枸杞糖肽新用途及药物制造技术

本申请公开了枸杞糖肽在制备防治泪膜损伤和/或角膜上皮细胞损伤的药物中的应用。本申请还提供一种药物。本申请通过实验证实，枸杞糖肽(LBGP)具有修复泪膜和角膜上皮损伤的作用，作为滴眼液治疗诱导的小鼠泪膜和角膜上皮损伤模型具有促进角膜上皮修复，增加泪液分泌和泪液MUC5AC含量，促进角膜感觉神经功能恢复、神经纤维再生和抑制炎症的功效。复、神经纤维再生和抑制炎症的功效。复、神经纤维再生和抑制炎症的功效。

【技术实现步骤摘要】
枸杞糖肽新用途及药物


[0001]本申请涉及医药
，特别是涉及枸杞糖肽新用途及药物。

技术介绍

[0002]泪膜是眼表上皮与环境之间的界面，它的主要功能是维持最佳的细胞外结构、pH值、氧气和二氧化碳水平，此外还为角膜提供营养物质，在保护眼表、润滑清洁和维持视力稳定性方面发挥着重要作用。
[0003]角膜上皮位于角膜最浅表层，由4
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6层非角质化鳞状上皮细胞组成。角膜上皮是对保护眼睛起到关键作用的生理屏障，是泪膜后抵御外界损伤的第一道防线。
[0004]泪膜和角膜上皮的损伤会导致患者出现以下症状：(1)眼部刺激症状：易视疲劳、干涩感、畏光流泪、眼红、眼痒、眼刺痛、异物感、分泌物粘稠、对外界刺激敏感，但部分患者可能因为角膜神经功能异常而自觉症状轻微。(2)视功能相关症状：视物模糊、视力波动或下降。这些不适症状会降低患者的生活质量，严重时会造成视力损害。
[0005]目前，用于泪膜和角膜上皮损伤治疗放入滴眼液主要包括人工泪液、生长因子类眼液、糖皮质激素、免疫抑制剂、非甾体抗炎药等，存在作用单一，或对眼表具有较明显毒副作用的问题。
[0006]因此，如何开发一种滴眼液，用于治疗泪膜和角膜上皮损伤，是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

技术实现思路

[0007]为解决上述技术问题，本专利技术的第一个目的为提供枸杞糖肽在制备防治泪膜损伤和/或角膜上皮细胞损伤的药物中的应用；本专利技术的第二个目的为提供一种药物；本申请通过实验证实，枸杞糖肽(LBGP)具有修复泪膜和角膜上皮损伤的作用，作为滴眼液治疗诱导的小鼠泪膜和角膜上皮损伤模型具有促进角膜上皮修复，增加泪液分泌和泪液MUC5AC含量，促进角膜感觉神经功能恢复、神经纤维再生和抑制炎症的功效。
[0008]本专利技术提供的技术方案如下：
[0009]枸杞糖肽在制备防治泪膜损伤和/或角膜上皮细胞损伤的药物中的应用。
[0010]优选地，所述防治包括：提高角膜上皮细胞活性、改善角膜浑浊度、改善角膜上皮完整性、增加泪液分泌量、延长泪膜破裂时间、增加泪液MUC5AC含量、促进角膜感觉神经功能恢复、促进角膜神经纤维再生、降低角膜炎症因子IL
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1β的mRNA表达量、降低角膜炎症因子TNF
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α的mRNA表达量。
[0011]优选地，枸杞糖肽的给药方式为滴眼给药。
[0012]一种药物，用于防治泪膜损伤和/或角膜上皮细胞损伤，包括有效剂量的枸杞糖肽。
[0013]优选地，药物的剂型为滴眼液。
[0014]优选地，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
[0015]枸杞糖肽(Lycium barbarum glycopeptide,LBGP)是枸杞的主要活性成分，是一种水溶性糖蛋白，其含糖量占70％，按糖和蛋白质标准测得其分子量分别为72kDa和88kDa，糖组成是Ara:Gal:Glc＝2.5:1.0:1.0(摩尔比)。本专利技术使用的原料LBGP粉末的制备方法已获得专利(CN107021995B
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一种枸杞糖肽及其制备方法和应用)，该专利技术以升温絮凝的方法去除部分杂质，代替了传统提取方法中大量使用乙醇沉淀的步骤，所获得的枸杞糖肽的糖醛酸含量显著提高，具有显著的免疫活性。现在已有的研究表明，LBGP具有调节机体免疫功能、抗氧化、抗炎症、抗衰老、抗肿瘤、降血糖血脂等功效，但是LBGP对泪膜和角膜上皮的作用尚未有研究。
[0016]本专利技术利用苯扎氯铵(benzalkonium chloride,BAK)对泪膜和角膜上皮具有毒性损伤作用的特点，制备角膜上皮损伤的细胞模型，以及泪膜和角膜上皮损伤的动物模型。首先进行体外的细胞实验，初步探究LBGP对角膜上皮损伤的保护作用；再进行体内实验，使用LBGP滴眼液治疗泪膜和角膜上皮损伤的小鼠模型，为LBGP作为滴眼液应用于临床治疗泪膜损伤和角膜上皮损伤的疾病提供重要参考。
[0017]具体而言，泪膜是在角膜上皮表面的，泪膜可分为三层：表面的脂质层、中间的水液层和底部的黏蛋白层。脂质层由睑板腺产生，其主要功能是降低泪膜的表面张力；水液层由泪腺和副泪腺产生，其作为一个光滑的表面存在增强光的折射，同时润滑眼表防止结膜角膜干燥；黏蛋白层由结膜杯状细胞及眼表上皮细胞产生，形成一种凝胶状结构，使水液层在每次眨眼后重新扩散。本研究中泪膜的损伤主要是由于BAK本身对泪膜具有毒性作用，原因在于：第一、BAK是阳离子分子化合物，可与糖原酶阴离子多糖分子之间的静电聚集，可以穿透脂质膜，改变脂质膜的结构和性质，引起泪膜不稳定；第二、BAK还可以通过诱导眼表炎症而产生毒性；第三、BAK对结膜杯状细胞具有毒性作用，而泪膜的黏蛋白层主要由结膜杯状细胞产生。第四、泪膜对角膜上皮具有一定保护作用，泪膜的破坏会造成角膜上皮细胞更容易损伤，角膜上皮的损伤也会使泪膜进一步损伤。
[0018]同时，BAK因其能促进炎症细胞及TNF
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α等炎症因子浸润、促进角膜上皮K10表达引起角膜上皮鳞状上皮化生、KI
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67表达下调从而抑制角膜上皮增值、促进角膜上皮凋亡，对细胞有毒性作用等原因，对于角膜上皮细胞也有损伤作用。因此，本申请使用苯扎氯铵造模，可以同时研究枸杞糖肽对于泪膜损伤、角膜上皮细胞损伤的作用。
[0019]实验结果如下：(1)体外试验显示LBGP对损伤的角膜上皮细胞具有提高细胞活性的作用。(2)体内试验显示经过5mg/mL的LBGP滴眼液治疗，建模小鼠的角膜混浊度和角膜上皮完整性改善，泪液分泌量增加，泪膜破裂时间延长，泪液MUC5AC含量增加；LBGP促进建模小鼠的角膜感觉神经功能恢复和角膜神经纤维再生。qPCR检测显示LBGP降低建模小鼠角膜炎症因子IL
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1β和TNF
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α的mRNA表达量。RNA
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seq结果显示，在KEGG富集分析的结果中，前20个差异最具显著性的信号通路包含多个免疫相关通路：细胞因子
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细胞因子受体相互作用、细胞粘附分子、Th17细胞分化、趋化因子信号通路、IL
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17信号通路。
[0020]因此，LBGP具有提高损伤的角膜上皮细胞活性的作用，作为滴眼液治疗诱导的小鼠泪膜和角膜上皮损伤模型具有促进角膜上皮修复，增加泪液分泌和泪液MUC5AC含量，促进角膜感觉神经功能恢复、神经纤维再生和抑制炎症的功效。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0022]图1展示不同浓度LBGP对正常HCECs的细胞活性影响，**P<0.01，与0mg/mL LBGP组(即没有添加LBGP的角膜上皮细胞培养基所培养本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.枸杞糖肽在制备防治泪膜损伤和/或角膜上皮细胞损伤的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述防治包括：提高角膜上皮细胞活性、改善角膜浑浊度、改善角膜上皮完整性、增加泪液分泌量、延长泪膜破裂时间、增加泪液MUC5AC含量、促进角膜感觉神经功能恢复、促进角膜神经纤维再生、降低角膜炎症因子IL
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1β的mRNA表达量、降低角膜炎症...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈建苏，苏彩颖，黄若静，唐仕波，苏国辉，于哲雄，郭永龙，马红婕，王金霞，李玲，
申请(专利权)人：暨南大学宁夏天仁枸杞生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：