发育至成虫的过程均 在粮粒里面完成。成虫发育完善后，会从被蛀空的粮粒中钻出，交配以 及取食于其他粮粒。
[0003]现今的主要研究和应用方向在于如何有效地在谷物中诱捕成虫，以 及如何使用有效的杀虫剂杀死成虫或者抑制虫卵和幼虫的孵化。在实际 操作应用中，诱捕成虫对于控制储粮生虫的作用并不明显，杀虫剂的熏 蒸处理相对比较直接，但是杀虫剂的使用涉及食品安全的问题，实际应 用中因化学物质对仓库的腐蚀，化学物质在粮粒内部的渗透性等问题， 操作起来并不容易。现今的粮食研究领域，主要研究方向在于找寻天然 的杀虫剂来高效地驱赶或者杀灭储粮害虫及其虫卵
[1][2][3][4][5]，但是天然杀 虫剂的复杂性以及成本导致在现有的工业水平中无法完全被接受。
[0004]因此，目前仍然有及早发现并有效清除谷物中的玉米象的需求。

技术实现思路

[0005]本申请基于对玉米象虫卵的蛋白质分析，取得天然虫卵内的特异性 的卵蛋白，基于免疫学方法，利用玉米象虫卵的卵蛋白通过免疫小鼠的 方法，获得可分泌特异性识别玉米象虫卵蛋白抗体的杂交瘤细胞株 WMAZC2，保藏号为CGMCC 19184，其分泌的单克隆抗体能特异性识 别玉米象虫的卵蛋白，可被用于制备特异性检测虫卵蛋白的试纸条，能 非常灵敏的检测到大米、小麦等粮食产品中的玉米象虫卵，实现提前预 警虫害爆发的目的。
[0006]具体地，本申请提供了以下技术方案：
[0007]在第一方面，本申请提供了一种抗体或其抗原结合片段，其能够特 异性结合古象属害虫虫卵的卵蛋白。
[0008]在一些实施方案中，所述抗体由保藏编号为CGMCC NO：19184 的杂交瘤细胞产生。
[0009]在第二方面，本申请提供了一种单克隆抗体，其由保藏编号为 CGMCC NO：19184的杂交瘤细胞产生。
[0010]在第三方面，本申请提供了一种杂交瘤细胞，其保藏编号为CGMCCNO：19184。
[0011]在第四方面，本申请提供了用于检测古象属害虫虫卵的试纸条，其 包含权利要求第一方面所述的抗体或者第二方面所述的单克隆抗体。
[0012]在第五方面，本申请提供了用于检测古象属害虫虫卵的试剂盒，其 包含第一方面所述的抗体、第二方面所述的单克隆抗体，或者第四方 面所述的试纸条。
[0013]在第六方面，本申请提供了检测古象属害虫虫卵的方法，其包括将 第一方面所述的抗体、第二方面所述的单克隆抗体、第四方面所述的 试纸条或者第五方面所述的试剂盒中的试剂与待检测的样品接触，
[0014]如果所述抗体与所述样品结合，则表明所述样品中存在古象属害虫 虫卵。
[0015]在第七方面，本申请提供了第一方面所述的抗体、第二方面所述 的单克隆抗体、第四方面所述的试纸条或者第五方面所述的试剂盒用于 检测谷类中是否存在古象属害虫虫卵的用途。
[0016]在前述任一方面中，所述古象属害虫选自玉米象、古象和米象。
[0017]现有对谷类中的虫卵检测主要采用高锰酸钾染色法(1％(w/v)高锰 酸钾溶液)，需要现配特殊染色试剂，还需要在显微镜下逐一对单个大米 观察，准确率低，所需时间长，无法满足快检简单鉴定是否有虫卵的需 求。本申请获得了可分泌特异性识别玉米象虫卵蛋白抗体的杂交瘤细胞 株，其分泌的单克隆抗体可被用于制备特异性检测虫卵蛋白的试纸条， 能非常灵敏地检测到大米、小麦等粮食产品中的玉米象虫卵，灵敏度高， 操作简单，不需要染色或者显微镜等设备，非常适合现场快检。对粮食 储存单位，粮仓和大型米业加工工厂的大米虫害预警有很好的帮助作用。
[0018]附图简要说明
[0019]图1为玉米象虫卵蛋白的SDS
‑
PAGE电泳结果。
[0020]图2为利用本申请的试纸条检测玉米象虫卵的结果。
[0021]实施方案的详细描述
[0022]除非另外指明，否则本专利技术的实施将采用本领域常规的分子生物学、 微生物学、细胞生物学、生物化学以及免疫学技术。
[0023]除非另外指明，否则本申请中所用的术语具有本领域技术人员通常 所理解的含义。
[0024]本申请针对控制粮食虫害的问题，设计了检测谷物虫卵含量的思路， 通过虫卵含量的多少来指示粮食的早期虫害感染情况，以便及时做出应 对措施，防止大规模爆发。例如针对一批粮食进行虫卵检测后，预估虫 害爆发的可能性及爆发前的安全储藏时间，然后针对感染严重的粮食， 工厂对其进行重点熏蒸、干热烘烤、冷冻杀虫等处理，以及在销售环节 由职能部门调整最后的物流运输条件和重新进行市场定位，最终的目的 是使得每一件产品在消费者的使用期间，没有大规模生虫的现象。
[0025]在第一方面，本申请提供了一种抗体或其抗原结合片段，其能够特 异性结合古象属害虫虫卵的卵蛋白。
[0026]如本文所用的，术语“抗体”指包含四条多肽链，即通过双硫键互连的 两条重链(H)及两条轻链(L)的免疫球蛋白分子，以及其多聚体(例如IgM)。 各重链包含重链可变区(缩写为VH)及重链恒定区(缩写为CH)。重链恒定 区包含三个域，即CH1、CH2及CH3。各轻链包含轻链可变区(缩写为 VL)及轻链恒定区(缩写为CL)。轻链恒定区包含一个域(CL1)。VH及VL 区可进一步细分成称为互补决定区(CDR)的高变区，其中穿插有称为构架 区(FR)的保守区。在一些实施方案中，从N
‑
末端至C
‑
末端，轻链与重链 可变结构域均包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3与FR4。
[0027]如本文所用的，术语抗体的“抗原结合片段”是指负责结合抗原的完整 抗体分子
的一部分或区段。抗原结合片段可以包含重链可变区(VH)、轻 链可变区(VL)或上述两者。抗体的抗原结合片段可使用任何适合的标准 技术从完整抗体分子制备，所述标准技术包括蛋白水解消化或重组遗传 工程化技术等。抗原结合片段的非限制性实例包括：Fab片段、Fab
’
片段、 F(ab
’
)2片段、Fd片段、Fv片段、单链Fv(scFv)分子、双体、dAb片段及 由模拟抗体高变区的氨基酸残基组成的最小识别单元(例如分离的CDR)。 术语“抗原结合片段”也包括其它工程化的分子，如双抗体、三抗体、四 抗体及微型抗体等。例如，本文中所述Fd片段指由VH与CH1结构域 组成的抗体片段；Fv片段由抗体的单臂中VL与VH结构域组成；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体或其抗原结合片段，其能够特异性结合古象属(Sitophilus)害虫虫卵的卵蛋白。2.如权利要求1所述的抗体，其中所述古象属害虫选自玉米象、古象和米象。3.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体选自多克隆抗体和单克隆抗体，任选地，所述抗原结合片段选自Fab片段、Fab
’
片段、F(ab
’
)2片段、Fd片段、Fv片段、单链Fv(scFv)分子、双体和dAb片段。4.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体由保藏编号为CGMCC NO：19184的杂交瘤细胞产生。5.一种单克隆抗体，其由保藏编号为CGMCC NO：19184的杂交瘤细胞产生。6.一种杂交瘤细胞，其保藏编号为CGMCC NO：19184。7.用于检测古象属(Sitophilus)害虫虫卵的试纸条，其包含权利要求1
‑
4中任一项所述的抗体或者权利要求5所述的单克隆抗体，任选地，所述试纸条的灵敏度可达到至少约0.1％，任选地，所述古象属害虫选自玉米象、古象和米象。8.用于检测古象属(...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢文娴，曾阿娜，祝星星，陈苗苗，牛其文，
申请(专利权)人：丰益上海生物技术研发中心有限公司，
类型：发明
国别省市：