D-泛酸的发酵方法技术

本申请涉及一种D

【技术实现步骤摘要】
D
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泛酸的发酵方法


[0001]本专利技术涉及发酵
，特别是涉及一种D
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泛酸的发酵方法。

技术介绍

[0002]D
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泛酸，也称作维生素B5，是水溶性维生素B族物质。作为辅酶A的前体，D
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泛酸参与碳水化合物、蛋白质和脂肪的代谢作用，是人体和动物维持正常生理机能不可或缺、不可替代的物质，是一种重要的饲料添加剂、食品添加剂、化妆品添加剂和医药保健品。D
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泛酸几乎存在于所有的活细胞中，在原核生物、真菌、霉菌和植物细胞内可以通过酶促反应合成。其中富含泛酸的食物有动物内脏、牛肉、猪肉、未经精加工的谷类、豆类、坚果、啤酒酵母、蜂王浆、蘑菇、绿叶蔬菜等。尽管大自然一再对人类进行“暗示”，遗憾地是目前工业化生产泛酸和泛酸钙主要方法还是以化学合成为主。
[0003]然而化学合成法比较复杂，涉及多个中间体和拆分工艺，生产过程还会产生对环境有严重污染的含氰废水。为了寻找更加绿色的生产工艺，生物学家们专利技术了以葡萄糖为原料的微生物发酵法，例如浙江工业大学2019年申请的CN109868254A专利报道构建了能够发酵生产D
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泛酸的重组大肠杆菌菌株。尽管有菌种能够发酵生产泛酸，但是其发酵控制工艺还不够完善，例如副产物乙酸积累，导致泛酸含量少转化率低，鉴于此，开发一种解决副产物乙酸积累导致泛酸转化率降低的问题是非常必要的。

技术实现思路

[0004]基于此，本申请提供一种基于大肠杆菌的产乙酸较少的D
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泛酸的发酵方法。
[0005]一种D
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泛酸的发酵方法，所述D
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泛酸的发酵方法包括以下步骤：
[0006]采用发酵培养基培养重组大肠杆菌，所述重组大肠杆菌为CN2022102145885专利所构建的大肠杆菌E.coli MG1655avtA:panDBl
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ilvG+M
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aspDH/pACYC184
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panBCE，所述培养的条件包括：在发酵培养的溶氧值大于预设值时，向所述发酵培养基中添加补料直至所述发酵培养基的溶氧值不超过所述预设值，所述预设值的取值范围为1％～10％，所述补料包含质量百分含量为30％～80％的葡萄糖和质量百分含量为0.1％～10％的氮源。
[0007]上述D
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泛酸的发酵方法，通过在发酵培养过程中当溶氧值大于预设值(1％～10％)时，向发酵培养基中添加包含质量百分含量为30％～80％的葡萄糖和质量百分含量为0.1％～10％的氮源进行补料，直至发酵培养基的溶氧值不超过预设值，能够很好地避免发酵过程中补糖过多或溶氧供应不足而产生乙酸的现象，能够使得重组大肠杆菌更好地利用葡萄糖产生D
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泛酸而不易产生对其生长及D
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泛酸的生产有影响的乙酸副产物，能够大大提高D
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泛酸的产量。
[0008]在其中一个实施例中，所述预设值为1％～8％中的任一值。
[0009]在其中一个实施例中，所述氮源包括酵母和蛋白胨中的一种或两种。
[0010]在其中一个实施例中，所述补料包含质量百分含量为40％～60％的葡萄糖、质量百分含量为0.1％～3％的酵母和质量百分含量为0.1％～3％的蛋白胨，其余为水。
[0011]在其中一个实施例中，所述发酵培养基包括以下组分：
[0012][0013]在其中一个实施例中，所述微量元素混合液包括以下组分：
[0014][0015][0016]在其中一个实施例中，所述培养的条件还满足培养温度为30℃～45℃。
[0017]在其中一个实施例中，所述培养的条件还满足发酵培养基的pH为6～7.5。
[0018]在其中一个实施例中，所述培养的条件还满足：罐压为0.01MPa～0.1MPa；和或，风量为0.3vvm～4vvm。
[0019]在其中一个实施例中，所述培养的条件还满足：培养温度为35℃～39℃；发酵培养基的pH为6.6～7.2，罐压为0.02MPa～0.06MPa，风量为0.4vvm～2vvm。
附图说明
[0020]图1实施例1发酵液中的乙酸和D
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泛酸的液相图谱。
[0021](其中，14.110min的峰是D
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泛酸，15.567min的峰是乙酸)。
具体实施方式
[0022]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述。但是，本专利技术可以有许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使本专利技术公开内容更加透彻全面。
[0023]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。在本文中“MOPS”是3
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吗啉丙磺酸的简称。
[0024]本文中的重组大肠杆菌是指CN2022102145885专利所构建的大肠杆菌E.coli MG1655avtA:panDBl
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ilvG+M
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aspDH/pACYC184
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panBCE。
[0025]在本文中“溶氧”是指发酵培养基中的溶解氧；“溶氧值”是指在发酵培养过程中的溶解氧的相对含量。
[0026]本申请一实施方式提供了一种D
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泛酸的发酵方法，该D
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泛酸的发酵方法包括以下步骤：采用发酵培养基培养重组大肠杆菌，重组大肠杆菌为表达D
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泛酸的大肠杆菌，培养条件包括：在发酵培养基的溶氧值大于预设值时，向发酵培养基中加补料直至发酵培养基的溶氧值不超过预设值，预设值的取值范围为1％～10％，补料包含质量百分含量为30％～80％的葡萄糖和质量百分含量为0.1％～10％的氮源。
[0027]上述D
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泛酸的发酵方法采用代谢产出D
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泛酸的大肠杆菌(或称重组大肠杆菌)生产D
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泛酸，通过在发酵培养基的溶氧值大于预设值(1％～10％)时，向发酵培养基中添加包含质量百分含量为30％～80％的葡萄糖和质量百分含量为0.1％～10％的氮源的补料，直至发酵培养基的溶氧值不超过预设值。在发酵过程中，向发酵培养基中添加含有葡萄糖的补料，使得重组大肠杆菌对发酵培养基中的溶氧的消耗增加，进而使发酵体系的溶氧降低，在溶氧值低于预设值时停止补料添加，此时重组大肠杆菌继续消耗发酵培养基中的葡萄糖；在补加的葡萄糖消耗完全后，溶氧值开始回升，在溶氧值回升到高于预设值时，开始下一个循环的补料添加，循环执行添加补料、停止补料，从而使得重组大肠杆菌连续发酵且产乙酸量少。经本申请专利技术人验证，将溶氧值的预设值设置为1％本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种D
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泛酸的发酵方法，其特征在于，所述D
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泛酸的发酵方法包括以下步骤：采用发酵培养基培养重组大肠杆菌，所述重组大肠杆菌为产D
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泛酸的大肠杆菌，所述培养的条件包括：在发酵培养的溶氧值大于预设值时，向所述发酵培养基中添加补料直至所述发酵培养基的溶氧值不超过所述预设值，所述预设值的取值范围为1％～10％，所述补料包含质量百分含量为30％～80％的葡萄糖和质量百分含量为0.1％～10％的氮源。2.根据权利要求1所述的D
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泛酸的发酵方法，其特征在于，所述预设值的取值范围为1％～8％。3.根据权利要求1所述的D
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泛酸的发酵方法，其特征在于，所述氮源为酵母、蛋白胨和牛肉膏等中的一种或多种。4.根据权利要求3所述的D
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泛酸的发酵方法，其特征在于，所述补料包含质量百分含量为40％～60％的葡萄糖、质量百分含量为0.1％～3％的酵母和质量百分含量为0.1％～3％的蛋白胨等其他氮源。5.根据权利要求1～4任...

【专利技术属性】
技术研发人员：何琦阳，赵德胜，孟月维，王巧河，梁剑锋，张琴，
申请(专利权)人：浙江新和成股份有限公司，
类型：发明
国别省市：