MARCH5在鉴别猪对蓝耳病毒易感性及制备药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了MARCH5在鉴别猪对蓝耳病毒易感性及制备药物中的应用。本发明专利技术研究显示，猪体内MARCH5表达量与PRRSV感染息息相关，PRRSV感染PAMs细胞后MARCH5mRNA和蛋白水平显著升高，MARCH5干扰促进PRRSV复制，MARCH5过表达抑制病毒复制；当猪体内MARCH5表达量较高时，猪对PRRSV具有抗性，反之具有易感性。因此，MARCH5可以作为判定PRRSV易感性或抗性的标准，为鉴别猪对PRRSV易感性以及PRRSV抗性猪的筛选、鉴定和培育奠定了坚实的基础，有利于培育优良品系猪。育优良品系猪。育优良品系猪。

【技术实现步骤摘要】
MARCH5在鉴别猪对蓝耳病毒易感性及制备药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
更具体地，涉及MARCH5在鉴别猪对蓝耳病毒易感性及制备药物中的应用。

技术介绍

[0002]猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)，俗称猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratorysyndrome virus，PRRSV)引起。早在1992年，世界动物卫生组织(OfficeInternational Des Epizooties，OIE)就将该病列为B类传染病。目前，PRRS是养猪业中最重要的传染病之一，几乎分布在所有的养猪国家，在全球对养猪业造成巨大的经济损失。而PRRSV还会引发猪高热病(Porcine high fever syndrome，PHFS)，给养猪业造成了巨大的经济损失，此病是由PRRSV变异而来，具有高热、高致病性及高死亡率。因此，PRRS防控是我国乃至世界的难题。
[0003]目前，PRRS难于防控主要表现在以下几方面：(1)嗜巨噬细胞性和免疫抑制性疾病，PRRSV主要感染免疫细胞
‑‑
猪肺泡巨噬细胞(Porcine alveolarmacrophages，PAMs)，破坏免疫系统，引起免疫抑制，因此有“人中艾滋，猪中蓝耳”之称；(2)病原极易变异，PRRSV是RNA病毒，变异极快，田间弱毒疫苗使用是促使病毒变异的一个重要原因，有文献报道从猪场中分离到与疫苗毒株基因组高度同源的PRRSV致病毒株，且毒力增强，分析有可能是疫苗毒反强或与田间毒株重组；(3)疫苗没有交叉保护力，目前市场上PRRSV商业化疫苗对不同毒株交叉保护力弱；(4)抗体依赖性增强(ADE)，PRRSV的感染会刺激机体产生抗体，但中低效价的抗体不但不能中和病毒，反而对病毒的增殖有促进作用；(5)病毒持续性感染，PRRSV感染后，能够长时间在猪体内检测到病毒血症，PRRSV在体内持续时间长达5个月；(6)混合感染，目前临床上多见蓝耳与其他疾病混合感染，特别是圆环病毒、副猪嗜血杆菌、猪肺疫等与PRRSV的混合感染，使PRRSV的防控难上加难。
[0004]综上，从病原(PRRSV)角度研发的疫苗存在以下问题：产生中和抗体慢、对不同毒株交叉保护力差、疫苗毒带毒时间长、与田间毒株重组产生致病力更强的重组毒。因此，有必要从宿主(猪)遗传角度开展研究，在遗传水平提高宿主对PRRS的抗病力，由于遗传背景与生物抗病性有着紧密的联系，因此，基于基因手段筛选蓝耳病抗性猪的工作，对于该疾病的防控具有不可比拟的优势，重点在于找出PRRSV宿主抗性或易感相关的基因，不仅可以研究蓝耳病的感染机制，还为蓝耳病的治疗和预防提供新办法。例如中国专利CN106191320A公开HPSE基因在筛选抗蓝耳病猪中的应用，通过发掘PRRSV宿主抗病/易感基因，进而培育和筛选抗病(PRRS)猪新品种(系)，探索更多相关基因对于分子层面抗蓝耳病具有重要的意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在提供MARCH5在鉴别猪对蓝耳病毒易感性及制备药物中的应用。具体
地：
[0006]本专利技术的第一个目的是提供MARCH5基因或蛋白的检测试剂的应用。
[0007]本专利技术的第二个目的是提供MARCH5基因在培育抗猪蓝耳病猪品种中的应用。
[0008]本专利技术的第三个目的是提供一种筛选抗蓝耳病猪的方法。
[0009]本专利技术的第四个目的是提供一种提高猪对蓝耳病毒抗性的制剂。
[0010]本专利技术的第五个目的是提供一种培育抗蓝耳病猪的方法。
[0011]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
[0012]本专利技术研究显示，在PRRSV感染PAMs细胞后会促进膜相关环指蛋白5(membrane associated ring
‑
CH
‑
type finger 5,MARCH5)的表达，随着感染时间增加，MARCH5表达量显著升高。而MARCH5干扰促进PRRSV复制，MARCH5过表达抑制PRRSV复制，表明MARCH5的表达量与PRRSV的复制息息相关。同时，研究显示猪体内MARCH5表达量高对蓝耳病毒具有抗性，反之具有易感性，对PRRSV抗性猪的培育具有很好的临床应用价值。
[0013]本专利技术研究的MARCH5 mRNA序列号：XM_001927572，MARCH5蛋白序列号：XP_001927607。
[0014]因此，本专利技术提供：
[0015]MARCH5基因或蛋白的检测试剂在制备检测诊断猪蓝耳病的产品中应用。
[0016]MARCH5基因或蛋白的检测试剂在制备检测诊断猪是否感染蓝耳病毒的产品中的应用。
[0017]实际工作中，诊断标准为：MARCH5表达量异常升高则表示感染蓝耳病毒或患猪蓝耳病。这里所述的“异常升高”是以本领域技术中猪体内MARCH5表达量的普遍水平为依据。
[0018]MARCH5基因或蛋白的检测试剂在筛选抗蓝耳病猪或制备鉴别猪对蓝耳病毒易感性的产品中的应用。
[0019]MARCH5基因或蛋白的检测试剂在制备筛选抗猪蓝耳病治疗药物的产品中的应用。
[0020]实际工作中，筛选标准为：MARCH5表达量越高的猪对蓝耳病毒的抗性越强、越不易感；反之易感性越强。
[0021]另外，作为一种可优选的实施方案，本专利技术提供了一种检测猪MARCH5表达的引物，序列如SEQ ID NO.1～2所示。具体为，上游引物
‑
F(SEQ ID NO.1)：5
′‑
GTGACAGTGATGCAGGTTGT
‑3′
；下游引物MARCH5
‑
R(SEQ ID NO.2)：5
′‑
ATTTGCGCCACAGTCTAAGC
‑3′
。
[0022]具体地，本专利技术还提供了一种筛选抗蓝耳病猪的方法，通过检测猪体内MARCH5表达水平(表达量)来鉴别猪对蓝耳病毒是抗性或易感性。进一步地，鉴别的标准是：MARCH5表达量高的猪对蓝耳病毒具有抗性；反之具有易感性。
[0023]具体操作时，MARCH5表达量的高低以本领域技术中猪体内MARCH5表达量的普遍水平为依据。这里所述的高低是相对的，根据MARCH5表达量异常较高或较低，从而判定猪是否可能对PRRSV具有抗性，对PRRSV的易感性程度。
[0024]更具体地，基于本专利技术实验的结果，鉴别的具体数据标准大致为：当MARCH5表达量高于4.5
±
0.5
×
10
‑2(相对于内参HPRT1)时，猪对病毒有抗性；表达量低于4.5
±
0.5
×
10
‑2(相对于内参HPRT1)时，易感。
[0025]特别地，本专利技术对于M本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.MARCH5基因或蛋白的检测试剂在制备检测诊断猪蓝耳病的产品中应用。2.MARCH5基因或蛋白的检测试剂在制备检测诊断猪是否感染蓝耳病毒的产品中的应用。3.MARCH5基因或蛋白的检测试剂在筛选抗蓝耳病猪或制备鉴别猪对蓝耳病毒易感性的产品中的应用。4.MARCH5基因或蛋白的检测试剂在制备筛选抗猪蓝耳病治疗药物的产品中的应用。5.MARCH5基因或蛋白的表达促进剂或表达激活剂在制备提高猪对蓝耳病毒抗性的制剂中的应用。6.MA...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭春和，张晓晓，陈永杰，何展，严杰聪，王金玲，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：