内含肽偶联荧光蛋白质粒体系和基于微流控高通量荧光筛选的内含肽进化方法技术

本发明专利技术公开了一种内含肽偶联荧光蛋白质粒体系，所述质粒中包含荧光蛋白

【技术实现步骤摘要】
内含肽偶联荧光蛋白质粒体系和基于微流控高通量荧光筛选的内含肽进化方法


[0001]本专利技术涉及一种内含肽偶联荧光蛋白质粒体系和基于微流控高通量荧光筛选的内含肽进化方法，以及筛查出的内含肽Ssa DnaH变体及应用。

技术介绍

[0002]内含肽是一种位于蛋白质前体中可以催化自身从前体中切割分离的氨基酸序列，因其机制类似于真核生物内含子的剪接，因此被命名为内含肽。内含肽类似于蛋白酶，具有切割肽键的活性。因此，内含肽是生命科学领域具有广泛的应用。尤其在蛋白表达、纯化和标签切除上，内含肽具有促进表达、切割方便和成本廉价等显著的优势，因此内含肽具有重要的商业价值。但是，内含肽仍存在明显的局限性，如催化活性低和偏好性严重，这严重的影响了内含肽的应用和推广。提高内含肽的催化活性和降低内含肽的偏好性，是亟待解决的问题。
[0003]定向进化是近些年来兴起的生物技术，利用实验室规模的进化系统，可以在数月的时间内获得自然界中需要数十亿年的进化结果，是一项使用的蛋白或RNA改造技术。如何通过定向进化技术获得高活性的内含肽，是行业内关注的重点。
专本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种内含肽偶联荧光蛋白质粒体系，其特征在于：所述质粒体系中包含表达荧光蛋白
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N
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内含肽
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N端蛋白的融合蛋白的质粒，以及表达包含内含肽
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C端
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荧光蛋白
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C蛋白的融合蛋白的质粒；或者所述质粒体系中包含一同时表达荧光蛋白
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N
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内含肽
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N端蛋白的融合蛋白以及内含肽
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C端
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荧光蛋白
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C蛋白的融合蛋白的质粒；其中荧光蛋白
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N与荧光蛋白
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C组合后形成完整的荧光蛋白，或者荧光蛋白
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N与荧光蛋白
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C为完整荧光蛋白的部分氨基酸。2.根据权利要求1所述的内含肽偶联荧光蛋白质粒体系，其特征在于：当荧光蛋白
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N与荧光蛋白
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C为完整荧光蛋白的部分氨基酸时，还包括表达完整荧光蛋白剩余部分氨基酸的质粒。3.根据权利要求1或2所述的内含肽偶联荧光蛋白质粒体系，其特征在于：所述内含肽为能拆分成N端和C端的断裂内含肽，所述内含肽为Npu DnaE、Ssp DnaE、Ssp DnaB、Mxe GyrA或Ssa DnaH。4.根据权利要求1或2所述的内含肽偶联荧光蛋白质粒体系，其特征在于：所述融合蛋白表达基因的启动子为T7启动子。5.根据权利要求2所述的内含肽偶联荧光蛋白质粒体系，其特征在于：所述荧光蛋白为GFP，所述荧光蛋白
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N
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内含肽
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N端蛋白的融合蛋白的序列如SEQ ID No.3所示，内含肽
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C端
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荧光蛋白
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C蛋白的融合蛋白氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。6.根据权利要求5所述的内含肽偶联荧光蛋白质粒体系，其特征在于：所述质粒体系还表达如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。7.根据权利要求6所述的内含肽偶联荧光蛋白质粒体系，其特征在于：所述质粒体系包括一个序列如SEQ ID No.1所示的质粒。8.一种内含肽偶联荧光蛋白质粒体系的突变菌株，为权利要求1
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7中任一项所述的内含肽偶...

【专利技术属性】
技术研发人员：张志乾，吴嵩，刘丽花，何茜，陈西朋，江翱，吴奕瑞，王帆，杨敏，
申请(专利权)人：广州市乾相生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：