用于治疗颗粒蛋白前体相关的神经退行性疾病或病症的腺伴随病毒(AAV)系统技术方案

本公开内容部分提供了优化修饰的颗粒蛋白前体(PGRN) cDNA和相关的遗传元件，其用于神经退行性病症的基于重组腺伴随病毒(rAAV)的基因治疗中，所述神经退行性病症的特征在于认知破坏、行为损害和缺陷型溶酶体贮存，包括家族性额颞叶痴呆(FTD)、额颞叶变性(FTLD)、神经元蜡样脂褐质沉积症(NCL)或阿尔茨海默氏病(AD)。(AD)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗颗粒蛋白前体相关的神经退行性疾病或病症的腺伴随病毒(AAV)系统
[0001]相关申请的交叉引用本申请根据35 U.S.C.
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119(e)要求于2019年10月22日提交的美国临时申请号62/924,340的利益，所述美国临时申请的内容通过引用以其整体并入本文。


[0002]本专利技术涉及基因治疗领域，包括用于在受试者或细胞中表达分离的多核苷酸的AAV载体。本公开内容还涉及核酸构建体、启动子、载体和包括多核苷酸的宿主细胞，以及将外源DNA序列递送至靶细胞、组织、器官或生物的方法，以及用于治疗或预防颗粒蛋白前体相关的神经退行性疾病或病症的方法。

技术介绍

[0003]基因治疗旨在改善患者的临床后果，所述患者患有由基因表达谱中的异常引起的遗传突变或获得性疾病。基因治疗包括治疗或预防起因于缺陷基因或者异常调控或表达例如表达不足或过表达(其可以导致病症、疾病、恶性肿瘤等)的医学状况。例如，由缺陷基因引起的疾病或病症可以通过向患者递送校正性遗传材料进行治疗、预防或改善，或者可以通过例如用校正性遗传材料，使患者的缺陷基因改变或沉默进行治疗、预防或改善，导致遗传材料在患者内的治疗性表达。
[0004]基因疗法的基础是供应具有活性基因产物(有时称为转基因或治疗性核酸)的转录盒，例如，其可以导致正面的功能获得效应、负面的功能丧失效应或另一种后果。此类后果可以归于治疗性蛋白质例如抗体、功能性酶或融合蛋白的表达。基因疗法也可以用于治疗由其它因素引起的疾病或恶性肿瘤。人单基因病症可以通过正常基因对靶细胞的递送和表达进行治疗。校正基因在患者的靶细胞中的递送和表达可以经由众多方法来进行，所述方法包括使用改造的病毒和病毒基因递送载体。
[0005]腺伴随病毒(AAV)属于细小病毒科(Parvoviridae)，且更具体而言构成依赖性细小病毒属。衍生自AAV的载体(即重组AAV (rAVV)或AAV载体)对于递送遗传材料是有吸引力的，因为(i)它们能够感染(转导)广泛多种非分裂和分裂细胞类型，包括肌细胞和神经元；(ii)它们缺乏病毒结构基因，从而减少对病毒感染的宿主细胞应答，例如干扰素介导的应答；(iii)野生型病毒在人中被视为非病理性的；(iv)与能够整合到宿主细胞基因组内的野生型AAV形成对比，复制缺陷型AAV载体缺乏rep基因并且一般作为附加体持续存在，因此限制了插入诱变或基因毒性的风险；并且(v)与其它载体系统相比，AAV载体一般被视为相对较弱的免疫原，并且因此并不触发显著的免疫应答(参见ii)，因此获得载体DNA的持久性和治疗性转基因的潜在地长期表达。
[0006]颗粒蛋白前体(PGRN)是广泛表达的分泌性糖蛋白，其充当许多细胞类型包括神经元细胞的营养因子，调节炎症，并且促进伤口修复。PGRN涉及多个过程的调控，所述过程包括发育、伤口愈合、血管生成、神经元细胞的生长和维持、以及炎症。PGRN在神经元和小胶质
Trends in Neurosci. 2014 37(7): 388
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98)。
[0010]神经退行性病症代表了老龄化社会中相当大的社会和经济挑战。尽管FTD在痴呆谱系上在流行率和发病率方面仅次于阿尔茨海默氏症，但目前不存在用于FTD的批准治疗或治愈。神经退行性病症的目前治疗一般涉及通过医生减缓症状的进展并使患者更舒适的努力，并且大多数治疗仅掩盖神经衰退的进展。目前，在用于神经退行性疾病或病症的临床开发中不存在颗粒蛋白前体基因疗法。因此，仍然需要用于治疗神经退行性疾病或病症的方法和组合物。

技术实现思路

[0011]本公开内容涉及重组腺伴随病毒(rAAV)载体，颗粒蛋白表达盒可以通过其进行包装，用于CNS靶向递送至患有与颗粒蛋白前体(PGRN)突变相关的神经退行性病症的患者。
[0012]根据一个方面，本公开内容提供了分离的多核苷酸，其包含编码颗粒蛋白前体的核酸序列。根据一些实施方案，核酸序列是非天然存在的序列。根据一些实施方案，核酸序列编码哺乳动物颗粒蛋白前体。根据一些实施方案，哺乳动物颗粒蛋白前体是人颗粒蛋白前体。根据一些实施方案，核酸包含选自以下的序列：SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13和SEQ ID NO: 14。根据一些实施方案，核酸包含与选自以下的核酸序列具有至少85%同一性的序列：SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13和SEQ ID NO: 14。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 5具有至少85%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 5具有至少90%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 5具有至少95%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 5具有至少96%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 5具有至少97%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 5具有至少98%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 5具有至少99%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸由SEQ ID NO: 5组成。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 6具有至少85%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 6具有至少90%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 6具有至少95%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 6具有至少96%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 6具有至少97%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 6具有至少98%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 6具有至少99%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸由SEQ ID NO: 6组成。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 7具有至少85%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 7具有至少90%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 7具有至少95%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 7具有至少96%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 7具有至少97%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 7具有至少98%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸包含与SEQ ID NO: 7具有至少99%同一性的序列。根据一些实施方案，核酸由SEQ 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的多核苷酸，其包含编码颗粒蛋白前体的核酸序列。2.权利要求1的多核苷酸，其中所述核酸序列是非天然存在的序列。3.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述核酸序列编码哺乳动物颗粒蛋白前体。4.权利要求3中任一项的多核苷酸，其中所述哺乳动物颗粒蛋白前体是人颗粒蛋白前体。5. 权利要求1
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4中任一项的多核苷酸，其中所述核酸包含选自以下的序列：SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13和SEQ ID NO: 14。6. 权利要求1
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4中任一项的多核苷酸，其中所述核酸包含与选自以下的核酸序列具有至少85%同一性的序列：SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13和SEQ ID NO: 14。7.权利要求1
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6中任一项的多核苷酸，其中所述核酸序列对于哺乳动物表达进行密码子优化。8.权利要求7的多核苷酸，其中所述核酸序列对于人细胞中的表达进行密码子优化。9.权利要求1
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8中任一项的多核苷酸，其中所述核酸序列是cDNA序列。10.权利要求1
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9中任一项的多核苷酸，其中所述核酸序列进一步包含可操作地连接的功能优化的N末端信号序列。11.权利要求1
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10中任一项的多核苷酸，其中所述核酸序列进一步包含可操作地连接的血凝素C末端标签。12.权利要求1
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11中任一项的多核苷酸，其中所述核酸序列进一步包含可操作地连接的分拣蛋白结合抑制(SBI)结构域。13.权利要求1
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12中任一项的多核苷酸，其中所述核酸序列进一步包含可操作地连接的神经元特异性人突触素
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1启动子(hSYN1)。14.权利要求1
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12中任一项的多核苷酸，其中所述核酸序列进一步包含可操作地连接的遍在活性的CBA启动子。15.权利要求13或14的多核苷酸，其中所述启动子进行优化以驱动高颗粒蛋白前体表达。16.权利要求1
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15中任一项的多核苷酸，其中所述核酸序列进一步包含可操作地连接的3'UTR调控区，其包含土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)。17.权利要求1
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16中任一项的多核苷酸，其中所述核酸序列进一步包含可操作地连接的多聚腺苷酸化信号。18.权利要求17的多核苷酸，其中所述多聚腺苷酸化信号是SV40多聚腺苷酸化信号。19.权利要求17的多核苷酸，其中所述多聚腺苷酸化信号是人生长激素(hGH)多聚腺苷酸化信号。20.权利要求1
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8中任一项的多核苷酸，其进一步包含可操作地连接的N末端信号序列，任选地包含血凝素C末端标签或分拣蛋白结合抑制(SBI)结构域，其可操作地连接到神经元特异性人突触素
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1启动子或遍在活性的CBA启动子，所述启动子可操作地连接到3'UTR调控区，其包含可操作地连接到多聚腺苷酸化信号的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)。
21.一种宿主细胞，其包含权利要求1
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21中任一项的多核苷酸。22.权利要求21的宿主细胞，其中所述宿主细胞是哺乳动物细胞。23.一种重组单纯疱疹病毒(rHSV)，其包含权利要求1
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21中任一项的多核苷酸。24. 一种转基因表达盒，其包含：(a)权利要求1
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21中任一项的多核苷酸；和(b)最小调控元件。25.一种核酸载体，其包含权利要求24的表达盒。26.权利要求25的载体，其中所述载体是腺伴随病毒(AAV)载体。27.一种宿主细胞，其包含权利要求24的转基因表达盒。28.一种表达载体，包含权利要求1
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21中任一项的多核苷酸。29.权利要求28的载体，其中所述载体是腺伴随病毒(AAV)载体。30.权利要求29的载体，其中所述AAV载体的衣壳序列的血清型和ITR的血清型独立地选自AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11和AAV12。31.一种重组腺伴随(rAAV)表达载体，其包含权利要求1
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21中任一项的多核苷酸和AAV基因组盒。32.权利要求31的表达载体，其中所述AAV基因组盒的侧翼为两个序列调节的反向末端重复。33.一种重组腺伴随(rAAV)表达载体，其包含可操作地连接到N末端信号序列的权利要求1
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8中任一项的多核苷酸，任选地包含血凝素C末端标签或分拣蛋白结合抑制(SBI)结构域，其可操作地连接到神经元特异性人突触素
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1启动子或遍在活性的CBA启动子，所述启动子可操作地连接到3'UTR调控区，其包含可操作地连接到多聚腺苷酸化信号的土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)，其中两个序列调节的反向末端重复(ITR)侧接AAV基因组盒，并且进一步包含蛋白质衣壳变体。34.权利要求33的表达载体，其中所述多聚腺苷酸化信号是SV40或人生长激素(hGH)多聚腺苷酸化信号。35.权利要求33的表达载体，其中所述启动子进行...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：应用遗传科技公司，
类型：发明
国别省市：