本发明专利技术公开了一种皮落青霉次级代谢产物在抗菌化合物中的应用及其提取纯化方法，本发明专利技术首次从皮落青霉菌种中分离出具有抑制耐甲氧西林表皮葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性的次级代谢产物，该次级代谢产物用于制备耐甲氧西林表皮葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性的药物，具有良好的临床前景。本发明专利技术还提供了从皮落青霉菌种中分离次级代谢产物的方法，具有较好的应用前景。具有较好的应用前景。具有较好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
一种皮落青霉次级代谢产物在抗菌化合物中的应用及其提取纯化方法
[0001]本专利技术属于抗菌化合物
，具体涉及一种皮落青霉次级代谢产物在抗菌化合物中的应用及其提取纯化方法。
技术介绍
[0002]海量的海洋生物物种为获取大量结构多样、活性优良的天然产物提供了宝贵资源。
[0003]大量的研究报道一些海洋生物的次级代谢产物具有显著的生物活性，包括抗菌、抗病毒、抗心血管、抗肿瘤等等。然而，近年来耐药性问题加剧，使开发出安全性高、活性好且不易耐药的抗生素成为必要。随着生命科学及技术的发展，以微生物来源的次级代谢产物越来越受到人们的关注。
[0004]致病菌如金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等，是医院和社区的重要致病菌，可引起各种危及生命的感染，包括坏死性肺炎和皮下脓肿等。由于临床治疗中抗生素的过度使用，金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌等的抗生素耐药性有所增加，研制和发现新型抗生素成为亟需解决的问题。
技术实现思路
[0005]本专利技术所提取纯化的皮落青霉次级代谢产物，提取自皮落青霉S14菌种(拉丁文名称：Penicillium crustosum)，所述皮落青霉S14菌种来源于南海海泥，保藏编号：CCTCC NO：M 20221447。本专利技术皮落青霉次级代谢产物分子式为：C
15
H
11
NO3，结构式如式I：
[0006][0007]本专利技术所述皮落青霉S14菌种，如图1和图2所示，菌丝体呈墨绿色，边缘区域呈白色，有色素生成，无渗出液，菌落背面呈黄色，棉兰染色观察，形态特征与青霉属真菌相近，通过提取菌丝体基因组DNA，并进行序列比对，鉴定为皮落青霉菌种。
[0008]作为本专利技术其中一个方面，本专利技术提供一种皮落青霉次级代谢产物在抗菌化合物中的应用。
[0009]优选地，所述皮落青霉次级代谢产物能够抑制耐甲氧西林表皮葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性。
[0010]具体地，所述抗菌化合物包括抗菌药物及其盐。
[0011]作为本专利技术的另一个方面，本专利技术提供所述的皮落青霉次级代谢产物的提取纯化方法，其由以下步骤组成：
[0012]S1、制备粗提物：将发酵培养得到的皮落青霉加入乙醇浸泡，抽滤得到滤液，将得到的滤液旋转蒸发到原体积的1/4，按照体积比1∶1加入乙酸乙酯萃取，然后再次旋转蒸发得到发酵浸膏，加入甲醇溶解发酵浸膏，得到粗提物；S2、分离纯化：将所述粗提物用硅胶G层析柱分离，采用100
‑
200目的硅胶G，洗脱梯度依次为：二氯甲烷；二氯甲烷∶甲醇＝80∶1；二氯甲烷∶甲醇＝60∶1；二氯甲烷∶甲醇＝40∶1；二氯甲烷∶甲醇＝20∶1；、二氯甲烷∶甲醇＝10∶1；收集并合并二氯甲烷∶甲醇＝20∶1和二氯甲烷∶甲醇＝10∶1的洗脱梯度所得的洗脱产物进行ODS柱层析纯化，洗脱梯度依次为：水；水∶甲醇＝80∶20；水∶甲醇＝60∶40；水∶甲醇＝40∶60；水∶甲醇＝20∶80；甲醇，将水∶甲醇＝20∶80的洗脱梯度所得的洗脱产物进行高效液相层析纯化，流动相为：甲醇∶水＝1∶1，流速2ml/min，得到淡紫色结晶。
[0013]作为本专利技术所述的皮落青霉次级代谢产物的提取纯化方法的一种优选方案：所述皮落青霉菌种，为皮落青霉S14菌种。
[0014]作为本专利技术所述的皮落青霉次级代谢产物的提取纯化方法的一种优选方案：所述发酵培养，是将皮落青霉S14菌种的种子培养液接种到大米固体发酵培养基中，在黑暗环境下置于培养箱中培养三十天，培养温度为28摄氏度。
[0015]作为本专利技术所述的皮落青霉次级代谢产物的提取纯化方法的一种优选方案：所述皮落青霉S14菌种的种子培养液，其制备方法是：将皮落青霉S14菌种接种在PDA培养基平板上，在黑暗环境下置于培养箱中培养3天，培养温度为28摄氏度，当PDA培养基平板上出现单菌落后，将孢子和菌丝刮至200毫升的PDB液体培养基中，在黑暗环境下置于培养箱中培养三天，培养温度为28摄氏度。
[0016]作为本专利技术所述的皮落青霉次级代谢产物的提取纯化方法的一种优选方案：所述大米固体发酵培养基的制备方法：将1千克大米加入到1升蒸馏水中，加入0.075克硫酸镁和33克海水晶，混合均匀，调节pH值约为7.0，按照50g/罐分装，121摄氏度下高压灭菌。
[0017]本专利技术的有益效果：本专利技术首次从皮落青霉菌种中分离出具有抑制耐甲氧西林表皮葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性的次级代谢产物，该次级代谢产物用于制备耐甲氧西林表皮葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性的药物，具有良好的临床前景。本专利技术还提供了从皮落青霉菌种中分离次级代谢产物的方法，具有较好的应用前景。
附图说明
[0018]图1为40倍镜下观察菌丝的棉兰染色图片。
[0019]图2为本专利技术皮落青霉菌落照片。
[0020]图3为本专利技术分离提纯的皮落青霉次级代谢产物的高效液相层析色谱。
[0021]图4为本专利技术分离提纯的皮落青霉次级代谢产物的核磁共振氢谱。
[0022]图5为本专利技术分离提纯的皮落青霉次级代谢产物的核磁共振碳谱。
具体实施方式
[0023]以下由特定的具体实施例说明本专利技术的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明
书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0024]实施例1：
[0025]本专利技术皮落青霉次级代谢产物的提取纯化方法：
[0026]1、种子液制备：将皮落青霉S14菌种接种在PDA培养基平板上，在黑暗环境下置于培养箱中培养3天，培养温度为28摄氏度，当PDA培养基平板上出现单菌落后，将孢子和菌丝刮至200毫升的PDB液体培养基中，在黑暗环境下置于培养箱中培养三天，培养温度为28摄氏度。
[0027]2、菌种发酵培养：4千克接种了种子液的大米固体发酵培养基分别装入80个发酵罐，将步骤1得到的种子液接种到大米固体发酵培养基中，每克大米固体发酵培养基上加入100微升的种子液，分别在黑暗环境下置于培养箱中培养三十天，培养温度为28摄氏度。(所述大米固体发酵培养基制备方法：将1千克大米加入到1升蒸馏水中，加入0.075克硫酸镁和33克海水晶，混合均匀，121摄氏度下高压灭菌，调节pH值为7.0)。
[0028]3、制备粗提物：在发酵培养得到的大米固体发酵培养基及皮落青霉S14菌种的混合发酵产物中加入150毫升/罐的CH3CH2OH，浸泡1O小时，抽滤得到滤液，将得到的滤液旋转蒸发到原体积的1/4，加入乙酸乙酯萃取，其中，加入的乙酸乙酯的体积与滤液的体积比为1∶1，然后再次旋转蒸发，得到发酵浸膏总计35克，加入20毫升的CH3OH溶解发酵浸膏，得到粗提物。
[0029]4、分离纯化：
[0030](1)硅胶层析柱分离：将所述粗提物用硅胶G层析柱分离，采用100
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200目的硅胶G，洗脱液：二氯甲烷
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种皮落青霉次级代谢产物在抗菌化合物中的应用，其特征在于：所述皮落青霉次级代谢产物的化学结构式如式I所示：2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述皮落青霉次级代谢产物能够抑制耐甲氧西林表皮葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述抗菌化合物包括抗菌药物及其盐。4.权利要求1所述的皮落青霉次级代谢产物的提取纯化方法，其特征在于：由以下步骤组成：S1、制备粗提物：将发酵培养得到的皮落青霉加入乙醇浸泡，抽滤得到滤液，将得到的滤液旋转蒸发到原体积的1/4，按照体积比1∶1加入乙酸乙酯萃取，然后再次旋转蒸发得到发酵浸膏，加入甲醇溶解发酵浸膏，得到粗提物；S2、分离纯化：将所述粗提物用硅胶G层析柱分离，采用100
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200目的硅胶G，洗脱梯度依次为：二氯甲烷；二氯甲烷∶甲醇＝80∶1；二氯甲烷∶甲醇＝60∶1；二氯甲烷∶甲醇＝40∶1；二氯甲烷∶甲醇＝20∶1；、二氯甲烷∶甲醇＝10∶1；收集并合并二氯甲烷∶甲醇＝20∶1和二氯甲烷∶甲醇＝10∶1的洗脱梯度所得的洗脱产物进行ODS柱层析纯化，洗脱梯度依次为：水；水∶甲醇＝80∶20；水∶甲醇＝60∶40；水∶甲醇＝40∶60；水∶甲醇＝2...
【专利技术属性】
技术研发人员：安波，冯冬，贲畅，
申请(专利权)人：南京日睿新医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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