一种应用数字PCR技术检测唾液DNA甲基化的方法技术

本发明专利技术公开了一种应用数字PCR技术检测唾液DNA甲基化的方法，涉及PCR检测技术领域。包括以下步骤：唾液DNA提取及亚硫酸氢盐转化、待检测的甲基化位点及引物探针序列、数字PCR反应体系以及通过泊松分布计算量化甲基化的丰度。该应用数字PCR技术检测唾液DNA甲基化的方法，滴式数字PCR(ddPCR)是近年来广泛应用于各领域研究的先进生物技术。与现有的实时PCR相比，ddPCR能够对目标核酸分子进行高灵敏度的定量分析和检测。在ddPCR过程中，样品被分成多个分区，并在每个分区中单独进行反应。因此，每个分区中的核酸都被克隆扩增。这种分离使核酸的定量和基因序列变异的检测更加敏感。的定量和基因序列变异的检测更加敏感。的定量和基因序列变异的检测更加敏感。

【技术实现步骤摘要】
一种应用数字PCR技术检测唾液DNA甲基化的方法


[0001]本专利技术涉及PCR检测
，具体为一种应用数字PCR技术检测唾液DNA甲基化的方法。

技术介绍

[0002]DNA在法医学中的应用重点是从DNA证据中检索信息，这些信息可以帮助缩小嫌疑人的范围或确定目标群体的兴趣。随着近年来在推测地理来源、人种和外貌方面取得的突破，对于年龄的预测还在不断完善。最近的研究发现，人类基因组中的甲基化位点与年龄密切相关，可用于年龄估计算法的开发。
[0003]从法医证据中追踪受害者或犯罪者的年龄可以作为解决案件的线索。即使我们从犯罪现场的证据中获得受害者或犯罪者的DNA基因型结果，也不可能在基因数据库中没有与获得的分析结果相匹配的人。提供缩小调查范围的线索，如年龄跟踪，将极大地有助于调查。DNA甲基化是目前最有希望的预测年龄的生物标志物之一。许多研究报告了基于DNA甲基化的年龄预测模型，但大多数都是基于血液中的DNA甲基化模式。只有少数研究检测了唾液中预测年龄的DNA模式，而唾液是犯罪现场最常见的体液之一。
[0004]在常规的法医实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种应用数字PCR技术检测唾液DNA甲基化的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：S1、唾液DNA提取及亚硫酸氢盐转化，收集犯罪现场唾液样本；S2、待检测的甲基化位点及引物探针序列；S3、数字PCR反应体系；S4、通过泊松分布计算量化甲基化的丰度，甲基化丰度：甲基化液滴数/(甲基化液滴+非甲基化液滴)。2.根据权利要求1所述的一种应用数字PCR技术检测唾液DNA甲基化的方法，其特征在于：所述S1包括以下步骤：用Takara MiniBEST通用基因组DNA提取试剂盒从200ul的唾液中提取DNA，然后用10ul的核酸酶游离水洗脱DNA；从唾液样本中提取的DNA使用Quantifiler Trio kit进行定量；从唾液中提取DNA后，使用EZ DNA甲基化试剂盒对提取的DNA进行亚硫酸氢盐转化，所有的DNA提取程序和亚硫酸氢盐转化程序都是根据制造商的说明进行的。3.根据权利要求1所述的一种应用数字PCR技术检测唾液DNA甲基化的方法，其特征在于：所述待检测的甲基化位点：cg00481951(SST)，cg14361627(KLF14)，cg08928145(TSSK6)，cg07547549(SLC12A5)。4.根据权利要求3所述的一种应用数字PCR技术检测唾液...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵洪玉，
申请(专利权)人：苏州博睿义达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：