微囊泡分离方法及微囊泡分离装置制造方法及图纸

公开了一种微囊泡分离方法以从样品中分离生物样品中含有的微囊泡，该方法包括：(a)向其中含有微囊泡的生物样品中添加吸附球；(b)将吸附球保持在生物样品中以形成由吸附球和其上捕获的微囊泡组成的吸附球缀合物；(c)从生物样品中分离吸附球缀合物；(d)使用第一试剂洗涤分离的吸附球缀合物；和(e)使用第二试剂从洗涤的吸附球缀合物中洗脱微囊泡，其中吸附球包括载体和设置在载体表面上的一种或多种多价阳离子。种多价阳离子。种多价阳离子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】微囊泡分离方法及微囊泡分离装置


[0001]本专利技术涉及从生物样品中分离微囊泡的方法和微囊泡分离装置。

技术介绍

[0002]微囊泡是一种从细胞中释放的膜囊泡，并且包括外泌体或胞外囊泡。来自不同细胞来源的微囊泡具有亲代细胞的特征，并且因此作为一种新的疾病诊断标志物受到关注。然而，微囊泡具有50～200nm的非常小的尺寸，使得难以提取微囊泡。
[0003]用于分离胞外囊泡的常规技术包括超速离心分离、体积排阻、免疫亲和分离、微流体芯片和聚合方法等。其中，超速离心分离是分离胞外囊泡最广泛使用的方法，并且由于其原理简单，是最可靠的分离方法。
[0004]然而，当使用这种超速离心分离来分离微囊泡时，微囊泡的产率低，并且需要大量时间来分离微囊泡(8小时或更长)。此外，超速离心分离需要提取专业人士，并且需要昂贵的设备，因此在成本方面是不利的。
[0005]体积排阻主要与超速离心分离方法一起使用，并且具有简单地提高微囊泡纯度的优点，但是由于微囊泡粘附在过滤器上，因此具有产率低的局限。
[0006]免疫亲和分离包括将抗体附着到胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种从样品中分离包含在生物样品中的微囊泡的微囊泡分离方法，所述方法包括：(a)将吸附球添加到其中包含所述微囊泡的所述生物样品中；(b)将所述吸附球保持在所述生物样品中以形成由所述吸附球和在其上捕获的所述微囊泡组成的吸附球缀合物；(c)从所述生物样品中分离所述吸附球缀合物；(d)使用第一试剂洗涤分离的所述吸附球缀合物；和(e)使用第二试剂从洗涤的所述吸附球缀合物中洗脱所述微囊泡，其中，所述吸附球包括载体和设置在所述载体表面上的一种或多种多价阳离子。2.根据权利要求1所述的微囊泡分离方法，其中，所述生物样品包括血液、血浆、血清、尿液、唾液、脑脊液、眼泪、汗液、粪便、腹水、羊水、精液、乳汁、细胞培养基、组织提取物和癌组织中的至少一种。3.根据权利要求1所述的微囊泡分离方法，其中，所述载体包括聚丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、聚乙二醇、聚苯乙烯
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乙烯基苯、聚苯乙烯、水凝胶、琼脂糖、陶瓷、硅胶、乳胶、金属颗粒、玻璃颗粒、磁颗粒、金属线或其上结合有磁性纳米颗粒的金属线中的至少一种。4.根据权利要求3所述的微囊泡分离方法，其中，所述多价阳离子包括聚赖氨酸、鱼精蛋白、聚精氨酸、聚组氨酸、阳离子葡聚糖、阳离子树枝状聚合物、阳离子多糖、聚酰胺胺、聚乙烯亚胺、聚季铵、聚甲基丙烯酸
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二甲基氨基乙酯(PDMAEMA)、聚(2
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二甲基氨基甲基苯乙烯)(PDMAMS)、聚
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乙烯基吡咯烷酮(p1
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VP)、聚丙烯酸二乙基氨基乙酯(pDEAEA)、聚丙烯酸二甲基氨基乙酯(pDMAEA)、聚甲基丙烯酸二乙基氨基乙酯(pDEAMA)、脂多胺、季铵、胍、咪唑、聚苯胺、聚吡咯或壳聚糖中的至少一种。5.根据权利要求3所述的微囊泡分离方法，其中，所述载体具有球形形状，并且所述载体的平均直径在200nm至100μm的范围内，且该范围包括两个端点值。6.根据权利要求1所述的微囊泡分离方法，其中，所述载体包括多孔颗粒、多孔膜或多孔网中的至少一种。7.根据权利要求1所述的微囊泡分离方法，其中，所述载体进一步包括在所述载体表面上形成的不规则。8.根据权利要求1所述的微囊泡分离方法，其中，所述载体为磁珠，所述磁珠包含选自铁(Fe)、镍(Ni)、钴(Co)、锰(Mn)、铋(Bi)和锌(Zn)的至少一种金属或其合金，或选自铁(Fe)、镍(Ni)、钴(Co)、锰(Mn)、铋(Bi)和锌(Zn)中的金属的金属氧化物或合金氧化物。9.根据权利要求1所述的微囊泡分离方法，其中，所述载体包括作为其内部部分的核，和设置成围绕所述核的外表面的壳，其中，所述核包含聚丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、聚乙二醇、聚苯乙烯
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乙烯基苯、聚苯乙烯、水凝胶、琼脂糖、陶瓷、硅胶或乳胶中的至少一种，其中，所述壳包含选自铁(Fe)、镍(Ni)、钴(Co)、锰(Mn)、铋(Bi)和锌(Zn)中的至少一种金属或其合金，或选自铁(Fe)、镍(Ni)、钴(Co)、锰(Mn)、铋(Bi)和锌(Zn)中的金属的金属氧化物或合金氧化物，其中，所述多价阳离子包括聚
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L
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赖氨酸聚合物(PLL)、鱼精蛋白、季铵、壳聚糖或聚组氨酸中的至少一种。
10.根据权利要求1所述的微囊泡分离方法，其中，所述载体包括作为其内部部分的核，和设置成围绕所述核的外表面的壳，其中，所述核包含选自铁(Fe)、镍(Ni)、钴(Co)、锰(Mn)、铋(Bi)和锌(Zn)中的至少一种金属或其合金，或选自铁(Fe)、镍(Ni)、钴(Co)、锰(Mn)、铋(Bi)和锌(Zn)中的金属的金属氧化物或合金氧化物，其中，所述壳包含聚丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、聚乙二醇、聚苯乙烯
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乙烯基苯、聚苯乙烯、水凝胶、琼脂糖、陶瓷、硅胶或乳胶中的至少一种，其中，所述多价阳离子包括聚
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L
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赖氨酸聚合物(PLL)、鱼精蛋白、季铵、壳聚糖或聚组氨酸中的至少一种。11.根据权利要求1所述的微囊泡分离方法，其中，在步骤(b)中，将所述吸附球保持在所述生物样品中包括在1℃至8℃的温度以及在50rpm至150rpm下搅拌所述吸附球10分钟至2小时。12.根据权利要求1所述的微囊泡分离方法，其中，在步骤(c)中，使用分离构件分离所述吸附球缀合物，其中，所述分离构件包括捕获过滤器、磁分离、离心分离、基于溶解度的分离或基于颗粒尺寸的分离中的至少一种。13.根据权利要求1所述的微囊泡分离方法，其中，步骤(d)包括使用所述第一试剂在第一条件下洗涤具有在其上捕获的所述微囊泡的所述吸附球，其中，所述第一试剂包含CH3COO
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、SO

【专利技术属性】
技术研发人员：申世铉，金炫成，
申请(专利权)人：高丽大学校算学协力团，
类型：发明
国别省市：