一种检测细胞样品的特征参数的方法技术

本说明书实施例提供了一种检测细胞样品的特征参数的方法。所述方法包括：使用染色液对细胞样品进行染色，所述染色液包括吖啶橙和碘化丙啶，其中所述吖啶橙和所述碘化丙啶的质量浓度的比值在0.375:1000

【技术实现步骤摘要】
一种检测细胞样品的特征参数的方法
分案说明
[0001]本申请是针对申请日为2021年7月28日、申请号为CN202110859856.4、专利技术名称为“一种确定荧光通道曝光时间的方法”的中国申请提出的分案申请。


[0002]本说明书涉及生化检测领域，特别涉及一种染色液、细胞特征参数检测方法、确定染色液中染色试剂的配比的方法以及确定荧光成像过程中曝光时间的方法。

技术介绍

[0003]在生化检测领域，常常需要对细胞的数量、细胞活率等参数进行检测。对于细胞活率检测，传统的方法是台盼蓝染色，但是台盼蓝方法在检测冻存的和解冻的细胞的活率方面效果欠佳。吖啶橙(Acridine Orange，AO)和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)为近年来广泛用于细胞染色的荧光染料。用AO和PI同时对细胞样品进行染色后，可以利用AO通道和PI通道，分别采用适合AO的激发光和适合PI的激发光照射细胞样品，并采集相应的荧光图像，用于分析活细胞数目、死细胞数目等参数。因此，需要提供AO/PI染色液的成分配比优化方法、曝光时间优化方法以及检测效果更好的AO/PI染色液。

技术实现思路

[0004]本说明书实施例之一提供一种用于细胞染色的染色液。所述细胞染色的染色液包括：吖啶橙和碘化丙啶，其中所述吖啶橙和所述碘化丙啶的质量浓度的比值在0.375:1000
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50:1000范围之内，并且所述染色液的pH值在7.0
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8.0范围之内。
[0005]本说明书实施例之一提供一种染色液的配制方法，所述方法包括：获取吖啶橙溶液；获取碘化丙啶溶液；配制缓冲液；以及将所述吖啶橙溶液、碘化丙啶溶液与缓冲液混合均匀，得到所述染色液。
[0006]本说明书实施例之一提供一种检测细胞样品的特征参数的方法，所述方法包括：使用前述染色液对细胞样品进行染色；通过荧光显微成像，获取染色后的细胞样品的吖啶橙通道荧光图像和碘化丙啶通道荧光图像；基于所述吖啶橙通道荧光图像和所述碘化丙啶通道荧光图像，确定所述细胞样品的特征参数，所述特征参数包括以下参数中的一项或多项：总细胞个数、活细胞个数、死细胞个数、总细胞浓度、活细胞浓度、死细胞浓度以及细胞活率。
[0007]本说明书实施例之一提供一种确定荧光通道曝光时间的方法。该方法可以用于多荧光通道的荧光成像设备。所述方法可以包括：基于一个或多个第一目标荧光图像和一个或多个第二目标荧光图像，确定第一通道的一个或多个第一目标曝光时间和第二通道的一个或多个第二目标曝光时间。在一些实施例中，所述一个或多个第一目标荧光图像是以混合染色样本为基础，使用第一通道在一个或多个第一候选曝光时间下采集的。在一些实施例中，所述一个或多个第二目标荧光图像是以所述混合染色样本为基础，使用第二通道在
一个或多个第二候选曝光时间下采集的。在一些实施例中，所述混合染色样本是使用含有第一染色试剂和第二染色试剂的混合染色液进行染色的死细胞样品。在一些实施例中，所述第一候选曝光时间和第二候选曝光时间是由以下步骤确定的：基于使用含有所述第一染色试剂的第一染色液进行染色的活细胞样品，确定对应于所述第一染色试剂的所述第一通道的一个或多个第一有效显色曝光时间；基于使用含有所述第二染色试剂的第二染色液进行染色的死细胞样品，确定对应于所述第二染色试剂的所述第二通道的一个或多个第二有效显色曝光时间；确定所述第二通道对应的一个或多个有效去噪曝光时间；以及基于所述一个或多个第一有效显色曝光时间、所述一个或多个第二有效显色曝光时间和所述一个或多个去噪曝光时间，确定所述第一通道的所述一个或多个第一候选曝光时间和所述第二通道的所述一个或多个第二候选曝光时间。
[0008]本说明书实施例之一提供一种确定染色液成分配比及匹配的荧光通道曝光时间的方法，其特征在于，所述染色液包括第一染色试剂和第二染色试剂，所述方法包括：基于一组或多组目标荧光图像，确定所述第一染色试剂对应的一个或多个目标浓度、所述第二染色试剂对应的一个或多个目标浓度、所述第一通道对应的一个或多个第一目标曝光时间和所述第二通道对应的一个或多个第二目标曝光时间。在一些实施例中，所述一组或多组目标荧光图像是使用一种或多种混合染色液对一个或多个死细胞样品分别染色后采集的。在一些实施例中，所述一种或多种混合染色液是用所述第一染色试剂和所述第二染色试剂按照所述一个或多个候选浓度曝光时间组合配制而成的。在一些实施例中，所述候选浓度曝光时间组合是由以下步骤确定的：确定所述第一染色试剂的用于活细胞显色的一个或多个第一有效显色浓度及匹配的一个或多个第一有效显色曝光时间，所述一个或多个第一有效显色曝光时间对应于所述第一染色试剂关联的第一通道；确定所述第二染色试剂的用于死细胞显色的一个或多个第二有效显色浓度及匹配的一个或多个第二有效显色曝光时间，所述一个或多个第二有效显色曝光时间对应于所述第二染色试剂关联的第二通道；基于使用含有所述第一染色试剂的第一染色液进行染色的一个或多个死细胞样品，确定第一染色试剂的一个或多个有效去噪浓度及匹配的对应于所述第二通道的一个或多个有效去噪曝光时间；基于所述一个或多个第一有效显色浓度、所述一个或多个第一有效显色曝光时间、所述一个或多个第二有效显色浓度、所述一个或多个第二有效显色曝光时间、所述一个或多个有效去噪浓度和所述一个或多个有效去噪曝光时间，确定满足预设条件的一个或多个候选浓度曝光时间组合。
附图说明
[0009]本说明书将以示例性实施例的方式进一步说明，这些示例性实施例将通过附图进行详细描述。这些实施例并非限制性的，在这些实施例中，相同的编号表示相同的结构，其中：
[0010]图1为根据本说明书一些实施例所示的细胞样品检测系统100的应用场景示意图；
[0011]图2是根据本说明书一些实施例所示的处理设备的模块图；
[0012]图3是根据本说明书一些实施例所示的确定第一染色试剂和第二染色试剂目标浓度的实验流程图；
[0013]图4是根据本说明书一些实施例所示的确定第一通道的第一目标曝光时间和第二
通道的第二目标曝光时间的实验流程图；
[0014]图5是根据本说明书一些实施例所示的确定第一染色试剂的目标浓度、第二染色试剂的目标浓度、第一通道的第一目标曝光时间和第二通道的第二目标曝光时间的实验流程图；
[0015]图6是根据本说明书一些实施例所示的对照染色液在不同条件下测试的细胞活率曲线图；
[0016]图7是根据本说明书一些实施例所示的对照染色液在不同重悬条件下的荧光图像；
[0017]图8是根据本说明书一些实施例所示的测试染色液在不同条件下测试的细胞活率曲线图；
[0018]图9是根据本说明书一些实施例所示的测试染色液在不同重悬条件下的荧光图像；
[0019]图10是根据本说明书一些实施例所示的使用含4.0μg/mL染色试剂AO和800μg/mL染色试剂PI的混合染色液进行染色的死细胞样品分别在AO通道和PI通道采集的荧光图像。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测细胞样品的特征参数的方法，其特征在于，所述方法包括：使用一种染色液对细胞样品进行染色，所述染色液包括吖啶橙和碘化丙啶，其中所述吖啶橙和所述碘化丙啶的质量浓度的比值在0.375:1000
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50:1000范围之内；通过荧光显微成像，获取染色后的细胞样品的吖啶橙通道荧光图像和碘化丙啶通道荧光图像；以及基于所述吖啶橙通道荧光图像和所述碘化丙啶通道荧光图像，确定所述细胞群的特征参数，所述特征参数包括以下参数中的一项或多项：总细胞个数、活细胞个数、死细胞个数、总细胞浓度、活细胞浓度、死细胞浓度以及细胞活率。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述获取染色后的细胞样品的吖啶橙通道荧光图像和碘化丙啶通道荧光图像包括：使用400～505nm的入射光照射所述染色后的细胞样品以获取所述吖啶橙通道荧光图像。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在获取所述吖啶橙通道荧光图像的过程中，使用510～550nm滤光片。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述获取染色后的细胞样品的吖啶橙通道荧光图像和碘化丙啶通道荧光图像包括：使用450～550nm的入射光照射所...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗浦文，陈凯，姜晶，
申请(专利权)人：上海睿钰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：