一种结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术属于生物学诊断技术领域，公开了一种结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒及其制备方法，其特征在于，该试剂盒具体包括：(1)DNA提取试剂盒；(2)PCR扩增反应液；(3)基因芯片；(4)各种引物。本发明专利技术在试剂盒中使用了标记有生物素点的DNA序列和扩增结核分枝杆菌复合群的IS6110DNA序列，分别用于监控杂交和PCR体系以及检测是否为结核分枝杆菌复合群，便于操作人员在检测过程出错时，快速区分是在PCR时出错还是在杂交时出错，以便迅速找出发生错误的原因，缩短检测时间。缩短检测时间。缩短检测时间。

【技术实现步骤摘要】
一种结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术属于生物学诊断
，尤其涉及一种结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]我国的结核病和耐药情况都相当严重，是全球22个结核病高负担国家之一，结核病人数位居世界第二，仅次于印度。2000年第四次全国结核病流行病学抽样调查初步结果表明，我国有5.5亿人感染了结核菌；现有肺结核病人451万，其中传染性肺结核病人196万；每年死亡人数约13万，结核病死亡在我国各种死亡原因中居第9位，在传染病中居第一位；耐药结核病人多，总耐药率为27.8％，耐多药率为10.7％，初始耐药率为18.6％，获得性耐药率为46.5％，WHO最近公布的世界38个国家和地区的结核病耐药监测资料中，中国被列为“特别引起警示的国家和地区”之一。面对这种严峻的形势，结核病的预防和治疗已引起国内外学者的高度重视。
[0003]现有技术往往采取PCR
‑
SSCP技术，在建立的分子药敏试验方法中，只能判断基因有无突变，不能检测出突变的部位和性质，某些耐药基因位点呈天本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒及其制备方法，其特征在于，该试剂盒具体包括：(1)DNA提取试剂盒；(2)PCR扩增反应液；(3)基因芯片；(4)各种引物。2.根据权利要求1所述的结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒，其特征在于，所述DNA提取试剂盒包括：微量核酸提取装置、细胞裂解液、清洗液及洗脱液、抽吸装置。3.根据权利要求2所述的结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒，其特征在于，所述微量核酸提取装置包括管状主体，管状主体一端设有用于与抽吸装置连接的接头，另一端为插头，用于与核酸结合的滤芯装置安装于管状主体或插头内；微量核酸提取装置的管状主体与插头为一体或由管状主体与插头两个部件连接而成，其中，所述插头为锥状。4.根据权利要求1所述的结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增反应液各组分的浓度如下：1倍PCR缓冲液，dGTP、dCTP、dATP和dTTP的终浓度各为0.2mmol/L，5
’
端带生物素标记的分枝杆菌16SrRNA、结核分枝杆菌rpoB、katG、embB、rpsL，TaqDNA聚合酶2
‑
5U/100μl。5.根据权利要求1所述的结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒，其特征在于，所述基因芯片包括结核分枝杆菌耐利福平和异烟肼的三个主要耐药基因rpoB、katG和inhA的主要突变位点的核苷酸探针，其中探针为SEQIDNos.1
‑
31或与SEQIDNos.1
‑
31互补的序列；标记有生物素点的DNA序列，序列为SEQ ID No.32；结核分枝杆菌复合群的IS6110DNA序列，作为内控点，序列为SEQ ID No.33。6.根据权利要求5所述的结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒，其特征在于，所述探针5
′
或3
′
端经过胺基化处理。7.根据权利要求1所述的结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒，其特征在于，所述引物包括用于扩...

【专利技术属性】
技术研发人员：马庆庆，林牧，刘木波，
申请(专利权)人：贵州航天医院，
类型：发明
国别省市：