一种风疹病毒荧光PCR试剂盒及其检测方法和应用技术

本发明专利技术公开一种风疹病毒荧光PCR试剂盒及其检测方法和应用，风疹病毒荧光PCR试剂盒包括如下组分：MIX反应液1、MIX反应液2、阳性对照以及阴性对照。本试剂盒操作简便且能有效防止污染，PCR荧光检测时间(从标本处理开始)仅为1.5

【技术实现步骤摘要】
一种风疹病毒荧光PCR试剂盒及其检测方法和应用


[0001]本专利技术涉及一种风疹病毒荧光PCR试剂盒及其检测方法和应用，属于基因检测领域。

技术介绍

[0002]风疹病毒(RV)是单正链RNA病毒，可通过空气传播的急性传染病。风疹与清醒麻疹症状相似，与人类小DNA病毒B19，猩红热等引起的出诊容易混淆。所以实验室鉴别诊断的地位愈来愈重要。目前常用的风疹实验室的检测方法主要有病毒分离培养、血清学检测及核酸检测等方法。由于Elisa法检测灵敏度低，假阳性高；病毒分离培养费时费力，并且存在一定的危险性。近年来运用荧光PCR技术检测的病毒种类越来越多，对于荧光PCR检测病毒来说，引物的设计至关重要，直接影响检测结果的特异性。通过针对病毒的特意序列设计高特异性的taqman探针及引物，能够极大的保证检测结果的特异性。现有的风疹病毒检测试剂盒大多存在特异性差，灵敏性低等缺陷，有待改进

技术实现思路

[0003]本专利技术的主要目的是提供一种风疹病毒荧光PCR试剂盒，旨在解决上述技术问题。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提出的一种风疹病毒荧光PCR试剂盒包括如下组分：MIX反应液1、MIX反应液2、阳性对照以及阴性对照。
[0005]在一实施例中，所述MIX反应液1包括Taq启动酶，10X缓冲液，25mMMgCL2和10mMdNTPs。
[0006]在一实施例中，MIX反应液2包括一对用于检测风疹病毒的引物和一条检测风疹病毒的探针，所述探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3
’
端标记有荧光淬灭基团。
[0007]在一实施例中，所述序列表如下表所示：
[0008]名称SEQ ID序列(5
’→3’
)风疹
‑
PF1GCGTCCGCTTTGAGT风疹
‑
PR2GCAGCGGGTACCCAGGC风疹
‑
P3X1
‑
CAAGATTGTGGACGGCGGCTGC
‑
Y1
[0009]在一实施例中，所述所述引物的碱基序列如序列表SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
[0010]在一实施例中，所述探针的碱基序列如序列表SEQ ID NO.3所示。
[0011]在一实施例中，所述荧光报告基团包括FAM、HEX、JOE、TET、CY3、CY5、VIC、ROX中的任意一种。
[0012]在一实施例中，所述荧光淬灭基团包括BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1中的任意一种。
[0013]在一实施例中，所述阳性对照为携带检测目的片段的重组质粒溶液，所述阴性对照为无菌水。
[0014]另外，本专利技术还提供一种采用如上所述的风疹病毒荧光PCR试剂盒的检测方法，所
述检测方法包括以下步骤：
[0015]S1、试剂准备：
[0016]S11、取出试剂盒中的MIX反应液1，在室温下融化并混匀，低速瞬间离心。取出试剂盒中的MIX反应液2，低速瞬间离心，置于冰上备用；
[0017]S12、确定反应数N，反应数N至少比检测样本数多2，并按照10μL
×
N的MIX反应液1，3μL
×
N的反应液二以及5μL
×
N的ddH2O配置反应体系；
[0018]S13、将上述混合液震荡混匀，瞬时离心5秒，按18μL/管分装至PCR管中；
[0019]S2、样本制备：
[0020]S21、取2μL待测样本，阳性对照、阴性对照，分别加入到已分装的反应混合液中。盖紧PCR反应管盖，瞬时低速离心。将PCR反应管上机检测；
[0021]S3、PCR扩增检测：
[0022]S31、设定循环参数；
[0023]S32、根据待测样本的Ct值读取样本检测结果。
[0024]另外，本专利技术还提供一种根据如上所述的风疹病毒荧光PCR试剂盒的应用，所述试剂盒用于体外检测风疹病毒。
[0025]本专利技术的试剂盒采用荧光定量PCR技术，设计风疹病毒特异性探针及引物，能够快速有效，并且特异性检测风疹病毒。设计的引物和探针在NCBI的GeneBank数据库进行比对，检测探针和引物的特异性。
[0026]本试剂盒操作简便且能有效防止污染，PCR荧光检测时间(从标本处理开始)仅为1，5
‑
3小时。PCR荧光检测是全封闭操作，加入样本抽提产物及反应液后，可以不再打开管盖，减少了污染产生的机会。
[0027]本专利技术具有灵敏度高，可重复性强，操作简便，检测结果快速客观等优点，在临床诊断，疾病预防监测等领域具有极大的应用前景。
附图说明
[0028]图1为本专利技术实施例的试剂盒用在包括风疹病毒在内的30种不同阴道微生物的扩增曲线图。
具体实施方式
[0029]下面结合实施例对本专利技术提供的风疹病毒荧光PCR试剂盒及其检测方法和应用作进一步详细、完整地说明。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。
[0030]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料如无特殊说明，均为市场购买得到。
[0031]实施例1、试剂盒的制备
[0032]本实施例的序列如下：
[0033][0034][0035]其中，X1为荧光报告基团，Y1为荧光淬灭基团。
[0036]本实施例的检测试剂盒包括如下组分(25人份)：
[0037][0038]实施例2
[0039]1、试剂准备
[0040]1.1、取出试剂盒中的MIX反应液1，在室温下融化并混匀，低速瞬间离心。取出试剂盒中的MIX反应液2，低速瞬间离心，置于冰上备用。
[0041]1.2、确定反应数N：根据检测样本数计算所需反应数，如样本数为n，则反应数N＝(待鉴样本数n+阴性质控1+阳性质控1)，按下表配置反应体系。
[0042]反应体系配置
[0043][0044]1.3、反应体系分管：准备相应数量的PCR反应管，将上述混合液震荡混匀，瞬时离心5秒，按18μL/管分装至PCR管中。
[0045]2、样本制备R
[0046]2.1、待测样本提取采用商品化的DNA提取试剂盒。具体操作按照核酸提取试剂盒说明书进行操作。
[0047]2.2、取2μL待测样本，阳性对照、阴性对照，分别加入到已分装的反应混合液中。盖紧PCR反应管盖，瞬时低速离心。将PCR反应管上机检测。
[0048]3、PCR扩增检测
[0049]3.1、将PCR反应管放置于荧光定量PCR仪扩增检测，本专利技术中采用的仪器以雅睿MA6000荧光定量PCR仪为例。
[0050]3.2、循环参数设定：
[0051][0052]4、实验有效性判定
[0053]在本实施例中，RV基因报告荧光为FAM，内标基因本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种风疹病毒荧光PCR试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒用于定性或定量检测风疹病毒，试剂盒包括如下组分：MIX反应液1、MIX反应液2、阳性对照以及阴性对照。2.根据权利要求1所述的风疹病毒荧光PCR试剂盒，其特征在于，所述MIX反应液1包括Taq启动酶，10X缓冲液，25mMMgCL2和10mMdNTPs。3.根据权利要求1所述的风疹病毒荧光PCR试剂盒，其特征在于，所述MIX反应液2包括一对用于检测风疹病毒的引物和一条检测风疹病毒的探针，所述探针的5
’
端标记有荧光报告基团，3
’
端标记有荧光淬灭基团。4.根据权利要求3所述的风疹病毒荧光PCR试剂盒，其特征在于，所述引物的碱基序列如序列表SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。5.根据权利要求4所述的风疹病毒荧光PCR试剂盒，其特征在于，所述探针的碱基序列如序列表SEQ ID NO.3所示。6.根据权利要求3所述的风疹病毒荧光PCR试剂盒，其特征在于，所述荧光报告基团包括FAM、HEX、JOE、TET、CY3、CY5、VIC、ROX中的任意一种。7.根据权利要求3所述的风疹病毒荧光PCR试剂盒，其特征在于，所述荧光淬灭基团包括BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1中的任意一种。8.根据权利要求1<...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾真，周泽文，陈思，
申请(专利权)人：湖南莱博赛医用机器人有限公司，
类型：发明
国别省市：