一种海洋来源的皮落青霉及其培养方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种海洋来源的皮落青霉及其培养方法和应用，所述皮落青霉皮落青霉(Penicillium crustosum)S14菌种，保藏编号为CCTCC NO：M 20221447。该菌种的代谢产物具有较强抑菌功能，本发明专利技术优化了该菌种的培养基和培养条件，选择抗菌活性化合物产量较高的培养基和培养条件进行发酵，旨在获得更多的目标产物，操作简单，成本低廉。成本低廉。成本低廉。

【技术实现步骤摘要】
一种海洋来源的皮落青霉及其培养方法和应用


[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及一种海洋来源的皮落青霉及其培养方法和应用。

技术介绍

[0002]由于独特的环境条件，海洋孕育的生物资源比陆地环境更为丰富。海洋环境的特殊性，例如高压，温度变化以及缺少营养条件等，在有限空间内得以生存及保护物种的多样性，这使他们进化出一套复杂的
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生存系统
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，例如采用化学策略利用二次代谢产生的大量生物活性分子。
[0003]青霉属真菌属腐生类真菌，是自然界中一类重要的分解者，存在于从土壤到植被、空气、室内环境和各种食品的各种生境中。其可以产生多种多样的次级代谢产物，主要由聚酮类、生物碱、萜类、大环内酯等化学结构类型组成，成为天然药物的重要来源。

技术实现思路

[0004]本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。
[0005]作为本专利技术其中一个方面，本专利技术提供一种海洋来源的皮落青霉(Penicillium crustosum)S14菌种，其中：所述皮落青霉皮落青霉(Penicillium crustosum)S14菌种，保藏编号为CCTCC NO：M 20221447，于2022年09月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国.武汉.武汉大学。<br/>[0006]作为本专利技术的另一个方面，本专利技术提供所述的海洋来源的皮落青霉 (Penicillium crustosum)S14菌种的培养方法，其由以下步骤组成，
[0007](1)种子液制备；
[0008](2)发酵：将大米固体发酵培养基置于发酵罐中，高压灭菌，将种子液接种于发酵罐中，进行发酵培养，得到发酵产物。
[0009]作为本专利技术所述的海洋来源的皮落青霉(Penicillium crustosum)S14 菌种的培养方法的一种优选方案：步骤(1)中，所述种子液制备，是将S14 菌种接种到PDA平板培养基上，在28℃的温度下培养3d，当平板培养基上有菌丝长出后，用接种环蘸取孢子粉末和菌丝接种至PDB液体培养基中，在28℃的温度下，转速200r/m振荡培养3d。
[0010]作为本专利技术所述的海洋来源的皮落青霉(Penicilliumn crustosum)S14 菌种的培养方法的一种优选方案：步骤(2)中，所述大米固体发酵培养基的配方是：1000g大米、33g海水晶、0.075g硫酸镁、1000.0ml H2O，混合均匀后，调节pH＝7.0
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7.5，121℃高压灭菌。
[0011]作为本专利技术所述的海洋来源的皮落青霉(Penicilliumn crustosum)S14 菌种的培养方法的一种优选方案：步骤(2)中，所述进行发酵培养，是在28℃，黑暗条件下发酵培养30d。
[0012]作为本专利技术的另一个方面，本专利技术提供所述培养方法得到的海洋来源的皮落青霉(Penicillium crustosum)S14菌种在制备抗耐药菌的抗菌化合物中的应用。其中，所述耐药菌，包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和/或耐甲氧西林表皮葡萄球菌。
[0013]作为本专利技术所述所述的应用的一种优选方案：将发酵培养得到的发酵产物，用乙醇浸泡后，超声浸提，减压抽滤得到滤液，减压旋蒸，将减压旋蒸得到的滤液用乙酸乙酯萃取，之后再次减压旋蒸得到发酵浸膏，将所述发酵浸膏用甲醇溶解得到发酵粗提物。
[0014]作为本专利技术所述所述的应用的一种优选方案：将所述发酵粗提物经过硅胶层析柱分离，用二氯甲烷
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甲醇作为洗脱液逐步洗脱，将分离得到的组分进行抗菌活性组分筛选；将筛选得到的活性组分进行抗菌活性组分筛选；将筛选得到的活性组分用ODS柱层析进行进一步纯化，用水
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甲醇作为洗脱液逐步洗脱，将分离得到的组分再次进行抗菌活性组分筛选，将筛选得到的活性组分用 HPLC纯化，得到纯绿青霉醇。
[0015]本专利技术的有益效果：本专利技术筛选一株海洋来源的皮落青霉S14，发现该菌种的代谢产物具有较强抑菌功能，并从该菌种中分离出具有抑菌功能的代谢产物，本专利技术优化了该菌种的培养基和培养条件，选择抗菌活性化合物产量较高的培养基和培养条件进行发酵，旨在获得更多的目标产物，操作简单，成本低廉。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：
[0017]图1为皮落青霉S14在MEA培养基上生长4天的图片。
[0018]图2为皮落青霉S14菌丝棉兰染色显微图片(X40)。
[0019]图3为皮落青霉S14在大米固体培养基和玉米固体培养基上发酵粗提物活性初筛。
[0020]图4为皮落青霉S14在不同培养基和培养条件下的次级代谢产物活性结果。
[0021]图5为纯绿青霉醇的
13
C
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NMR(A)、1H
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NMR(B)、HPLC色谱(C) 图。
具体实施方式
[0022]为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。
[0023]本专利技术菌株：皮落青霉(Penicillium crustosum)S14菌种，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20221447。该菌种分离于我国南海海泥样品。
[0024]实施例1：
[0025]菌株形态鉴定和分子生物学鉴定：
[0026]培养基配方：
[0027]PDA培养基：马铃薯浸粉5g、葡萄糖20g、琼脂20g、海水晶33g、蒸馏水定容至1L，pH＝6.0。
[0028]MEA培养基：麦芽糖提取物20g、蛋白胨1g、葡萄糖20g、CuSO4.5H2O0.005g、ZnSO4.7H2O0.01g、琼脂20g、海水晶33g、蒸馏水容至1L，pH＝7.0，高压灭菌。
[0029]PDB液体培养基：真菌培养基：马铃薯浸粉10g、葡萄糖20g、海水晶 33g、蒸馏水定容至1L，pH＝6.0，高压灭菌。
[0030]制备种子液：将S14菌株接种到PDA平板培养基上，在黑暗条件下，28℃的温度下培养3d，当平板培养基上有菌丝长出后，用接种环蘸取孢子粉末和菌丝接种至200ml PDB液体培养基中，在28℃的温度，黑暗条件下，转速 200r/m振荡培养3d。
[0031]形态鉴定：采用三点法，将步骤(1)得到的种子液接种在MEA平板培养基上，每点接种2ul种子液，待种子液被MEA培养基完全吸收之后，在恒温培养箱本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种海洋来源的皮落青霉(Penicillium crustosum)S14菌种，其特征在于：所述皮落青霉皮落青霉(Penicillium crustosum)S14菌种，保藏编号为CCTCC NO：M 20221447。2.权利要求1所述的海洋来源的皮落青霉(Penicillium crustosum)S14菌种的培养方法，其特征在于：由以下步骤组成，(1)种子液制备；(2)发酵：将大米固体发酵培养基置于发酵罐中，高压灭菌，将种子液接种于发酵罐中，进行发酵培养，得到发酵产物。3.根据权利要求2所述的海洋来源的皮落青霉(Penicillium crustosum)S14菌种的培养方法，其特征在于：步骤(1)中，所述种子液制备，是将S14菌种接种到PDA平板培养基上，在28℃的温度下培养3d，当平板培养基上有菌丝长出后，，用接种环蘸取孢子粉末和菌丝接种至PDB液体培养基中，在28℃的温度下，转速200r/m振荡培养3d。4.根据权利要求2或3所述的海洋来源的皮落青霉(Penicillium crustosum)S14菌种的培养方法，其特征在于：步骤(2)中，所述大米固体发酵培养基的配方是：1000g大米、33g海水晶、0.075g硫酸镁、1000.0ml H2O，混合均匀后，调节pH＝7.0
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【专利技术属性】
技术研发人员：冯冬，安波，贲畅，
申请(专利权)人：南京日睿新医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：