一种基于高亲和力Siglec-1配体修饰的葡聚糖纳米疫苗及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物医药和疾病防治技术领域，具体涉及一种基于高亲和力Siglec

【技术实现步骤摘要】
一种基于高亲和力Siglec
‑
1配体修饰的葡聚糖纳米疫苗及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药和疾病防治
，具体涉及一种基于高亲和力Siglec
‑
1配体修饰的葡聚糖纳米疫苗及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]疫苗的专利技术根除了天花、脊髓灰质炎，又预防了每年致使数以百万计死亡的传染病，成为人类公共卫生史上最伟大的成就之一。只是，现有疫苗开发策略尚不能成功防治大部分癌症。此外，接种现有疫苗亦不能完全防治严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS
‑
CoV
‑
2)。更为棘手的是，SARS
‑
CoV
‑
2变异株(例如德尔塔Delta B.1.617.2、奥密克戎Omicron BA.1
‑
BA.5)在不断出现，使得现有疫苗(例如辉瑞BNT162b2)产生的抗体中和能力显著下降。因此，迫切需要发展下一代疫苗来对抗癌症和SARS
‑
CoV
‑
2及其变异株。
[0004]细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T
‑
lymphocyte,CTL)免疫和体液免疫是疫苗发挥作用的两种主要机制。为了诱导有效的CTL和IgG反应，人们已开发了基于抗原表位的疫苗，这些表位包括多肽、糖类和糖肽。对于该类疫苗的设计，首要任务是获得关键性的表位。然而，鉴定关键表位既耗时又具有挑战性。开发基于蛋白质的疫苗是应对全球突发的健康危机(如SARS
‑
CoV
‑
2感染)直接而有效的策略。重组蛋白可直接用作疫苗。然而，直接施用蛋白质通常会导致免疫反应不足，从而导致疾病治疗效果不佳。基于纳米颗粒(nanoparticle,NP)的疫苗通过提高抗原呈递细胞(antigen
‑
presenting cell,APC)的呈递抗原效率来增强T细胞活化。此外，NPs上合理排列的抗原通过与B细胞上的B细胞受体交联，有效激活B细胞产生高滴度的抗体。
[0005]作为一种高潜力载体，缩醛化葡聚糖(acetalated dextran,Ac
‑
Dex)在增强CTL反应方面的表现优于常用的聚乳酸
‑
乙醇酸共聚物(poly(lactic
‑
co
‑
glycolic acid),PLGA)。在这些报道的研究中，专利技术人发现，免疫细胞对Ac
‑
Dex NPs的摄取是通过被动转运，其诱导产生T细胞免疫和体液免疫反应的效果远远达不到治疗效果。

技术实现思路

[0006]基于上述现有技术的不足，本专利技术提供一种基于高亲和力Siglec
‑
1配体修饰的葡聚糖纳米疫苗及其制备方法和应用。本专利技术首先制备获得一种基于叠氮修饰部分氧化的乙氧基缩醛化葡聚糖纳米颗粒(Oxi
‑
Ace
‑
Dex
‑
Az NPs)，并基于此制备获得一种具有主动靶向性的高亲和力Siglec
‑
1糖基配体9
‑
N
‑
(4H
‑
thieno[3,2
‑
c]chromene
‑2‑
carbamoyl)
‑
Siaα2
‑
3Galβ1
‑
4GlcNAc(
TCC
Sia
‑
LacNAc)修饰的乙氧基缩醛化葡聚糖纳米疫苗(
TCC
Sia
‑
Ace
‑
Dex
‑
PA
‑
Rd NPs)，该疫苗含有SARS
‑
CoV
‑
2蛋白抗原(protein antigen,PA)和免疫激动剂
(resiquimod,Rd)。经试验证明，其能够有效预防SARS
‑
CoV
‑
2病毒感染，且其毒性很低。基于上述研究成果，从而完成本专利技术。
[0007]为实现上述技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0008]本专利技术的第一个方面，提供一种带有叠氮基团部分氧化的乙氧基缩醛化葡聚糖纳米粒子(Oxi
‑
Ace
‑
Dex
‑
Az NPs)，其可作为传递蛋白质抗原和佐剂的通用平台，所述纳米粒子的示意结构如下：
[0009][0010]本专利技术的第二个方面，提供上述纳米粒子的合成方法，其合成路线如下：
[0011][0012]具体的，所述合成方法，步骤包括：
[0013]S1、将葡聚糖溶于二甲基亚砜中，然后向其中加入CDI
‑
TEG
‑
Azide和4
‑
二甲氨基吡啶(DMAP)，在惰性气体保护下反应；纯化后即得叠氮修饰葡聚糖(Dex
‑
Az)A1；
[0014]S2、将S1所得聚合物A1溶于水中，然后加入高碘酸钠；搅拌反应，纯化得到的白色固体即为叠氮修饰部分氧化的葡聚糖(Oxi
‑
Dex
‑
Az)A2；
[0015]S3、将步骤S2制得聚合物A2和二甲基亚砜DMSO混合，并加入对甲苯磺酸吡啶和2
‑
乙氧基丙烯，于室温下搅拌反应，加入猝灭剂猝灭反应后将产物经纯化后即得到叠氮修饰部分氧化的缩醛化葡聚糖(Oxi
‑
Ace
‑
Dex
‑
Az)聚合物A3；
[0016]S4、将S3所得聚合物A3溶于二氯甲烷中，将其加入含水聚(乙烯醇)(PVA)，低温超声获得初级乳液A4；
[0017]S5、将S4所得乳液A4继续加入含水PVA中，搅拌后经纯化即得叠氮修饰部分氧化的缩醛化葡聚糖纳米颗粒(Oxi
‑
Ace
‑
Dex
‑
Az NPs)。
[0018]本专利技术的第三个方面，提供上述纳米粒子在制备具有主动靶向性药物中应用。
[0019]本专利技术的第四个方面，提供一种具有主动靶向性的基于高亲和力Siglec
‑
1配体修饰的葡聚糖纳米疫苗
TCC
Sia
‑
Ace
‑
Dex
‑
PA
‑
Rd，其至少是在上述纳米粒子上连接有高亲和力Siglec
‑
1配体以及蛋白抗原(PA)和免疫激动剂(如雷西莫特)；
[0020]其结构如下所示：
[0021][0022]具体的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种带有叠氮基团部分氧化的乙氧基缩醛化葡聚糖纳米粒子(Oxi
‑
Ace
‑
Dex
‑
AzNPs)，其特征在于，所述纳米粒子的示意结构如下：2.权利要求1所述纳米粒子的合成方法，其特征在于，其合成路线如下：3.如权利要求2所述的所述合成方法，其特征在于，具体步骤包括：S1、将葡聚糖溶于二甲基亚砜中，然后向其中加入CDI
‑
TEG
‑
Azide和4
‑
二甲氨基吡啶DMAP，在惰性氛围下反应；纯化后即得叠氮修饰葡聚糖(Dex
‑
Az)A1；S2、将S1所得聚合物A1溶于水中，然后加入高碘酸钠；搅拌反应，纯化得到的白色固体即为叠氮修饰部分氧化的葡聚糖(Oxi
‑
Dex
‑
Az)A2；S3、将步骤S2制得聚合物A2和二甲基亚砜(DMSO)混合，并加入对甲苯磺酸吡啶和2
‑
乙氧基丙烯，反应液于室温下搅拌反应，加入猝灭剂猝灭反应后将产物经纯化后即得到叠氮修饰部分氧化的缩醛化葡聚糖(Oxi
‑
Ace
‑
Dex
‑
Az)聚合物A3；S4、将S3所得聚合物A3溶于二氯甲烷中，将其加入含水聚(乙烯醇)，低温超声获得初级乳液A4；S5、将S4所得乳液A4继续加入含水PVA中，搅拌后经纯化即得叠氮修饰部分氧化的缩醛化葡聚糖纳米颗粒(Oxi
‑
Ace
‑
Dex
‑
Az NPs)。4.如权利要求3所述的合成方法，其特征在于，所述步骤S1中，葡聚糖分子量控制为9000
‑
11000g mol
‑1；所述葡聚糖、CDI
‑
TEG
‑
Azide和4
‑
二甲氨基吡啶的质量比为1:0.5
‑
1:0.8
‑
2；在惰性氛围下反应的反应条件具体为在室温下反应1
‑
3天；所述纯化具体方法包括：将反应液透析，期间换水4
‑
5次；后将溶液冻干；所述步骤S2中，所述高碘酸钠与聚合物A1质量比0.1
‑
0.5:1；所述搅拌反应具体为在室温下搅拌反应1
‑
10h；所述纯化具体方法包括：将反应液进行透析以去除小分子，后将溶液冻干即得；所述步骤S3中，所述聚合物A2、对甲苯磺酸吡啶和2
‑
乙氧基丙烯的质量体积比为1g:10
‑
20mg:1
‑
5mL；所述猝灭剂为三乙胺；所述纯化具体方法包括将反应液加入水中析出沉淀，所述沉淀采用离心后获得，所述沉淀经洗涤、冻干后即得；
所述步骤S4中，所述聚合物A3与含水聚(乙烯醇)的质量体积比为10mg:1
‑
5mL；所述含水聚(乙烯醇)中聚(乙烯醇)的分子量为13
‑
23kg mol
‑1，聚(乙烯醇)含量控制为1
‑
5％，w/w；所述低温超声具体采用冰浴超声进行0.5
‑
5min；所述步骤S5中，所述含水聚(乙烯醇)中聚(乙烯醇)的分子量为13
‑
23kg mol
‑1，聚(乙烯醇)含量控制为1
‑
5％，w/w；所述搅拌在室温条件下进行1
‑
5h，所述纯化具体方法包括离心获得沉淀，经水洗涤，冻干后即得。5.权利要求1所述纳米粒子在制备具有主动靶向性药物中应用；所述药物为疫苗。6.一种具有主动靶向性的基于高亲和力Siglec
‑
1配体修饰的葡聚糖纳米疫苗
TCC<...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴选俊，高亚楠，
申请(专利权)人：山东大学苏州研究院，
类型：发明
国别省市：