一种诱导斑点叉尾鮰性别分化的方法技术

本发明专利技术提供一种诱导斑点叉尾鮰性别分化的方法，其包括以下步骤，选择卵黄囊苗在斑点叉尾鮰鱼卵流水孵化装置中孵化出苗，培育至30日龄，培育期间控制水体温度为36

【技术实现步骤摘要】
一种诱导斑点叉尾鮰性别分化的方法


[0001]本专利技术涉及斑点叉尾鮰培育
，具体涉及一种诱导斑点叉尾鮰性别分化的方法。

技术介绍

[0002]斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)，属鲶形目(Siluriformes)鮰科(Ictaluridae)，原产于北美，是美国最主要的淡水养殖品种，养殖产量占美国鱼类养殖产量的60％以上。自2013年起，我国的斑点叉尾鮰养殖产量超越美国，成为世界最大的斑点叉尾鮰养殖和消费国家。相较于斑点叉尾鮰雄鱼，雌鱼生长较为缓慢，且较大的卵巢组织一定程度上降低了其可食用比例，因此雄鱼在流通市场上更受欢迎。
[0003]性别二态性是自然界中的常见现象。在鱼类中，大多数种类由于存在生长、性成熟年龄、体型、体色等性别二态性现象，使得其中的一种性别具有更大的经济价值，雌雄个体经济价值的不同在一定程度上制约了其产业的发展。因此，越来越多的育种工作者开始探索性别控制育种，培育具有更大经济价值的单性品种。

技术实现思路

[0004]为了克服现有技术中存在的不足，本专利技术提供一种诱导斑点叉尾鮰性别分化的方法。在斑点叉尾鮰全雄鱼的选育过程中，获得稳定遗传的XY伪雌鱼是最为核心的环节。本专利技术以培育斑点叉尾鮰全雄品种为对象，着力开展温度诱导其XY型雄鱼雌性化研究。在伪雌鱼性成熟后，通过与正常雄鱼杂交或采用雌核发育策略获得YY型超雄鱼，超雄鱼再与正常雌鱼杂交即可培育出全雄鱼。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供一种诱导斑点叉尾鮰性别分化的方法，其包括以下步骤，
[0006]选择卵黄囊苗在斑点叉尾鮰鱼卵流水孵化装置中孵化出苗，培育至30日龄，培育期间控制水体温度为36
±
0.5℃，上调foxl2基因的表达实现性别逆转；
[0007]待卵黄囊褪去，仔鱼上游觅食后，先投喂卤虫开口饵料，然后根据体长投喂对应的微粒饲料；
[0008]30日龄试验鱼养殖至室外水泥池中，饲料更换为商品饲料，每日上、下午各投喂一次，日投喂量为鱼体重的3％，继续培育即可。
[0009]优选的，XY雌性斑点叉尾鮰dmrt1基因未被完全抑制。
[0010]优选的，所述微粒饲料，其成分为粗蛋白≥50％，粗脂肪≥8％，粗纤维≤3％，粗灰分≤16.5％，钙≤5％，总磷≥1％，水分≤12％，赖氨酸≥2％。
[0011]优选的，所述商品饲料，其成分为粗蛋白≥30％，水分≤12％，粗纤维≤10％，粗灰分≤13％，粗脂肪≥3％，总磷≥1％，赖氨酸≥1.5％。
[0012]本专利技术提供一种斑点叉尾鮰伪雌鱼。
[0013]本专利技术提供foxl2基因在诱导斑点叉尾鮰性别分化的应用，其为：上调foxl2基因
的表达。
[0014]优选的，抑制dmrt1基因的表达。
[0015]优选的，foxl2基因编码区的反应引物序列如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2所示；dmrt1基因编码区的反应引物序列如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4所示。
[0016]本专利技术提供用于鉴别斑点叉尾鮰性别的引物，其特征在于：引物序列如SEQ ID NO：1
‑
SEQ ID NO：4所示。
[0017]本专利技术的有益效果如下：
[0018]本专利技术通过高温胁迫获得了斑点叉尾鮰雄性性别分化的控制方法。前期试验发现在斑点叉尾鮰中通过提高温度能够使其性腺向雌性化方向分化发育，这为斑点叉尾鮰的性控制研究提供了新的思路。斑点叉尾鮰的卵巢分化起始于受精后的第19d，而精巢的分化晚于卵巢，一般在受精后的第90～102d开始。在斑点叉尾鮰的卵黄囊苗时期提高养殖水体温度，以诱导斑点叉尾鮰向雌性化方向分化。比较不同处理组生长数据，并利用组织学切片技术观察其性腺分化与发育情况；同时，采用qRT
‑
PCR方法分别检测雄性性别标志基因dmrt1基因和雌性性别标志基因foxl2基因在XX和XY伪雌鱼卵巢中的表达水平。本试验分别探究温度对斑点叉尾鮰生长及性腺分化的影响及不同温度对性腺分化影响的潜在机制，为温度影响斑点叉尾鮰分化机制奠定基础，同时为日后建立环境友好型的斑点叉尾鮰性别控制育种模式提供前期探索。
附图说明
[0019]图1为60日龄斑点叉尾鮰卵巢组织图像，其中，图A、C、G是T
‑
30、T
‑
33、T
‑
36组中XX雌鱼的卵巢组织切片图，图E、I是T
‑
33、T
‑
36组中XY伪雌鱼的卵巢组织切片图；图B、D、H是T
‑
30、T
‑
33、T
‑
36组中XX雌鱼的卵巢组织解剖图，图F、J是T
‑
33、T
‑
36组XY伪雌鱼的卵巢组织解剖图；
[0020]图2为斑点叉尾鮰性别分化基因表达图，其中图A为斑点叉尾鮰雄性性别分化基因dmrt1表达图，图B为斑点叉尾鮰雌性性别决定基因foxl2表达图。
具体实施方式
[0021]为更好的说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本申请作进一步说明。
[0022]实施例1：
[0023]试验所选用的斑点叉尾鮰亲鱼来自国家级江苏斑点叉尾鮰遗传育种中心。健康亲鱼交配产卵后，选取活力旺盛的受精卵，在斑点叉尾鮰鱼卵流水孵化装置中孵化出苗。使用加热棒进行水体加热，设置(30
±
0.5)℃(T
‑
30，CK)、(33
±
0.5)℃(T
‑
33)和(36
±
0.5)℃(T
‑
36)3个温度组，初始水温为28℃，每隔12h升温1℃，至水温到达设定温度后持续保持温度恒定。每个试验组设置3个平行，每个平行放置800尾鱼苗(规格:52尾/g)，试验从卵黄囊苗的培育开始，进行为期30d的温度诱导试验。待卵黄囊褪去，仔鱼上游觅食后，先投喂开口饵料，然后投喂微粒饲料(粗蛋白≥50％，粗脂肪≥8％，粗纤维≤3％，粗灰分≤16.5％，钙≤5％，总磷≥1％，水分≤12％，赖氨酸≥2％)(山东升索饲料科技有限公司)，根据仔鱼的生长情况(体长)制定的开口饵料及微粒饲料调整方案如表1所示。30日龄试验鱼养殖至室外
水泥池(5m
×
5m
×
1m)中，饲料更换为商品饲料(粗蛋白≥30％，水分≤12％，粗纤维≤10％，粗灰分≤13％，粗脂肪≥3％，总磷≥1％，赖氨酸≥1.5％)(南京市澳华生物科技有限公司)。每日上、下午各投喂一次，日投喂量为鱼体重的3％。
[0024]表1开口饵料及微粒饲料调整方案
[0025][0026]生长数据采集：在60日龄时，采用
‑
氨基苯甲酸乙酯甲基磺酸盐(MS
‑
222)(Merck，德国)浸润麻醉，统计各组中试验鱼的存活情况，从各试验组中随机选取100尾试本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诱导斑点叉尾鮰性别分化的方法，其特征在于：包括以下步骤，选择卵黄囊苗在斑点叉尾鮰鱼卵流水孵化装置中孵化出苗，培育至30日龄，培育期间控制水体温度为36
±
0.5℃，上调foxl2基因的表达实现性别逆转；待卵黄囊褪去，仔鱼上游觅食后，先投喂卤虫开口饵料，然后根据体长投喂对应的微粒饲料；30日龄试验鱼养殖至室外水泥池中，饲料更换为商品饲料，每日上、下午各投喂一次，日投喂量为鱼体重的3％，继续培育即可。2.如权利要求1所述的诱导斑点叉尾鮰性别分化的方法，其特征在于：XY雌性斑点叉尾鮰dmrt1基因未被完全抑制。3.如权利要求1所述的诱导斑点叉尾鮰性别分化的方法，其特征在于：所述微粒饲料，其成分为粗蛋白≥50％，粗脂肪≥8％，粗纤维≤3％，粗灰分≤16.5％，钙≤5％，总磷≥1％，水分≤12％，赖氨酸≥2％。4.如权利要求1所述的诱导斑点叉尾鮰性别分化的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：张世勇，徐思琪，陈校辉，王明华，钟立强，边文冀，
申请(专利权)人：江苏省淡水水产研究所，
类型：发明
国别省市：