一种利用荧光素酶报告基因检测植物自噬活性的方法技术

本发明专利技术提供一种利用荧光素酶报告基因检测植物自噬活性的方法，属于植物生物技术领域。首先构建植物表达载体，所述表达载体的构建方法为将萤火虫荧光素酶基因LUC分成N端和C端两个部分，将C端与拟南芥自噬基因ATG8a融合，而N端与拟南芥自噬受体基因NBR1融合，构建成cLUC

【技术实现步骤摘要】
一种利用荧光素酶报告基因检测植物自噬活性的方法


[0001]本专利技术属于植物生物
，具体涉及利用萤火虫荧光素酶报告基因检测植物自噬活性与鉴定植物自噬突变体的应用。

技术介绍

[0002]细胞自噬是在真核生物体内高度保守的一种物质稳态维持途径，在植物抵抗营养饥饿胁迫的过程中发挥重要作用。在植物遭遇不良环境时，自噬活性可以被迅速诱导，通过降解不需要的蛋白质分子，受损的细胞器，以及调控细胞的程序性死亡，为必要的组织和器官提供生存所必需的物质和能量。
[0003]细胞自噬活性检测的常用方法包括显微成像方法和生物化学方法。在植物中，自噬体的显微成像需要依赖特定的指示物，常用的指示物包括单丹磺酰尸胺嗜酸性的荧光染料单丹磺酰尸胺(Monodansylcadaverin,MDC)和绿色荧光蛋白GFP标记的自噬相关蛋白GFP
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ATG8。除此之外，电子显微镜成像(Transmission Electron Microscope,TEM)也是自噬体观察的常用方法。生物学化学方法主要通过免疫印迹(Western bloting)试验本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种植物表达载体，其特征在于：所述植物表达载体包含cLUC
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ATG8a和NBR1
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nLUC两个融合基因；其中，cLUC为分裂的萤火虫荧光素酶的C端，序列如SEQ ID No.1所示；nLUC为分裂的萤火虫荧光素酶的N端，序列如SEQ ID No.2所示；ATG8a为拟南芥自噬基因，序列如SEQ ID No.3所示；NBR1为和ATG8a相互作用的拟南芥自噬受体基因，序列如SEQ ID No.4所示。2.根据权利要求1所述的植物表达载体，其特征在于：所述植物表达载体的序列如SEQ ID No.5所示。3.一种转化体，是将权利要求1所述的植物表达载体转化宿主细胞所得。4.权利要求1所述的植物表达载体或权利要求3所述的转化体在检测植物自噬活性方面的应用。5.一种利用荧光素酶报告基因检测植物自噬活性的方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、构建同时表达cLUC
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ATG8a和NBR1
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nLUC两个融合蛋白的植物表达载体；S2、以步骤S1所得植物表达载体转化植株，获得转基因阳性植株；S3、利用酶标仪或化学发光检测仪，通过检测所述转基因阳性植株的发光强度来评价自噬活性水平。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：具体步骤如下：S1：构建植物转化载体：将cLUC
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ATG8a和NBR1
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈亮，杨明康，朱晓洁，黄巍，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：