腺病毒的大负载整合制造技术

本公开提供了可容纳或含有大转位子负载、例如多达40kb的转位子负载的重组腺病毒载体和腺病毒基因组。所述腺病毒载体和基因组可递送所述大转位子负载到目标基因组中，例如用于基因疗法。基因疗法。基因疗法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】腺病毒的大负载整合
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年4月13日提交的美国临时申请第63/009,298号的在先提交日的优先权和益处，该临时申请以全文引用的方式并入本文中。
[0003]关于联邦政府资助研究或开发的陈述
[0004]本专利技术是在政府支持下在由美国国家卫生研究院(the National Institutes of Health)授予的授权号HL128288和HL136135下进行。在本专利技术中政府具有某些权利。


[0005]本公开尤其提供了可容纳或含有大转位子负载、例如多达40kb的转位子负载的重组腺病毒载体和腺病毒基因组。腺病毒载体和基因组中的某些可递送大转位子负载到目标基因组中，例如用于基因疗法。

技术介绍

[0006]基因疗法呈现许多挑战。病毒载体是基因疗法的一种手段。在一些情况下，用于基因疗法的病毒载体在研发中的各种挑战包括载体负载容量、转基因整合到目标细胞基因组中的效率、转基因表达的细胞类型特异性、转基因表达量和整合的位置效应。使用病毒载体的基因疗法的各本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种腺病毒供体载体，其包含：(a)腺病毒衣壳；和(b)线性双股DNA基因组，其包含：(i)至少10kb的转位子负载；(ii)侧接所述转位子负载的转位子反向重复序列(IR)；和(iii)侧接所述转位子反向重复序列的重组酶正向重复序列(DR)。2.一种腺病毒供体基因组，其包含：(a)至少10kb的转位子负载；(b)侧接所述转位子负载的转位子反向重复序列(IR)；和(c)侧接所述转位子反向重复序列的重组酶正向重复序列(DR)。3.一种腺病毒转位系统，其包含：(a)根据权利要求1所述的腺病毒供体载体；和(b)腺病毒支撑载体，其包含：(i)腺病毒衣壳；和(ii)腺病毒支撑基因组，其包含编码转位酶的核酸序列。4.一种腺病毒转位系统，其包含：(a)根据权利要求2所述的腺病毒供体基因组；和(b)腺病毒支撑基因组，其包含编码转位酶的核酸序列。5.一种腺病毒产生系统，其包含：(a)包含根据权利要求2所述的腺病毒供体基因组的核酸；和(b)包含腺病毒辅助基因组的核酸，所述腺病毒辅助基因组包含条件性包装元件。6.根据权利要求1到5中任一权利要求所述的载体、基因组或系统，其中所述转位子负载包含长LCR，任选地其中所述长LCR为包含β
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球蛋白LCR HS1至HS5的β
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球蛋白长LCR。7.根据权利要求6所述的载体、基因组或系统，其中所述长LCR具有至少27kb的长度。8.根据权利要求1到6中任一权利要求所述的载体、基因组或系统，其中所述转位子负载包含表1中所阐述的LCR。9.根据权利要求1到6中任一权利要求所述的载体、基因组或系统，其中所述转位子负载具有至少15kb、至少16kb、至少17kb、至少18kb、至少19kb、至少20kb、至少21kb、至少22kb、至少23kb、至少24kb、至少25kb、至少30kb、至少35kb、至少38kb或至少40kb的长度。10.根据权利要求1到6中任一权利要求所述的载体、基因组或系统，其中所述转位子负载具有10kb
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35kb、10kb
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30kb、15kb
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35kb、15kb
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30kb、20kb
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35kb或20kb
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30kb的长度。11.根据权利要求1到6中任一权利要求所述的载体、基因组或系统，其中所述转位子负载具有10kb
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32.4kb、15kb
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32.4kb或20kb
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32.4kb的长度。12.根据权利要求1到11中任一权利要求所述的载体、基因组或系统，其中所述转位子负载包含编码蛋白质的核酸序列，任选地其中所述蛋白质为治疗性蛋白质。13.根据权利要求12所述的载体、基因组或系统，其中所述蛋白质选自由β球蛋白替代蛋白和γ
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球蛋白替代蛋白组成的群组。14.根据权利要求12所述的载体、基因组或系统，其中所述蛋白质为第八因子替代蛋白。
15.根据权利要求12或13所述的载体、基因组或系统，其中编码所述蛋白质的所述核酸序列与启动子可操作地连接，任选地其中所述启动子为β球蛋白启动子。16.根据权利要求1到15中任一权利要求所述的载体、基因组或系统，其中所述转位子反向重复序列为睡美人(SB)反向重复序列，任选地其中所述SB反向重复序列为pT4反向重复序列。17.根据权利要求3到15中任一权利要求所述的载体、基因组或系统，其中所述转位酶为睡美人(SB)转位酶，任选地其中所述转位酶为睡美人100x(SB100x)。18.根据权利要求1到17中任一权利要求所述的载体、基因组或系统，其中所述重组酶正向重复序列为FRT位点。19.根据权利要求3到18中任一权利要求所述的载体、基因组或系统，其中所述腺病毒支撑基因组包含编码重组酶的核酸。20.根据权利要求19所述的载体、基因组或系统，其中所述重组酶为FLP重组酶。21.根据权利要求1到20中任一权利要求所述的载体、基因组或系统，其中所述转位子负载包含β
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球蛋白长LCR，所述转位子负载包含与β
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球蛋白启动子可操作地连接的编码β
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球蛋白的核酸序列，所述反向重复序列为SB反向重复序列，且所述重组酶正向重复序列为FRT位点。22.根据权利要求1到21中任一权利要求所述的载体、基因组或系统，其中所述转位子负载包含选择盒，任选地其中所述选择盒包含编码mgmt
P140K
的核酸序列。23.根据权利要求1到22中任一权利要求所述的载体、基因组或系统，其中所述腺病毒衣壳被修饰成对CD46的亲和力增加，...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：华盛顿大学，
类型：发明
国别省市：